Проспективное исследование прогностической и прогностической роли циркулирующих опухолевых клеток у пациентов с плоскоклеточным раком ротоглотки: CTCO (циркулирующие опухолевые клетки в ротоглотке) (CTCO)

Рак головы и шеи (РГШШ) — это преимущественно плоскоклеточный рак, представленный опухолями верхних отделов пищеварительного тракта. Местно-распространенные стадии (стадии III и IV) составляют от 50 до 70% всех проявлений. Тремя основными факторами риска являются курение, употребление алкоголя и заражение ротоглотки вирусом папилломы человека (ВПЧ).

Помимо статуса ВПЧ, не существует биомаркеров для прогноза у пациентов с HSNCC. Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) могут предоставлять информацию о поведении опухоли в режиме реального времени и уже используются при различных видах рака (толстой кишки, легких). Их обнаружение имеет ограниченную чувствительность, и биомаркеры не могут использоваться для ранней диагностики, но могут быть полезны во время последующего наблюдения для оценки местного, регионарного или метастатического раннего рецидива опухоли.

Используя образцы крови в разное время (при постановке диагноза, после первоначального лечения и во время последующего наблюдения), мы сможем измерить вариацию количественного определения и установить прогностическую роль этих ЦОК для ответа на лечение.

Наша гипотеза состоит в том, что ЦОК могут играть ключевую роль, помимо клинического и радиологического обследования, в выявлении раннего рецидива опухоли.

Мы считаем, что совместное рассмотрение клинических параметров, стратегии лечения и количественного определения ЦОК может оптимизировать последующее наблюдение и ведение пациентов.

Система экстракции CTC, ClearCell® FX от Biolidics, представляет собой автоматизированную систему микрожидкостного обогащения. Его преимущество заключается в восстановлении полностью интактных и жизнеспособных ЦОК из стандартного образца крови. Принцип щадящей сортировки позволяет сохранить целостность клеток и, таким образом, экспрессию поверхностных антигенов. Выделенные таким образом ЦОК можно затем повторно культивировать или анализировать с помощью иммуноокрашивания. Этот высокоэффективный метод, применяемый с декабря 2017 года в отделении биохимии профессора Клэр Родригес-Лафрас (HCL), продемонстрировал свою полезность при раке легких.

Транскриптомный анализ ЦОК можно проводить в масштабе клетки после выделения ЦОК. Затем ЦОК можно секвенировать в RNAseq либо массово (пул клеток), либо клетка за клеткой на нашем секвенаторе Illumina (Nextseq), чтобы определить гетерогенность опухоли. Затем анализ транскриптома предоставляет информацию о состоянии клетки относительно ее положения в эпителио-мезенхимальном переходе благодаря молекулярной сигнатуре по фенотипу. Таким образом, возможна априорная характеристика благодаря одноклеточному RNAseq. Этот высокочувствительный и инновационный метод позволит изучить профиль экспрессии генов ЦОК.