Účinnost tří různých ústních vod při kontrole zubního plaku a časném hojení ran

Materiály a metody

Zápis pacientů a všechny klinické postupy byly prováděny na katedře parodontologie, School of Dentistry, National and Kapodistrian University of Athens, Řecko.

Klinické postupy:

Všechny chirurgické zákroky byly prováděny rezidenty prvního a třetího ročníku postgraduálního studia. Těsně před operací byl proveden supragingivální debridement a vyleštění operované oblasti. V případech reziduálních operací eliminace/zmenšení parodontálních váčků byly aplikovány intrasulkulární řezy následované řezy pro zachování papily v mezizubních oblastech. V případech prodlužování korunky byly aplikovány resektivní gingivální řezy v přítomnosti dostatečné šířky keratinizovaných tkání (≥ 3 mm). Po elevaci klapky byly povrchy kořenů důkladně očištěny nástroji a ultrazvukovými zařízeními. Ostektomie/osteoplastika s karbidovými frézami byla aplikována, jak bylo považováno za vhodné. Bukální a palatinální/lingvální laloky byly vzájemně plně přizpůsobeny a sešity monofilním pomalu vstřebatelným stehem. Parodontální obvazy nebyly použity. Nebyla předepsána žádná systémová antibiotika. Ibuprofen 400 mg, třikrát denně po dobu 4 dnů, byl navržen bezprostředně po chirurgickém zákroku. Kuřákům bylo doporučeno, aby přestali kouřit první týden po operaci. Stehy byly odstraněny 7. pooperační den. Během tohoto období nebyla zaznamenána žádná náhodná ztráta stehů.

Randomizace a utajení přidělování:

Subjekty byly náhodně rozděleny do jedné ze tří skupin pomocí počítačové procedury přiřazení (generátor náhodných sekvencí, www.random.org) generované examinátorem A.G. Každý subjekt dostal stejné číslo mezi 1 a 42. Účastníci obdrželi lahve s jedním ze tří zkoumaných roztoků. Ani pacienti, ani kliničtí lékaři (chirurgové a vyšetřující A.G.) nebyli informováni o identitě ústní vody podané v každém případě (dvojité - slepé provedení). Maskované lahve byly účastníkům předány třetí nezávislou osobou, která nebyla zubním lékařem (člen asistenčního personálu Postgraduální kliniky).

Protokol pooperační údržby:

Během prvních 14 pooperačních dnů byli účastníci instruováni, aby se dvakrát denně vyplachovali 15 ml podaného roztoku po dobu jedné minuty.

Během stejného období se subjekty zdržely jakéhokoli mechanického odstraňování plaku na operovaných místech.

Reprodukovatelnost v rámci vyšetřujícího:

Před začátkem studie byl zkoušející (A.G.), který prováděl měření, kalibrován, aby se stanovila reprodukovatelnost uvnitř vyšetřujícího. Kalibrace byly provedeny se dvěma subjekty nezahrnutými do studie. Během pooperační udržovací péče s použitím 0,12% chlorhexidinu byly sedmý den po operaci zaznamenávány index časného hojení ran (EHI) a index plaku (PI) při dvou různých příležitostech během stejného dne, avšak s odstupem alespoň 8 hodin. Vnitrotřídní korelační analýza byla použita k výpočtu shody mezi vyšetřovateli pro opakovaná měření. Kalibrace byla přijata, pokud byla obě měření podobná s odchylkou +/- 10 % (korelační koeficient uvnitř třídy > 0,9).

Mikrobiologické vyšetření:

Shromážděné vzorky supragingiválního zubního plaku byly odebrány 14. pooperační den z obou interproximálních zubních povrchů, respektive do interdentální papily s nejvyšší hodnotou EHI, pomocí kyret. Spojené vzorky byly jednotlivě odebrány do 150 ul TE pufrového roztoku. Vzorky byly skladovány při teplotě -80 °C až do zpracování, které bylo provedeno v Laboratory of Cell and Matrix Pathobiology v Institute of Biosciences and Applications, National Center for Scientific Research (N.C.S.R.), Atény, Řecko. Bakteriální genomová DNA byla izolována a purifikována pomocí soupravy PureLink® Genomic DNA Μini Kit, podle protokolu výrobce pro lýzu Gram (+) bakteriálních buněk. Koncentrace purifikované DNA byly stanoveny spektrofotometricky (NanoDrop 1000). Vzorky byly analyzovány pomocí kvantitativní PCR v reálném čase (qPCR), aby se vyhodnotil celkový počet bakterií v každém spojeném vzorku. qPCR byla provedena s aplikací sady univerzálních primerů (dopředný primer: 5' TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' a reverzní primer: 5' GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3', s velikostí amplikonu 466 párů bází), o kterých se uvádí, že detekují sekvence DNA genu kódujícího 16S ribozomální podjednotka nejméně 50 různých bakteriálních druhů (aerobní a anaerobní Gram pozitivní a Gram negativní) a fluorescenční sonda SYBR Green Ι. Byla provedena sériová ředění DNA extraktu čistých bakteriálních kultur Escherichia coli, aby se vytvořila standardní křivka pro qPCR. Reakce byly prováděny po 40 cyklů při 94 °C po dobu 30 sekund, 58 °C po dobu 45 sekund a 72 °C po dobu 10 minut v zařízení Light Cycler 96 qPCR. Výsledky byly analyzovány pomocí softwaru Light Cycler 96 1.1. Celkový počet bakterií v každém vzorku je vyjádřen jako celková hmotnost bakteriální DNA (ng) a počet kopií bakterií (x106).

Vzorový výpočet velikosti:

Velikost vzorku byla odhadnuta pomocí jednocestných výpočtů ANOVA za předpokladu, že minimální klinicky významný rozdíl je jedna jednotka středních hodnot EHI po 14 dnech mezi alespoň jedním párem skupin. Pro dosažení 80% výkonu a pro detekci středních rozdílů v podhodnocených parametrech mezi skupinami bylo zapotřebí 14 pacientů pro každou skupinu.

Statistická analýza:

Demografické a klinické charakteristiky vzorku jsou prezentovány podle skupin v tabulkách obsahujících absolutní a relativní (%) četnosti pro kategoriální proměnné a mediány a interkvartilní rozsahy (Median - IQR) pro kvantitativní proměnné. Rozdíly mezi skupinami v těchto charakteristikách byly hodnoceny pomocí Fisherových exaktních testů pro kategorické proměnné a Kruskal-Wallisových testů pro kvantitativní. Distribuce sledovaných indexů (index raného hojení ran - EHI, index plaku - PI, index plochy plaku - PA%) byla shrnuta prostřednictvím mediánů a IQR.

Data indexů byla analyzována pomocí lineárních nebo zobecněných lineárních smíšených modelů s přihlédnutím k potenciálním korelacím mezi vícenásobnými měřeními provedenými u stejného jedince. Zejména pro analýzu EHI a PI byly použity ordinální logistické regresní modely. Pro PA% index, což byl podíl v rozmezí od 0 % do 100 %, byl použit lineární model po logitové transformaci závislé proměnné. Výběr modelu, včetně kontrol potenciálních interakčních účinků, pro konečné modely s více proměnnými byl založen na testech poměru pravděpodobnosti.

Celkové rozdíly v počtu mikrobů mezi skupinami nebo ve vztahu k jiným charakteristikám vzorku byly analyzovány pomocí lineárního regresního modelu po log10 transformaci. Výsledky jsou uvedeny jako relativní rozdíly %.

P-hodnoty menší než 0,05 byly považovány za statisticky významné. Všechny analýzy byly provedeny pomocí statistického balíčku Stata 13.1 (Stata Corp., USA).