Funkce přirozených zabíječských buněk, únik nádoru do imunitního systému a regulace přirozených receptorů cytotoxicity u hematologických malignit

NK buňky se účastní vrozené imunity proti infekčním agens nebo transformovaným buňkám, které jsou rozpoznány jako "nevlastní" nepřítomnou, slabou nebo abnormální expresí molekul lidského leukocytárního antigenu (HLA) třídy I. Podle "hypotézy chybějícího sebe" je negativní signál dodán NK buňkám, když jsou jejich inhibiční receptory zapojeny do specifických molekul HLA třídy I. Aktivace NK vyžaduje pozitivní signál dodávaný zapojením aktivačních receptorů, konkrétněji "přirozených receptorů cytotoxicity" nebo NCR, které jsou přímo zapojeny do přirozené cytotoxicity Natural Killer. Aktivační receptory zahrnují NKp46, NKp44 a NKp30, také nazývané NCR 1, 2 a 3, v tomto pořadí. NKp46 a NKp30 jsou konstitutivně exprimovány na povrchu NK, exprese NKp44 je pozorována až po aktivaci buněk NK. NK buňky od většiny (80 %) zdravých dárců exprimují na svém povrchu vysoké množství NCR, což odpovídá fenotypu NCRbright, zatímco pouze 20 % má fenotyp NCRdull. V ostrém kontrastu má většina pacientů (80 %) s leukémií NCRdull, zatímco pouze 20 % pacientů má fenotyp NCRbright. Kultivace NK od zdravých dárců (NCRbright) s leukemickými buňkami má za následek sníženou expresi NKp30, přičemž není žádný rozdíl v expresi, pokud jsou tyto stejné NK kultivovány s buňkami od zdravých dárců. Kromě toho studie pacientů s AML ukázala, že fenotyp NCRdull byl získán během vývoje leukémie, protože byla pozorována jeho úplná (pro NKp46) nebo částečná (pro NKp30) reverzibilita u pacientů, kteří dosáhli kompletní remise (CR). Reverzibilita fenotypu NCRdull po CR naznačovala, že leukemické buňky by se mohly podílet na down-regulaci NCR. V souladu s těmito pozorováními se zaměřujeme na studium mechanismu down-regulace NCR kultivací NK NCRbright od zdravých dárců s leukemickými buňkami nebo zdravými hematopoetickými buňkami, abychom mohli pozorovat výskyt fenotypu NCRdull a ověřit pomocí qPCR, zda tento down- regulace je transkripční. Pokud bude tato hypotéza ověřena, budeme studovat regulaci NCR se zaměřením na implikaci genů NCR transkripčních faktorů prostřednictvím bioinformatické analýzy putativních sekvencí fixace transkripčních faktorů v promotorech těchto genů s následným ověřením kapacity identifikované sekvence pro vazbu transkripčních faktorů. Nakonec ověříme skutečné důsledky těchto transkripčních faktorů studiem účinku jejich umlčení experimenty s RNA interferencemi.