三种不同漱口水在牙菌斑控制和早期伤口愈合中的有效性

材料和方法

患者登记和所有临床程序均在希腊雅典国立和卡波季斯特里安大学牙科学院牙周病学系进行。

临床程序：

所有外科手术均由一年级和三年级的住院医师进行。 术前立即对手术区域进行龈上清创和抛光。 在残留牙周袋消除/缩小手术的情况下，应用牙沟内切口，然后在牙间区域进行乳头保留切口。 在牙冠延长病例中，在存在足够宽度的角化组织（≥ 3mm）的情况下应用切除性牙龈切口。 皮瓣抬高后，根面用仪器和超声设备彻底清创。 酌情应用硬质合金车针进行截骨术/骨成形术。 颊侧和腭侧/舌侧瓣完全适应并用单丝缓慢吸收缝合线缝合在一起。 未使用牙周敷料。 没有开具全身性抗生素。 建议在手术干预后立即服用布洛芬 400 毫克，每天 3 次，持续 4 天。 建议吸烟者在术后第一周停止吸烟。 术后第 7 天拆线。 在此期间，没有意外丢失缝合线的记录。

随机化和分配隐藏：

使用计算机化分配程序（随机序列生成器，www.random.org）将受试者随机分配到三组之一 由考官 A.G. 生成 每个受试者都被赋予了 1 到 42 之间的相同数字。 参与者收到装有正在调查的三种解决方案之一的瓶子。 患者和临床医生（外科医生和检查员 A.G.）均未被告知每种情况下使用的漱口水的特性（双盲设计）。 第三位非牙医的独立人员（研究生诊所的协助人员）将带面具的瓶子交给了参与者。

手术后维护协议：

在术后的前 14 天，参与者被要求每天两次用 15 毫升给药溶液冲洗一分钟。

在同一时期，受试者避免在手术区域进行任何机械去除牙菌斑。

检查员内部的可重复性：

在研究开始之前，对执行测量的检查员 (A.G.) 进行了校准，以建立检查员内部的可重复性。 对未包括在研究中的两名受试者进行了校准。 在使用 0.12% 洗必太进行术后维护期间，在术后第 7 天，在同一天的两个不同场合记录早期伤口愈合指数 (EHI) 和斑块指数 (PI)，但至少间隔 8 小时。 类内相关分析用于计算重复测量的考官内部一致性。 如果两个测量值相似且偏差为 +/- 10%（类内相关系数 > 0.9），则接受校准。

微生物评估：

在术后第 14 天，使用刮匙分别从两个邻间牙齿表面到具有最高 EHI 值的牙间乳头收集龈上牙菌斑混合样本。 合并的样本分别收集在 150μl TE 缓冲液中。 样品储存在 -80 直到处理，这是在希腊雅典国家科学研究中心 (N.C.S.R.) 生物科学与应用研究所的细胞和基质病理学实验室进行的。 按照革兰氏 (+) 细菌细胞裂解制造商的方案，使用 PureLink® 基因组 DNA Mini 试剂盒分离和纯化细菌基因组 DNA。 通过分光光度法 (NanoDrop 1000) 测定纯化的 DNA 浓度。 使用定量实时 PCR (qPCR) 分析样本，以评估每个合并样本中的总细菌计数。 应用一组通用引物（正向引物：5' TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' 和反向引物：5' GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3'，扩增子大小为 466 个碱基对）进行 qPCR，据报道可检测编码 16S 的基因的 DNA 序列至少 50 种不同细菌（需氧和厌氧革兰氏阳性和革兰氏阴性）的核糖体亚基和 SYBR Green I 荧光探针。 对大肠杆菌纯细菌培养物的 DNA 提取物进行连续稀释，以生成 qPCR 的标准曲线。 在 Light Cycler 96 qPCR 设备中，反应在 94 °C 30 秒、58 °C 45 秒和 72 °C 10 分钟下进行 40 个循环。 使用 Light Cycler 96 1.1 软件分析结果。 每个样品的总细菌计数表示为总细菌 DNA 质量 (ng) 和细菌拷贝数 (x106)。

样本量计算：

通过基于单向方差分析的计算估计样本量，假设最小临床显着差异是至少一对组之间在 14 天时的中位 EHI 值的一个单位。 每组需要 14 名患者才能达到 80% 的功率和检测组间评估参数的中值差异。

统计分析：

样本的人口统计学和临床​​特征按组显示在表格中，表格包含分类变量的绝对和相对 (%) 频率以及定量变量的中位数和四分位数范围（中位数 - IQR）。 通过 Fisher 对分类变量的精确检验和对定量变量的 Kruskal-Wallis 检验，评估了这些特征的组间差异。 通过中位数和 IQR 总结感兴趣指数的分布（早期伤口愈合指数 - EHI、斑块指数 - PI、斑块面积指数 - PA%）。

指数数据通过线性或广义线性混合模型进行分析，同时考虑到对同一个人进行的多次测量之间的潜在相关性。 特别是，对于 EHI 和 PI 的分析，使用了顺序逻辑回归模型。 对于 PA% 指数，它是一个从 0% 到 100% 的比例，在对因变量进行逻辑变换后使用线性模型。 最终的多变量模型的模型选择，包括检查潜在的交互作用，是基于似然比检验的。

在 log10 转换后使用线性回归模型分析组间或与其他样品特征相关的总微生物计数差异。 结果表示为相对差异%。

小于 0.05 的 P 值被认为具有统计学意义。 所有分析均使用统计软件包 Stata 13.1（Stata Corp.，美国）进行。