Eficacia de tres enjuagues bucales diferentes en el control de la placa dental y la cicatrización temprana de heridas

Materiales y métodos

La inscripción de los pacientes y todos los procedimientos clínicos se realizaron en el Departamento de Periodoncia de la Facultad de Odontología de la Universidad Nacional y Kapodistriana de Atenas, Grecia.

Procedimientos Clínicos:

Todas las intervenciones quirúrgicas fueron realizadas por residentes de posgrado de primer y tercer año. Inmediatamente antes de la cirugía se realizó desbridamiento supragingival y pulido del área operada. En los casos de cirugías de eliminación/reducción de bolsas periodontales residuales, se aplicaron incisiones intrasulculares seguidas de incisiones de preservación de la papila en las áreas interdentales. En casos de alargamiento de corona, se aplicaron incisiones gingivales resectivas en presencia de suficiente ancho de tejidos queratinizados (≥ 3 mm). Después de la elevación del colgajo, las superficies radiculares se desbridaron minuciosamente con instrumentos y dispositivos ultrasónicos. Se aplicó ostectomía/osteoplastia con fresas de carburo, según se consideró apropiado. Los colgajos bucal y palatino/lingual se adaptaron completamente entre sí y se suturaron juntos con material de sutura de reabsorción lenta de monofilamento. No se utilizaron apósitos periodontales. No se prescribieron antibióticos sistémicos. Se sugirió ibuprofeno 400 mg, tres veces al día durante 4 días, inmediatamente después de la intervención quirúrgica. Se aconsejó a los fumadores que dejaran de fumar durante la primera semana posquirúrgica. Las suturas se retiraron al 7° día postoperatorio. Durante ese período no se registró ninguna pérdida accidental de suturas.

Aleatorización y ocultación de la asignación:

Los sujetos fueron asignados aleatoriamente a uno de tres grupos utilizando un procedimiento de asignación computarizado (Random Sequence Generator, www.random.org) generada por el examinador A.G. Cada sujeto recibió un número idéntico entre 1 y 42. Los participantes recibieron botellas con una de las tres soluciones bajo investigación. Ni los pacientes ni los médicos (cirujanos y examinador A.G.) fueron informados sobre la identidad del enjuague bucal administrado en cada caso (diseño doble ciego). Los biberones tapados fueron entregados a los participantes por una tercera persona independiente no odontóloga (miembro del personal asistencial de la Clínica de Postgrado).

Protocolo de mantenimiento post - quirúrgico:

Durante los primeros 14 días posteriores a la operación, se indicó a los participantes que se enjuagaran con 15 ml de la solución administrada durante un minuto, dos veces al día.

Durante el mismo período, los sujetos se abstuvieron de realizar cualquier remoción mecánica de placa en las áreas operadas.

Reproducibilidad intraexaminador:

Previo al inicio del estudio, el examinador (A.G.) que realizó las mediciones fue calibrado para establecer la reproducibilidad intra-examinador. Las calibraciones se realizaron con dos sujetos no incluidos en el estudio. Durante el mantenimiento postoperatorio con clorhexidina al 0,12 %, en el 7.° día posquirúrgico, se registraron el índice de curación temprana de heridas (EHI) y el índice de placa (PI) en dos ocasiones separadas durante el mismo día, sin embargo, con al menos 8 horas de diferencia. Se utilizó el análisis de correlación intraclase para calcular la concordancia intraexaminador para mediciones repetidas. Se aceptaba la calibración si ambas medidas eran similares con una desviación de +/- 10% (coeficiente de correlación intraclase > 0,9).

Evaluación microbiológica:

Se recogieron muestras agrupadas de placa dental supragingival en el día 14 del postoperatorio desde ambas superficies dentales interproximales respectivamente hasta la papila interdental con el valor de EHI más alto, usando curetas. Las muestras agrupadas se recogieron individualmente en 150 μl de solución tampón TE. Las muestras se almacenaron a -80ºC hasta su procesamiento, que se realizó en el Laboratorio de Patobiología Celular y Matricial del Instituto de Biociencias y Aplicaciones, Centro Nacional de Investigación Científica (N.C.S.R.), Atenas, Grecia. El ADN genómico bacteriano se aisló y purificó utilizando el kit PureLink® Genomic DNA Mini, siguiendo el protocolo del fabricante de lisis de células bacterianas Gram (+). Las concentraciones de ADN purificado se determinaron espectrofotométricamente (NanoDrop 1000). Las muestras se analizaron mediante PCR cuantitativa en tiempo real (qPCR) para evaluar el recuento total de bacterias en cada muestra agrupada. La qPCR se realizó con la aplicación de un conjunto de cebadores universales (cebador directo: 5' TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' y cebador inverso: 5' GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3', con un tamaño de amplicón de 466 pares de bases), que se informó que detecta secuencias de ADN del gen que codifica para 16S subunidad ribosómica de al menos 50 especies bacterianas diferentes (aerobias y anaerobias Gram positivas y Gram negativas) y sonda fluorescente SYBR Green Ι. Se realizaron diluciones seriadas de extracto de ADN de cultivos bacterianos puros de Escherichia coli para generar una curva estándar para la qPCR. Las reacciones se realizaron durante 40 ciclos a 94 °C durante 30 segundos, 58 °C durante 45 segundos y 72 °C durante 10 minutos en un dispositivo Light Cycler 96 qPCR. Los resultados se analizaron utilizando el software Light Cycler 96 1.1. El recuento total de bacterias de cada muestra se expresa como masa total de ADN bacteriano (ng) y número de copias bacterianas (x106).

Cálculo del tamaño de la muestra:

El tamaño de la muestra se estimó mediante cálculos basados ​​en ANOVA unidireccional, asumiendo que la diferencia mínima clínicamente significativa es una unidad en los valores medianos de EHI a los 14 días entre al menos un par de grupos. Se necesitaron 14 pacientes para cada grupo para alcanzar el 80% de potencia y para la detección de diferencias medianas en los parámetros de evaluación entre los grupos.

Análisis estadístico:

Las características demográficas y clínicas de la muestra se presentan por grupo en tablas que contienen frecuencias absolutas y relativas (%) para variables categóricas y medianas y rangos intercuartílicos (Mediana - RIQ) para variables cuantitativas. Las diferencias entre grupos en estas características se evaluaron mediante la prueba exacta de Fisher para variables categóricas y la prueba de Kruskal-Wallis para variables cuantitativas. Las distribuciones de los índices de interés (Índice de cicatrización temprana - EHI, Índice de placa - PI, Índice de área de placa - PA%) se resumieron a través de medianas y IQR.

Los datos de los índices se analizaron a través de modelos mixtos lineales o lineales generalizados teniendo en cuenta las posibles correlaciones entre múltiples mediciones tomadas en el mismo individuo. En particular, para el análisis de EHI y PI se utilizaron modelos de regresión logística ordinal. Para el índice PA%, que era una proporción entre 0% y 100%, se utilizó un modelo lineal después de una transformación logit de la variable dependiente. La selección del modelo, incluidas las comprobaciones de los posibles efectos de interacción, para los modelos multivariables finales se basó en pruebas de razón de verosimilitud.

Las diferencias de recuento microbiano total entre grupos o en relación con otras características de la muestra se analizaron mediante un modelo de regresión lineal después de la transformación log10. Los resultados se presentan como diferencias relativas %.

Los valores de p inferiores a 0,05 se consideraron estadísticamente significativos. Todos los análisis se realizaron con el paquete estadístico Stata 13.1 (Stata Corp., EE. UU.).