Effectiviteit van drie verschillende mondspoelingen bij de bestrijding van tandplak en vroege wondgenezing

Materialen en methodes

De inschrijving van patiënten en alle klinische procedures werden uitgevoerd op de afdeling Parodontologie, School voor Tandheelkunde, Nationale en Kapodistrian Universiteit van Athene, Griekenland.

Klinische Procedures:

Alle chirurgische ingrepen werden uitgevoerd door eerste- en derdejaars postdoctorale bewoners. Supragingivaal debridement en polijsten van het geopereerde gebied werd vlak voor de operatie uitgevoerd. In gevallen van operaties voor het verwijderen/verkleinen van resterende parodontale pocket, werden intrasulculaire incisies gevolgd door incisies voor het behoud van de papil in interdentale gebieden. In gevallen van kroonverlenging werden resectieve gingivale incisies aangebracht in aanwezigheid van voldoende verhoornde weefsels (≥ 3 mm). Na het optillen van de flap werden de worteloppervlakken grondig gedebrideerd met instrumenten en ultrasone apparaten. Ostectomie / osteoplastiek met hardmetalen boren werd toegepast, zoals passend geacht. Buccale en palatinale/linguale flappen werden volledig aan elkaar aangepast en aan elkaar gehecht met monofilament langzaam resorbeerbare hechtdraad. Parodontale verbanden werden niet gebruikt. Er werden geen systemische antibiotica voorgeschreven. Ibuprofen 400 mg, driemaal daags gedurende 4 dagen, werd onmiddellijk na chirurgische ingreep voorgesteld. Rokers werd geadviseerd om te stoppen met roken gedurende de eerste week na de operatie. Hechtingen werden op de 7e postoperatieve dag verwijderd. Gedurende die periode werd geen onopzettelijk verlies van hechtingen geregistreerd.

Randomisatie en verborgenheid van toewijzing:

Proefpersonen werden willekeurig toegewezen aan een van de drie groepen met behulp van een geautomatiseerde toewijzingsprocedure (Random Sequence Generator, www.random.org). gegenereerd door de examinator A.G. Elk onderwerp kreeg een identiek nummer tussen 1 en 42. Deelnemers ontvingen flessen met een van de drie onderzochte oplossingen. Noch patiënten, noch clinici (chirurgen en onderzoeker A.G.) werden in elk geval geïnformeerd over de identiteit van de toegediende mondspoeling (dubbelblind ontwerp). Gemaskerde flesjes werden aan de deelnemers gegeven door een derde onafhankelijke persoon die geen tandarts was (lid van het ondersteunend personeel van de Postgraduate Clinic).

Post - chirurgisch onderhoudsprotocol:

Tijdens de eerste 14 postoperatieve dagen kregen de deelnemers de instructie om tweemaal daags gedurende één minuut te spoelen met 15 ml van de toegediende oplossing.

Gedurende dezelfde periode onthielden de proefpersonen zich van elke mechanische tandplakverwijdering in de geopereerde gebieden.

Reproduceerbaarheid binnen de onderzoeker:

Voorafgaand aan het begin van het onderzoek werd de onderzoeker (A.G.) die de metingen uitvoerde gekalibreerd om de reproduceerbaarheid binnen de onderzoeker vast te stellen. Er werden kalibraties uitgevoerd met twee proefpersonen die niet in het onderzoek waren opgenomen. Tijdens postoperatief onderhoud met 0,12% chloorhexidine, op de 7e postoperatieve dag, werden de vroege wondgenezingsindex (EHI) en de plaque-index (PI) geregistreerd bij twee verschillende gelegenheden op dezelfde dag, echter met een tussenpoos van ten minste 8 uur. Intra-class correlatieanalyse werd gebruikt om de overeenstemming tussen de beoordelaars voor herhaalde metingen te berekenen. De kalibratie werd geaccepteerd als beide metingen vergelijkbaar waren met een afwijking van +/- 10% (intra-class correlatiecoëfficiënt > 0,9).

Microbiologische beoordeling:

Monsters van supragingivale tandplak werden verzameld op de 14e postoperatieve dag van respectievelijk beide interproximale tandoppervlakken tot de interdentale papil met de hoogste EHI-waarde, met behulp van curettes. Gepoolde monsters werden afzonderlijk verzameld in 150 μl TE-bufferoplossing. Monsters werden bewaard bij -80 tot verwerking, die werd uitgevoerd in het Laboratorium voor Cel- en Matrixpathobiologie van het Instituut voor Biowetenschappen en Toepassingen, Nationaal Centrum voor Wetenschappelijk Onderzoek (N.C.S.R.), Athene, Griekenland. Bacterieel genomisch DNA werd geïsoleerd en gezuiverd met behulp van de PureLink® Genomic DNA Μini Kit, volgens het protocol van de fabrikant van Gram (+) bacteriële cellysis. Gezuiverde DNA-concentraties werden spectrofotometrisch bepaald (NanoDrop 1000). Specimens werden geanalyseerd met behulp van kwantitatieve real-time PCR (qPCR) om het totale aantal bacteriën in elk samengevoegd monster te evalueren. qPCR werd uitgevoerd met toepassing van een reeks universele primers (voorwaartse primer: 5' TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' en omgekeerde primer: 5' GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3', met een amplicongrootte van 466 basenparen), waarvan is gemeld dat ze DNA-sequenties detecteren van genen die coderen voor 16S ribosomale subeenheid van ten minste 50 verschillende bacteriesoorten (aëroob en anaëroob grampositief en gramnegatief) en SYBR Green Ι fluorescerende sonde. Seriële verdunningen van DNA-extract van pure bacterieculturen van Escherichia coli werden uitgevoerd om een ​​standaardcurve voor de qPCR te genereren. Reacties werden uitgevoerd gedurende 40 cycli bij 94 °C gedurende 30 seconden, 58 °C gedurende 45 seconden en 72 °C gedurende 10 minuten in een Light Cycler 96 qPCR-apparaat. De resultaten werden geanalyseerd met behulp van de Light Cycler 96 1.1-software. Het totale aantal bacteriën van elk monster wordt uitgedrukt als de totale bacteriële DNA-massa (ng) en het aantal bacteriële kopieën (x106).

Berekening van de steekproefomvang:

De steekproefomvang werd geschat door middel van eenrichtings-ANOVA-gebaseerde berekeningen, ervan uitgaande dat het minimale klinisch significante verschil één eenheid is in mediane EHI-waarden na 14 dagen tussen ten minste één paar groepen. Er waren 14 patiënten voor elke groep nodig voor 80% prestatievermogen en voor mediane detectie van verschillen in onderevaluatieparameters tussen de groepen.

Statistische analyse:

Demografische en klinische kenmerken van de steekproef worden per groep gepresenteerd in tabellen met absolute en relatieve (%) frequenties voor categorische variabelen en medianen en interkwartielbereiken (Mediaan - IQR) voor kwantitatieve variabelen. Tussen groepen werden verschillen in deze kenmerken beoordeeld door middel van Fisher's exact-tests voor categorische variabelen en Kruskal-Wallis-tests voor kwantitatieve variabelen. De verdelingen van de indices van interesse (Early wondgenezingsindex - EHI, Plaque-index - PI, Plaque-gebiedsindex - PA%) werden samengevat door middel van medianen en IQR's.

De gegevens van de indices werden geanalyseerd door middel van lineaire of gegeneraliseerde lineaire gemengde modellen, waarbij rekening werd gehouden met de mogelijke correlaties tussen meerdere metingen bij dezelfde persoon. Met name voor de analyse van EHI en PI werden ordinale logistische regressiemodellen gebruikt. Voor de PA%-index, een verhouding variërend van 0% tot 100%, werd een lineair model gebruikt na een logittransformatie van de afhankelijke variabele. Modelselectie, inclusief controles op mogelijke interactie-effecten, voor de uiteindelijke multivariabele modellen was gebaseerd op waarschijnlijkheidsratio-testen.

Totale microbiële tellingsverschillen tussen groepen of in relatie tot andere monsterkenmerken werden geanalyseerd met behulp van een lineair regressiemodel na log10-transformatie. Resultaten worden gepresenteerd als relatieve verschillen %.

P-waarden van minder dan 0,05 werden als statistisch significant beschouwd. Alle analyses werden uitgevoerd met behulp van het statistische pakket Stata 13.1 (Stata Corp., VS).