SRT ve srovnání s ERT na imunitní aspekty a zapojení kostí u Gaucherovy choroby

Úvod

Lysozomy jsou malé cytoplazmatické organely, které obsahují několik enzymů kyselé hydrolázy. Tyto enzymy rozkládají cizí materiály a buněčné zbytky, což umožňuje lysozomům působit jako recyklační centra pro buňky. Po transkripci DNA jsou v endoplazmatickém retikulu produkovány lysozomální enzymy a cílené na lysozomy pomocí specifických rozpoznávacích markerů. Pokud jeden z enzymů chybí nebo je-li jeho funkce snížena buď v důsledku změněné aminokyselinové sekvence proteinu nebo defektního intracelulárního transportu, makromolekuly metabolizované specifickým enzymem se budou postupně akumulovat v lysozomech. Abnormální ukládání substrátu vede k buněčné dysfunkci následované buněčnou smrtí, která se nakonec projeví poškozením tkáně a selháním orgánů.

Gaucherova choroba (GD) je porucha lysozomálního střádání způsobená genetickým deficitem lysozomálního enzymu glukocerebrosidázy. GD vede k akumulaci glykosfingolipidů v různých tkáňových systémech, zejména v buňkách mononukleárního fagocytárního systému, což má za následek širokou škálu heterogenních fenotypových účinků u postižených jedinců. Klinické projevy postižení GD napříč různými orgány od imunitních dysregulací, splenomegalie až po kostní krize a osteoporózu. Nosná frekvence je 1 z 200 pro běžnou populaci s incidencí 1 z 60 000. V některých populacích, jako jsou aškenázští Židé, však může být výskyt až 1 z 1 000.

Pozadí a význam

Enzymová substituční terapie řízená makrofágy (ERT) je nejpřijímanější formou léčby GD. Stále však existují neuspokojené potřeby v léčbě všech aspektů GD pomocí ERT. Jako alternativa k ERT byla vyvinuta terapie snížením substrátu (SRT) s použitím inhibitorů glukosylceramid syntázy. Zatímco ERT je navržena tak, aby se zaměřovala na makrofágy, které jsou nejvíce postiženými buněčnými typy, SRT je určena k dosažení širokých typů buněk. Je životně důležité vědět, jak každá forma terapie působí na různé typy buněk a tkání, a přitom zvolit podávání jedné z forem léčby jednotlivým pacientům. Naše předběžné výsledky imunitního fenotypování ukazují, že pacienti s GD podstupující léčbu vykazují různé druhy přetrvávajících imunitních dysregulací. Informace o tom, který typ terapie funguje lépe při kontrole těchto dysregulací, by poskytly cenné informace o možnostech léčby. Hloubková analýza periferní krve by vrhla světlo na to, jak jsou různé složky imunitního systému ovlivněny některou z forem léčby.

Vyšetřovatelé budou tento problém řešit ze dvou hledisek: a) Vyhodnoťte profil cytokinů z plazmy, abyste zjistili, zda hlášená bolest koreluje s konkrétním profilem cytokinů. b) Posoudit, zda lze rozsah onemocnění kostí předvídat nebo vysvětlit pomocí markerů z periferní krve ve vztahu k drahám zapojeným do remodelace kosti. Nálezy od jednotlivých pacientů s GD by byly porovnány paralelně s jejich závažností onemocnění a nálezy kostní denzity.

V této studii budou pečlivě sledovány a porovnávány účinky ERT vs. SRT, zejména s ohledem na imunologické aspekty a také kostní remodelaci. Za tímto účelem bude provedena hloubková imunofenotypizace pacientů, kterým jsou podávány tyto formy terapie, za účelem vyhodnocení různých typů imunitních buněk včetně frakcí T-, B- a NK buněk, monocytů a dendritických buněk z periferní krve pomocí multiparametrické průtokové cytometrie. Kromě toho budou výzkumníci rádi hodnotit aktivaci makrofágů pomocí testů na secernovaný CCL18 a chitotriosidázu a také studovat profil cytokinů z plazmy, aby vyhodnotili jejich příspěvek ke kostní bolesti/krizi. Aby bylo možné prozkoumat, zda lze rozsah kostní remodelace předpovědět nebo vysvětlit pomocí markerů z periferní krve, exprese složek dráhy RANK/RANKL by se hodnotila na příslušných typech imunitních buněk. Byly by vyvinuty a použity in vitro testy založené na buňkách ke studiu diferenciace a funkce makrofágů. Výsledky od jednotlivých pacientů s GD by byly porovnány paralelně s jejich závažností onemocnění a nálezy kostní denzity. Tento návrh je vysoce významný a inovativní, protože se očekává, že tato studie poskytne pohled na to, jak každá forma terapie ovlivňuje imunitní dysregulace, funkci makrofágů a jejich účinky na kostní krizi u pacientů s Gaucherovou chorobou podstupujících ERT vs. SRT. Přehled o tom, který typ terapie funguje lépe při kontrole těchto dysregulací, by poskytl cenné informace o možnostech léčby.