Efficacia di tre diversi collutori nel controllo della placca dentale e nella guarigione precoce delle ferite

Materiali e metodi

L'arruolamento dei pazienti e tutte le procedure cliniche sono state condotte presso il Dipartimento di Parodontologia, Facoltà di Odontoiatria, Università Nazionale e Kapodistriana di Atene, Grecia.

Procedure cliniche:

Tutti gli interventi chirurgici sono stati condotti da residenti post-laurea del primo e terzo anno. Lo sbrigliamento sopragengivale e la lucidatura dell'area operata sono stati eseguiti immediatamente prima dell'intervento chirurgico. In caso di interventi chirurgici di eliminazione/riduzione della tasca parodontale residua, sono state applicate incisioni intrasulculari seguite da incisioni di conservazione della papilla nelle aree interdentali. Nei casi di allungamento della corona, sono state applicate incisioni gengivali resettive in presenza di sufficiente larghezza di tessuti cheratinizzati (≥ 3 mm). Dopo il sollevamento del lembo, le superfici radicolari sono state accuratamente sbrigliate con strumenti e dispositivi a ultrasuoni. È stata applicata l'ostectomia/osteoplastica con frese al carburo, come ritenuto opportuno. I lembi buccali e palatali/linguali sono stati completamente adattati l'uno all'altro e suturati insieme con una sutura monofilamento lentamente riassorbibile. Non sono state utilizzate medicazioni parodontali. Non sono stati prescritti antibiotici sistemici. L'ibuprofene 400 mg, tre volte al giorno per 4 giorni, è stato suggerito immediatamente dopo l'intervento chirurgico. Ai fumatori è stato consigliato di smettere di fumare per la prima settimana postoperatoria. Le suture sono state rimosse in 7a giornata postoperatoria. Durante tale periodo non è stata registrata alcuna perdita accidentale di punti di sutura.

Randomizzazione e occultamento dell'allocazione:

I soggetti sono stati assegnati in modo casuale a uno dei tre gruppi utilizzando una procedura di assegnazione computerizzata (Random Sequence Generator, www.random.org) generato dall'esaminatore A.G. Ad ogni soggetto è stato assegnato un numero identico compreso tra 1 e 42. I partecipanti hanno ricevuto flaconi con una delle tre soluzioni in esame. Né i pazienti né i medici (chirurghi ed esaminatore A.G.) sono stati informati sull'identità del collutorio somministrato in ciascun caso (design in doppio cieco). Le bottiglie mascherate sono state consegnate ai partecipanti da una terza persona indipendente che non era un dentista (membro del personale di assistenza della Clinica post-laurea).

Protocollo di mantenimento post-chirurgico:

Durante i primi 14 giorni postoperatori, ai partecipanti è stato chiesto di risciacquare con 15 ml della soluzione somministrata per un minuto, due volte al giorno.

Nello stesso periodo, i soggetti si sono astenuti da qualsiasi rimozione meccanica della placca nelle aree operate.

Riproducibilità intra-esaminatore:

Prima dell'inizio dello studio, l'esaminatore (A.G.) che ha eseguito le misurazioni è stato calibrato per stabilire la riproducibilità intra-esaminatore. Le calibrazioni sono state eseguite con due soggetti non inclusi nello studio. Durante il mantenimento post-operatorio con clorexidina allo 0,12%, al 7° giorno postoperatorio, l'indice di guarigione precoce della ferita (EHI) e l'indice di placca (PI) sono stati registrati in due diverse occasioni durante lo stesso giorno, comunque a distanza di almeno 8 ore. L'analisi di correlazione intra-classe è stata utilizzata per calcolare la concordanza intra-esaminatore per misurazioni ripetute. La calibrazione è stata accettata se entrambe le misurazioni erano simili con una deviazione di +/- 10% (coefficiente di correlazione intraclasse > 0,9).

Valutazione microbiologica:

I campioni di placca dentale sopragengivale sono stati raccolti al 14° giorno postoperatorio da entrambe le superfici dentali interprossimali rispettivamente fino alla papilla interdentale con il valore EHI più alto, utilizzando curette. I campioni raggruppati sono stati raccolti individualmente in una soluzione tampone TE da 150 μl. I campioni sono stati conservati a -80 fino all'elaborazione, che è stata eseguita presso il Laboratorio di patobiologia cellulare e matrice presso l'Istituto di bioscienze e applicazioni, Centro nazionale per la ricerca scientifica (N.C.S.R.), Atene, Grecia. Il DNA genomico batterico è stato isolato e purificato utilizzando il kit PureLink® Genomic DNA Μini, seguendo il protocollo del produttore della lisi delle cellule batteriche Gram (+). Le concentrazioni di DNA purificato sono state determinate spettrofotometricamente (NanoDrop 1000). I campioni sono stati analizzati utilizzando la PCR quantitativa in tempo reale (qPCR) per valutare la conta batterica totale in ciascun campione raggruppato. qPCR è stata condotta con l'applicazione di un set di primer universali (forward primer: 5' TCCTACGGGAGGCAGCAGCAGT 3' e reverse primer: 5' GGACTACCAGGGGTATCTAATCCTGTT 3', con una dimensione dell'amplicone di 466 paia di basi), riportato per rilevare sequenze di DNA del gene che codifica per 16S subunità ribosomiale di almeno 50 diverse specie batteriche (aerobi e anaerobi Gram positivi e Gram negativi) e sonda fluorescente SYBR Green Ι. Sono state eseguite diluizioni seriali dell'estratto di DNA di colture batteriche pure di Escherichia coli per generare una curva standard per la qPCR. Le reazioni sono state eseguite per 40 cicli a 94 °C per 30 secondi, 58 °C per 45 secondi e 72 °C per 10 minuti in un dispositivo Light Cycler 96 qPCR. I risultati sono stati analizzati utilizzando il software Light Cycler 96 1.1. La conta batterica totale di ciascun campione è espressa come massa totale di DNA batterico (ng) e numero di copie batteriche (x106).

Calcolo della dimensione del campione:

La dimensione del campione è stata stimata attraverso calcoli basati su ANOVA unidirezionale, assumendo che la differenza minima clinicamente significativa sia di un'unità nei valori EHI mediani a 14 giorni tra almeno una coppia di gruppi. Sono stati necessari 14 pazienti per ciascun gruppo per il raggiungimento dell'80% della potenza e per il rilevamento delle differenze mediane nei parametri sottovalutati tra i gruppi.

Analisi statistica:

Le caratteristiche demografiche e cliniche del campione sono presentate per gruppo in tabelle contenenti le frequenze assolute e relative (%) per le variabili categoriali e le mediane e gli intervalli interquartili (Mediana - IQR) per le variabili quantitative. Le differenze tra i gruppi in queste caratteristiche sono state valutate attraverso i test esatti di Fisher per le variabili categoriche e i test di Kruskal-Wallis per quelle quantitative. Le distribuzioni degli indici di interesse (Indice di guarigione precoce della ferita - EHI, Indice di placca - PI, Indice di area di placca - PA%) sono state riassunte attraverso mediane e IQR.

I dati degli indici sono stati analizzati attraverso modelli misti lineari o lineari generalizzati tenendo conto delle potenziali correlazioni tra più misurazioni effettuate sullo stesso individuo. In particolare, per l'analisi di EHI e PI sono stati utilizzati modelli di regressione logistica ordinale. Per l'indice PA%, che era una proporzione compresa tra 0% e 100%, è stato utilizzato un modello lineare dopo una trasformazione logit della variabile dipendente. La selezione del modello, compresi i controlli per i potenziali effetti di interazione, per i modelli multivariabili finali si è basata sui test del rapporto di verosimiglianza.

Le differenze di conteggio microbico totale tra i gruppi o in relazione ad altre caratteristiche del campione sono state analizzate utilizzando il modello di regressione lineare dopo la trasformazione log10. I risultati sono presentati come differenze relative %.

I valori P inferiori a 0,05 sono stati considerati statisticamente significativi. Tutte le analisi sono state eseguite utilizzando il pacchetto statistico Stata 13.1 (Stata Corp., USA).