Эффективность трех различных ополаскивателей для полости рта в борьбе с зубным налетом и раннем заживлении ран

Материалы и методы

Набор пациентов и все клинические процедуры проводились на кафедре пародонтологии Школы стоматологии Национального университета Каподистрии в Афинах, Греция.

Клинические процедуры:

Все оперативные вмешательства проводились аспирантами первого и третьего курсов. Непосредственно перед операцией выполняли наддесневую санацию и шлифовку оперированного участка. При операциях по устранению/уменьшению остаточных пародонтальных карманов применялись внутрибороздковые разрезы с последующими разрезами с сохранением сосочков в межзубных промежутках. При удлинении коронки резекционные десневые разрезы выполняли при достаточной ширине ороговевших тканей (≥ 3 мм). После подъема лоскута поверхности корней тщательно санировали инструментами и ультразвуковыми приборами. Остэктомия/остеопластика карбидными борами применялась по мере необходимости. Щечный и небный/язычный лоскуты были полностью адаптированы друг к другу и сшиты монофиламентной медленно рассасывающейся нитью. Пародонтальные повязки не использовались. Системные антибиотики не назначались. Ибупрофен по 400 мг 3 раза в день в течение 4 дней был предложен сразу после хирургического вмешательства. Курильщикам было рекомендовано бросить курить в течение первой послеоперационной недели. Швы сняты на 7-е сутки после операции. Случайной потери швов за этот период не зарегистрировано.

Рандомизация и сокрытие распределения:

Субъекты были случайным образом распределены в одну из трех групп с использованием компьютеризированной процедуры распределения (генератор случайных последовательностей, www.random.org). составленный экспертом А.Г. Каждому испытуемому было присвоено одинаковое число от 1 до 42. Участники получили бутылки с одним из трех исследуемых растворов. Ни пациенты, ни клиницисты (хирурги и исследователь А.Г.) не были проинформированы об идентичности ополаскивателя, назначаемого в каждом случае (двойной слепой дизайн). Бутылки с масками были переданы участникам третьим независимым человеком, который не был стоматологом (сотрудником вспомогательного персонала Клиники последипломного образования).

Послеоперационный протокол обслуживания:

В течение первых 14 дней после операции участников проинструктировали полоскать рот 15 мл введенного раствора в течение одной минуты два раза в день.

В этот же период испытуемые воздерживались от механического удаления налета на оперированных участках.

Воспроизводимость внутри исследователя:

Перед началом исследования исследователь (А.Г.), проводивший измерения, был откалиброван, чтобы установить воспроизводимость внутри исследователя. Калибровки проводились с двумя субъектами, не включенными в исследование. Во время послеоперационной поддерживающей терапии с использованием 0,12% хлоргексидина на 7-й послеоперационный день индекс раннего заживления ран (EHI) и индекс зубного налета (PI) регистрировали дважды в один и тот же день с интервалом не менее 8 часов. Внутриклассовый корреляционный анализ использовался для расчета согласованности между исследователями для повторных измерений. Калибровку принимали, если оба измерения были одинаковыми с отклонением +/- 10% (коэффициент внутриклассовой корреляции > 0,9).

Микробиологическая оценка:

Объединенные образцы наддесневого зубного налета были собраны на 14-й день после операции с обеих межпроксимальных поверхностей зубов, соответственно, до межзубного сосочка с самым высоким значением EHI, с использованием кюреток. Объединенные образцы собирали по отдельности в 150 мкл буферного раствора ТЕ. Образцы хранили при температуре -80°С до обработки, которую проводили в Лаборатории клеточной и матриксной патобиологии Института биологических наук и приложений Национального центра научных исследований (NCSR), Афины, Греция. Бактериальную геномную ДНК выделяли и очищали с использованием набора PureLink® Genomic DNA Μini Kit в соответствии с протоколом производителя для лизиса грам (+) бактериальных клеток. Концентрации очищенной ДНК определяли спектрофотометрически (NanoDrop 1000). Образцы анализировали с помощью количественной ПЦР в реальном времени (кПЦР) для оценки общего количества бактерий в каждом объединенном образце. КПЦР проводили с применением набора универсальных праймеров (прямой праймер: 5'TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' и обратный праймер: 5'GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3', с размером ампликона 466 пар оснований), которые, как сообщается, обнаруживают последовательности ДНК гена, кодирующего 16S. рибосомная субъединица не менее 50 различных видов бактерий (аэробных и анаэробных грамположительных и грамотрицательных) и флуоресцентный зонд SYBR Green Ι. Серийные разведения экстракта ДНК чистых бактериальных культур Escherichia coli выполняли для получения стандартной кривой для количественной ПЦР. Реакции проводили в течение 40 циклов при 94 °С в течение 30 секунд, 58 °С в течение 45 секунд и 72 °С в течение 10 минут в устройстве для количественной ПЦР Light Cycler 96. Результаты анализировали с использованием программного обеспечения Light Cycler 96 1.1. Общее количество бактерий в каждом образце выражается в виде общей массы бактериальной ДНК (нг) и количества копий бактерий (x106).

Расчет размера выборки:

Размер выборки был оценен с помощью расчетов на основе однофакторного ANOVA, предполагая, что минимальная клинически значимая разница составляет одну единицу в медианных значениях EHI за 14 дней между по крайней мере одной парой групп. Для достижения 80% мощности и выявления медианных различий по оцениваемым параметрам между группами требовалось по 14 пациентов в каждой группе.

Статистический анализ:

Демографические и клинические характеристики выборки представлены по группам в таблицах, содержащих абсолютные и относительные (%) частоты для категориальных переменных и медианы и межквартильные диапазоны (медиана - IQR) для количественных переменных. Различия между группами по этим характеристикам оценивали с помощью точных тестов Фишера для категориальных переменных и тестов Крускала-Уоллиса для количественных. Распределения представляющих интерес индексов (индекс раннего заживления ран - EHI, индекс зубного налета - PI, индекс площади зубного налета - PA%) суммировали через медианы и IQR.

Данные индексов были проанализированы с помощью линейных или обобщенных линейных смешанных моделей с учетом потенциальных корреляций между несколькими измерениями, проведенными на одном и том же человеке. В частности, для анализа EHI и PI использовались модели порядковой логистической регрессии. Для индекса PA%, который представлял собой пропорцию в диапазоне от 0% до 100%, использовалась линейная модель после логит-преобразования зависимой переменной. Выбор модели, включая проверку потенциальных эффектов взаимодействия, для окончательных многопараметрических моделей был основан на тестах отношения правдоподобия.

Различия в общем количестве микробов между группами или по отношению к другим характеристикам образцов анализировали с использованием модели линейной регрессии после преобразования log10. Результаты представлены в виде относительных различий в %.

Значения P менее 0,05 считались статистически значимыми. Все анализы проводились с использованием статистического пакета Stata 13.1 (Stata Corp., США).