Eficácia de três enxaguatórios bucais diferentes no controle da placa dentária e na cicatrização precoce de feridas

Materiais e métodos

A inscrição dos pacientes e todos os procedimentos clínicos foram conduzidos no Departamento de Periodontologia, Faculdade de Odontologia, Universidade Nacional e Kapodistrian de Atenas, Grécia.

Procedimentos Clínicos:

Todas as intervenções cirúrgicas foram realizadas por residentes de pós-graduação do primeiro e terceiro ano. O desbridamento supragengival e o polimento da área operada foram realizados imediatamente antes da cirurgia. Em casos de cirurgias de eliminação/redução de bolsas periodontais residuais, foram aplicadas incisões intrasulculares seguidas de incisões de preservação da papila nas áreas interdentais. Nos casos de aumento de coroa, incisões gengivais ressectivas foram aplicadas na presença de largura suficiente de tecidos queratinizados (≥ 3mm). Após a elevação do retalho, as superfícies radiculares foram completamente desbridadas com instrumentos e aparelhos ultrassônicos. Aplicou-se ostectomia/osteoplastia com brocas de carboneto, conforme apropriado. Os retalhos vestibular e palatino/lingual foram totalmente adaptados entre si e suturados juntos com fio monofilamentar lentamente reabsorvível. Não foram utilizados curativos periodontais. Nenhum antibiótico sistêmico foi prescrito. Ibuprofeno 400mg, três vezes ao dia por 4 dias, foi sugerido imediatamente após a intervenção cirúrgica. Os fumantes foram aconselhados a parar de fumar na primeira semana pós-cirúrgica. As suturas foram removidas no 7º dia de pós-operatório. Durante esse período, nenhuma perda acidental de sutura foi registrada.

Randomização e ocultação de alocação:

Os indivíduos foram designados aleatoriamente para um dos três grupos usando um procedimento de atribuição computadorizado (Random Sequence Generator, www.random.org) gerado pelo examinador A.G. Cada sujeito recebeu um número idêntico entre 1 e 42. Os participantes receberam frascos com uma das três soluções sob investigação. Nem os pacientes nem os médicos (cirurgiões e examinador A.G.) foram informados sobre a identidade do enxaguatório bucal administrado em cada caso (desenho duplo-cego). Garrafas mascaradas foram entregues aos participantes por uma terceira pessoa independente que não era dentista (membro da equipe assistencial da Clínica de Pós-Graduação).

Protocolo de manutenção pós-cirúrgico:

Durante os primeiros 14 dias de pós-operatório, os participantes foram instruídos a enxaguar com 15ml da solução administrada por um minuto, duas vezes ao dia.

Durante o mesmo período, os indivíduos abstiveram-se de qualquer remoção mecânica de placa nas áreas operadas.

Reprodutibilidade intra-examinador:

Antes do início do estudo, o examinador (A.G.) que realizou as medidas foi calibrado para estabelecer a reprodutibilidade intra-examinador. As calibrações foram realizadas com dois indivíduos não incluídos no estudo. Durante a manutenção pós-operatória com clorexidina 0,12%, no 7º dia pós-operatório, o índice de cicatrização precoce (EHI) e o índice de placa (IP) foram registrados em duas ocasiões distintas durante o mesmo dia, porém com intervalo mínimo de 8 horas. A análise de correlação intraclasse foi utilizada para calcular a concordância intraexaminador para medidas repetidas. A calibração foi aceita se ambas as medidas fossem semelhantes com desvio de +/- 10% (coeficiente de correlação intraclasse > 0,9).

Avaliação microbiológica:

Amostras combinadas de placa dentária supragengival foram coletadas no 14º dia pós-operatório de ambas as superfícies dentárias interproximais, respectivamente, para a papila interdentária com o maior valor de EHI, usando curetas. Amostras agrupadas foram coletadas individualmente em 150μl de solução tampão TE. As amostras foram armazenadas a -80 até o processamento, que foi realizado no Laboratory of Cell and Matrix Pathobiology no Institute of Biosciences and Applications, National Center for Scientific Research (N.C.S.R.), Atenas, Grécia. O DNA genômico bacteriano foi isolado e purificado usando o PureLink® Genomic DNA Μini Kit, seguindo o protocolo do fabricante de lise de células bacterianas Gram (+). As concentrações de DNA purificado foram determinadas espectrofotometricamente (NanoDrop 1000). As amostras foram analisadas usando PCR quantitativo em tempo real (qPCR) para avaliar a contagem bacteriana total em cada amostra agrupada. A qPCR foi realizada com a aplicação de um conjunto de primers universais (primer direto: 5' TCCTACGGGAGGCAGCAGT 3' e primer reverso: 5' GGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTT 3', com um tamanho de amplicon de 466 pares de bases), relatado para detectar sequências de DNA do gene que codifica para 16S subunidade ribossômica de pelo menos 50 espécies bacterianas diferentes (gram positivas e gram negativas aeróbias e anaeróbicas) e sonda fluorescente SYBR Green Ι. Diluições seriadas do extrato de DNA de culturas bacterianas puras de Escherichia coli foram realizadas a fim de gerar uma curva padrão para a qPCR. As reações foram realizadas por 40 ciclos a 94 °C por 30 segundos, 58 °C por 45 segundos e 72 °C por 10 minutos em um dispositivo Light Cycler 96 qPCR. Os resultados foram analisados ​​usando o Software Light Cycler 96 1.1. A contagem bacteriana total de cada amostra é expressa como massa total de DNA bacteriano (ng) e número de cópias bacterianas (x106).

Cálculo do tamanho da amostra:

O tamanho da amostra foi estimado por meio de cálculos baseados em ANOVA unidirecional, assumindo que a diferença mínima clinicamente significativa é uma unidade nos valores médios de EHI em 14 dias entre pelo menos um par de grupos. Foram necessários 14 pacientes para cada grupo para obtenção de 80% de potência e para detecção de diferenças medianas nos parâmetros de avaliação entre os grupos.

Análise estatística:

As características demográficas e clínicas da amostra são apresentadas por grupo em tabelas contendo frequências absolutas e relativas (%) para variáveis ​​categóricas e medianas e intervalos interquartis (Median - IQR) para variáveis ​​quantitativas. As diferenças entre os grupos nessas características foram avaliadas por meio de testes exatos de Fisher para variáveis ​​categóricas e testes de Kruskal-Wallis para variáveis ​​quantitativas. As distribuições dos índices de interesse (Índice de cicatrização precoce - EHI, Índice de placa - PI, Índice de área de placa - PA%) foram resumidas por meio de medianas e IQRs.

Os dados dos índices foram analisados ​​por meio de modelos mistos lineares ou lineares generalizados levando em consideração as potenciais correlações entre múltiplas medidas realizadas no mesmo indivíduo. Em particular, para a análise de EHI e IP, foram utilizados modelos de regressão logística ordinal. Para o índice AF%, que é uma proporção que varia de 0% a 100%, foi utilizado um modelo linear após uma transformação logit da variável dependente. A seleção de modelos, incluindo verificações de possíveis efeitos de interação, para os modelos multivariáveis ​​finais foi baseada em testes de razão de verossimilhança.

Diferenças de contagem microbiana total entre grupos ou em relação a outras características da amostra foram analisadas usando modelo de regressão linear após transformação log10. Os resultados são apresentados como % de diferenças relativas.

Valores de p inferiores a 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Todas as análises foram realizadas com o pacote estatístico Stata 13.1 (Stata Corp., EUA).