Wirksamkeit von drei verschiedenen Mundspülungen bei der Kontrolle von Zahnbelag und der frühen Wundheilung

Materialen und Methoden

Die Aufnahme der Patienten und alle klinischen Verfahren wurden in der Abteilung für Parodontologie, Fakultät für Zahnmedizin, Nationale und Kapodistrianische Universität Athen, Griechenland, durchgeführt.

Klinische Verfahren:

Alle chirurgischen Eingriffe wurden von Postgraduierten im ersten und dritten Studienjahr durchgeführt. Supragingivales Debridement und Polieren des operierten Bereichs wurden unmittelbar vor der Operation durchgeführt. In Fällen von Eingriffen zur Eliminierung/Reduktion restlicher Parodontaltaschen wurden intrasulkuläre Inzisionen, gefolgt von Inzisionen zum Erhalt der Papillen in interdentalen Bereichen angewendet. Bei Kronenverlängerungen wurden resektive gingivale Inzisionen bei ausreichender Breite des keratinisierten Gewebes (≥ 3 mm) angelegt. Nach dem Anheben des Lappens wurden die Wurzeloberflächen gründlich mit Instrumenten und Ultraschallgeräten debridiert. Ostektomie/Osteoplastik mit Hartmetallbohrern wurde nach Bedarf durchgeführt. Bukkale und palatinale/linguale Lappen wurden vollständig aneinander adaptiert und mit monofilem, langsam resorbierbarem Nahtmaterial vernäht. Parodontalverbände wurden nicht verwendet. Es wurden keine systemischen Antibiotika verschrieben. Ibuprofen 400 mg, dreimal täglich für 4 Tage, wurde unmittelbar nach dem chirurgischen Eingriff empfohlen. Rauchern wurde geraten, in der ersten postoperativen Woche mit dem Rauchen aufzuhören. Die Nähte wurden am 7. postoperativen Tag entfernt. Während dieses Zeitraums wurde kein versehentlicher Nahtverlust verzeichnet.

Randomisierung und Verschleierung der Zuordnung:

Die Probanden wurden unter Verwendung eines computergestützten Zuordnungsverfahrens (Random Sequence Generator, www.random.org) zufällig einer von drei Gruppen zugeordnet. erstellt durch den Prüfer A.G. Jedem Probanden wurde eine identische Nummer zwischen 1 und 42 zugeteilt. Die Teilnehmer erhielten Flaschen mit einer der drei untersuchten Lösungen. Weder Patienten noch Kliniker (Chirurgen und Untersucher A.G.) wurden über die Identität der jeweils verabreichten Mundspülung informiert (doppelblindes Design). Maskierte Flaschen wurden den Teilnehmern von einer dritten unabhängigen Person, die kein Zahnarzt war (Mitglied des Assistenzpersonals der Postgraduiertenklinik), ausgehändigt.

Postoperatives Wartungsprotokoll:

Während der ersten 14 postoperativen Tage wurden die Teilnehmer angewiesen, zweimal täglich eine Minute lang mit 15 ml der verabreichten Lösung zu spülen.

Im gleichen Zeitraum verzichteten die Probanden auf eine mechanische Plaque-Entfernung an den operierten Stellen.

Reproduzierbarkeit innerhalb des Prüfers:

Vor Beginn der Studie wurde der Untersucher (A.G.), der die Messungen durchführte, kalibriert, um die Intra-Untersucher-Reproduzierbarkeit festzustellen. Kalibrierungen wurden mit zwei Probanden durchgeführt, die nicht in die Studie eingeschlossen waren. Während der postoperativen Erhaltungstherapie mit 0,12 % Chlorhexidin wurden am 7. postoperativen Tag der frühe Wundheilungsindex (EHI) und der Plaqueindex (PI) bei zwei verschiedenen Gelegenheiten am selben Tag aufgezeichnet, jedoch im Abstand von mindestens 8 Stunden. Die Intraklassen-Korrelationsanalyse wurde verwendet, um die Intra-Untersucher-Übereinstimmung für wiederholte Messungen zu berechnen. Die Kalibrierung wurde akzeptiert, wenn beide Messungen mit einer Abweichung von +/- 10 % ähnlich waren (Intra-Klassen-Korrelationskoeffizient > 0,9).

Mikrobiologische Beurteilung:

Am 14. postoperativen Tag wurden supragingivale gepoolte Zahnplaqueproben von beiden interproximalen Zahnoberflächen bzw. bis zur Interdentalpapille mit dem höchsten EHI-Wert unter Verwendung von Küretten entnommen. Gepoolte Proben wurden einzeln in 150 &mgr;l TE-Pufferlösung gesammelt. Die Proben wurden bei –80°C bis zur Verarbeitung gelagert, die im Labor für Zell- und Matrixpathobiologie am Institut für Biowissenschaften und Anwendungen, Nationales Zentrum für wissenschaftliche Forschung (N.C.S.R.), Athen, Griechenland, durchgeführt wurde. Bakterielle genomische DNA wurde unter Verwendung des PureLink® Genomic DNA Μini Kits gemäß dem Protokoll des Herstellers für die Gram (+)-Bakterienzelllyse isoliert und gereinigt. Die gereinigten DNA-Konzentrationen wurden spektrophotometrisch bestimmt (NanoDrop 1000). Die Proben wurden mittels quantitativer Echtzeit-PCR (qPCR) analysiert, um die Gesamtkeimzahl in jeder gepoolten Probe zu bestimmen. qPCR wurde unter Anwendung eines Satzes universeller Primer (Vorwärtsprimer: 5' TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' und Rückwärtsprimer: 5' GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3', mit einer Amplikongröße von 466 Basenpaaren) durchgeführt, von denen berichtet wurde, dass sie DNA-Sequenzen von Genen nachweisen, die für 16S kodieren ribosomale Untereinheit von mindestens 50 verschiedenen Bakterienarten (aerob und anaerob Gram-positiv und Gram-negativ) und SYBR Green Ι Fluoreszenzsonde. Reihenverdünnungen von DNA-Extrakten reiner Bakterienkulturen von Escherichia coli wurden durchgeführt, um eine Standardkurve für die qPCR zu erstellen. Die Reaktionen wurden für 40 Zyklen bei 94 °C für 30 Sekunden, 58 °C für 45 Sekunden und 72 °C für 10 Minuten in einem Light Cycler 96 qPCR-Gerät durchgeführt. Die Ergebnisse wurden unter Verwendung der Light Cycler 96 1.1 Software analysiert. Die Gesamtkeimzahl jeder Probe wird als bakterielle Gesamt-DNA-Masse (ng) und Anzahl der Bakterienkopien (x106) ausgedrückt.

Berechnung der Stichprobengröße:

Die Stichprobengröße wurde durch einfache ANOVA-basierte Berechnungen geschätzt, wobei angenommen wurde, dass der minimale klinisch signifikante Unterschied eine Einheit der medianen EHI-Werte nach 14 Tagen zwischen mindestens einem Gruppenpaar beträgt. 14 Patienten für jede Gruppe wurden für eine Leistung von 80 % und für die Erkennung von Medianunterschieden bei unterbewerteten Parametern zwischen den Gruppen benötigt.

Statistische Analyse:

Demografische und klinische Merkmale der Stichprobe werden nach Gruppen in Tabellen dargestellt, die absolute und relative (%) Häufigkeiten für kategoriale Variablen und Mediane und Interquartilbereiche (Median – IQR) für quantitative Variablen enthalten. Unterschiede zwischen den Gruppen in diesen Merkmalen wurden durch Fishers exakte Tests für kategoriale Variablen und Kruskal-Wallis-Tests für quantitative Variablen bewertet. Die Verteilungen der interessierenden Indizes (Early Wound Healing Index – EHI, Plaque Index – PI, Plaque Area Index – PA%) wurden durch Mediane und IQRs zusammengefasst.

Die Daten der Indizes wurden durch lineare oder verallgemeinerte lineare gemischte Modelle analysiert, wobei die potenziellen Korrelationen zwischen mehreren Messungen, die an derselben Person vorgenommen wurden, berücksichtigt wurden. Insbesondere für die Analyse von EHI und PI wurden ordinale logistische Regressionsmodelle verwendet. Für den PA%-Index, der ein Anteil im Bereich von 0 % bis 100 % war, wurde ein lineares Modell nach einer Logit-Transformation der abhängigen Variablen verwendet. Die Modellauswahl, einschließlich der Überprüfung auf potenzielle Interaktionseffekte, für die endgültigen multivariablen Modelle basierte auf Likelihood-Quotienten-Tests.

Unterschiede in der Gesamtzahl der Mikroben zwischen den Gruppen oder in Bezug auf andere Probeneigenschaften wurden unter Verwendung eines linearen Regressionsmodells nach log10-Transformation analysiert. Die Ergebnisse werden als relative Unterschiede in % dargestellt.

P-Werte von weniger als 0,05 wurden als statistisch signifikant angesehen. Alle Analysen wurden mit dem Statistikpaket Stata 13.1 (Stata Corp., USA) durchgeführt.