Valore diagnostico della frammentazione del DNA dello sperma e della morfologia dello sperma per il trattamento della riproduzione assistita

Questo studio sarà condotto in centri privati ​​per la fecondazione in vitro. Lo scopo di questo studio è determinare il valore prognostico dei livelli di frammentazione del DNA dello sperma prima e dopo l'elaborazione del seme e la morfologia dello sperma nel predire l'esito della riproduzione assistita.

60 coppie si sottoporranno a cicli di ICSI in centri privati ​​per fecondazione in vitro. Tutti i pazienti passeranno attraverso un ciclo ICSI. Monitoraggio: la COH sarà monitorata mediante ecografia transvaginale, quindi la dose di gonadotropina sarà aggiustata in base alla dimensione e al numero dei follicoli.

Attivazione dell'ovulazione: quando tre o più follicoli raggiungono > 18 mm, la linea tripla dell'endometrio è superiore a 8 mm, verranno interrotte sia le iniezioni di gonadotropina che di agonista e verranno somministrate 10.000 UI di hCG.

Raccolta delle uova: 34-36 ore dopo l'iniezione di hCG, trasferimento dell'embrione: 48-72 ore dopo il prelievo degli ovociti. Supporto della fase luteale: con 100 mg di progesterone iniettato per via intramuscolare al giorno fino al giorno del test di gravidanza.

test di gravidanza: 15 giorni dopo il trasferimento dell'embrione. Raccolta e preparazione del seme. I campioni di seme verranno raccolti mediante masturbazione in contenitori puliti, di solito dopo 2-3 giorni di astinenza. Ogni campione sarà lasciato liquefare per almeno 20 min a 37 °C.

Analisi del seme:

I parametri spermatici di base tra cui conta, concentrazione, motilità e morfologia degli spermatozoi saranno valutati secondo le linee guida dell'Organizzazione Mondiale della Sanità. Dopo la valutazione iniziale, gli eiaculati saranno divisi in tre aliquote. Un'aliquota di ciascun campione verrà utilizzata per valutare il danno al DNA dello spermatozoo, la seconda aliquota verrà elaborata mediante tecnica di swim-up diretto (n 30) o tecnica di test zeta (n 30) a cui seguirà nuovamente la valutazione del danno al DNA in ciascun campione campione per misurare la differenza nel danno al DNA dopo l'elaborazione in ciascuna tecnica, quindi gli spermatozoi della terza aliquota saranno analizzati morfologicamente manualmente utilizzando la colorazione spermatica e un microscopio ottico e saranno valutati secondo l'OMS.

Saggio di frammentazione del DNA:

La valutazione del danno al DNA sarà misurata prima e dopo l'elaborazione per ciascun campione utilizzando una versione migliorata del test di dispersione della cromatina spermatica. I campioni saranno preparati per l'analisi. fase di colorazione sarà necessaria per valutare i vetrini preparati. I campioni saranno colorati con la soluzione Diff-Quik, immergendo ciascun vetrino nella soluzione Diff-Quik I (eosinofilo) e nella soluzione Diff-Quik II (basofilo) per 6 minuti ciascuno, lasciato asciugare a temperatura ambiente. Quindi il vetrino sarà esaminato al microscopio in campo chiaro.