Infuze mezenchymálních kmenových buněk u pacientů s autoimunitními chorobami (MSCs in AD)

Autoimunitní poruchy jsou spektrem onemocnění od orgánů specifických, ve kterém protilátky a T buňky reagují na sebe antigeny lokalizované ve specifické tkáni, na systémové, které se vyznačují reaktivitou proti specifickému antigenu (S) šířeným v těle. Výskyt různých autoimunitních onemocnění je podle Centra pro kontrolu a prevenci nemocí variabilní variabilní, 22,7% má revmatická onemocnění. Ačkoli v Pákistánu nebyla provedena žádná epidemiologická studie založená na populaci čistě na autoimunitních onemocněních; Studie Mohsina Z et al. hlásí kombinovanou prevalenci revmatických onemocnění v terciární nemocnici v Karáčí 17,3%. Autoimunitní onemocnění a jejich způsoby léčby jsou hlavní příčinou postižení v rozvojových zemích a mají nejvyšší neschopnou míru v kvalitě života související se zdravím (HRQOL) a každodenní fungování.

21. století zaznamenalo rychlý pokrok v léčbě nemocí imunitní dysfunkce. Jednou takovou léčebnou modalitou je terapie kmenové buňky, o které se předpokládá, že opravuje a regeneruje tkáně. Zejména byly použity mezenchymální kmenové buňky (MSC) k léčbě onemocnění spojených s věkem, měnící se životní styl, imunitní dysfunkci a mrtvici. MSC terapie slibuje, že léčí různé autoimunitní poruchy, jako je refrakterní systémový lupus erythematosus (SLE), Crohnova choroba, systémová skleróza (SS), revmatoidní artritida (RA), roztroušená skleróza (MS), štěp a hostitelské onemocnění, melitus, thyroiditida, neurologické poruchy. V současné době téměř tisíc klinických studií použilo terapie založené na MSC. Mezi lidmi kolem sto studií bylo provedeno pro léčbu imunitně zprostředkovaných poruch, z nichž první byla před více než patnácti lety (tabulka 1).

Zájem obklopující pole MSC byl zpočátku založen na jejich inherentní kapacitě pro sebeobnovení a regeneraci s potenciálem vytvářet buňky mezodermálního původu (adipocyty, osteocyty, chondrocyty, hepatocyty, neurony, svalové buňky a epiteliální buňky) v závislosti na okolních mikroenvironmentech. Později, vzhledem k jejich schopnostem domov do zanícených oblastí a vyvíjením imunomodulačních účinků, se terapie s MSC rozšířily na léčbu autoimunitních a chronických zánětlivých procesů. Více studií také prokázalo, že MSC mají vnitřní imunomodulační a protizánětlivé vlastnosti.

Tabulka 1: Klinické studie, ve kterých se jako terapeutická modalita používají mezenchymální kmenové buňky.

Imunitní zprostředkovaná porucha Počet klinických studií Rok prvního klinického studijního referenčního štěpu vs. onemocnění hostitele 49 2004 zánětlivé střevní choroby 23 2006 roztroušená skleróza 29 2006 Systémový lupus erythematosus 10 2007 Typ I Diabetes 26 2008 Primární syndrom sjögrenu 1 2019 2011 TYP II Diabetes 13 2010 Automatické autoimunní hepatitidu Refrakterní autoimunitní trombocytopenie 1 2019

Zdroj MSC MSC byl původně identifikován v BM a běžně jsou izolováni odstředěním gradientu pro oddělené nukleatované buňky, následované in vitro kulturou a sériovými pasážemi. Výbor Mezenchymálních a tkáňových kmenových buněk Mezinárodní společnosti pro buněčnou terapii (ISCT) určil termín „multipotentní mezenchymální stromální buňky“ pro plastové adherentní buňky nalezené za standardních kulturních podmínek. Imunofenotyp těchto buněk podle kritérií ISCT je pozitivní pro markery buněčného povrchu CD73, CD90 a CD105 a negativní pro povrchové CD14 nebo CD11b, CD45, CD34, CD79 nebo CD19 a HLA-DR. MSC byly také získány z tukové tkáně, placenty, amniotické tekutiny, pupečníkové krve (UCB), pojivových tkání kosterního svalu a dermis, zubní tkáně a fetálních tkání, jako jsou plíce a krev. Mobilizované periferní krvinky byly také hlášeny jako zdroj MSC. Ačkoli studie genové exprese ukazují, že populace MSC získané z různých zdrojů tkání jsou vysoce heterogenní, jejich schopnost obnovit, rozlišovat a hlavní funkční vlastnosti, jako je regulace imunologické tolerance, hojení ran, zánět a fibróza, je pro všechny MSC společná.

1. Účinky na buňky imunitního systému MSC potlačují proliferaci T-buněk vyvolanou aloantigeny nebo mitogeny zvýšením počtu regulačních T buněk a snižují komplikace GVHD po HSCT a imunitně zprostředkované onemocnění. Kromě toho MSC inhibují funkci B buněk, přírodních zabijáckých buněk a dendritických buněk. Hlavní imunosupresivní funkcí MSC je produkce indukovaných rozpustných faktorů; Tyto buňky však mohou také vyvíjet imunosupresivní účinky přímou interakcí k buňkám na buňky. Imunosupresivní kapacita MSC je zvýšena za zánětlivých stavů v přítomnosti prozánětlivých cytokinů interferonu (IFN) -g, nádorové nekrózy-alfa a interleukin (IL) -6. Unrum imunologicky domlzy-quiescentní podmínky, a mohou indukovat přežití aktivace a pozitivní regulační regulační tyčinky.
2. Produkce imunomodulačních rozpustných faktorů MSC konstitutivně vytvářejí indukovatelné rozpustné faktory, jako je transformace růstového faktoru-P (TGF-P), růstový faktor hepatocytů, oxid dusnatý, HLA-G59 a indoleamin 2,3-dioxygenáza. Vyrábí se také velké množství IL-6 ANDIL-8 a chemokin CCL-2. MSC ošetřené IFN-y, vylučují ICAM-1, CXCL-10 a CCL-8, zatímco produkce IL-8 je snížena. Tento jev naznačuje, že MSC zacílí na neutrofily a monocyty za nezánětlivých podmínek, ale přitahují monocyty, dendritické buňky, T buňky a přirozené zabijácké buňky za zánětlivých stavů. Řada studií uváděla, že TGF-PA je klíčovým mediátorem imunomodulace pomocí MSC.
3. Prozánětlivé „licencování“ MSC MSC byly označeny jako „inteligentní“ imunitní modulátory, protože jejich potlačující účinky vyžadují předchozí krok licencování, ke kterému dochází v přítomnosti zánětlivého prostředí. Pokud jsou MSC transplantovány během akutního zánětu, mikroprostředí obsahující polarizované licence M1 makrofágů 'MSC pro inhibici efektoru T, B, přirozeného zabijáka a dendritických buněk. Naproti tomu, pokud jsou MSC licencovány po polarizaci makrofágů M2 cytokiny typu Th2, jak se vyskytuje během chronického zánětu, mikroprostředí poskytuje alternativní licencování a náboru MSC do procesu fibrózy.
4. Faktory MSC parakrinních faktorů v mechanismu opravného mechanismu buněčné regenerace ischemické tkáně vyžaduje například masivní dodávku buněk, například řádově miliardu pro infarkt. Experimentální studie a klinické studie odhalily, že terapeutický přínos zprostředkovaný MSC by se mohl do značné míry spoléhat na příspěvek vylučovaného množství růstových faktorů a cytokinů spíše než na jejich potenciál pro diferenciaci do kardiomyocytů, vaskulárních nebo renálních buněk, jak ukazuje předchozí studie. Panel regulačních a trofických faktorů vylučovaných MSC zahrnuje velké množství růstových faktorů, cytokinů a chemokinů.

Překlad znalostí MSC do terapie Clinical Application Cell se zdá být skutečně použitelnou translační strategií pro autoimunitní onemocnění.

1. Štěp versus onemocnění hostitele (GVHD) u lidí je nejuznávanější aplikací pro MSCS, komplikace transplantace hematopoetických kmenových buněk. V roce 2004 byl devítiletý chlapec se závažným akutním GVHD střeva a játra odolný vůči léčbě ošetřen haploidentickými MSC odvozenými od třetích stran. Klinické studie fáze II u pacientů s těžkým akutním GVHD rezistentním na steroidy vykazovaly 70% počáteční míru odezvy, která nesouvisela s věkem nebo HLA shodou. V těchto pokusech však stále chybí odolné úplné odpovědi nebo jiné primární koncové body.
2. Crohnovo onemocnění (CD) První zpráva o klinické studii fáze I buněčné terapie s použitím autologních MSC odvozených od tukovin na CD byla zveřejněna v roce 2005. Lokální injekce vedla k hojení píštěl (6/8) bez nepříznivých účinků, které tyto výsledky byly potvrzeny stejnou skupinou v roce 2009 v multicentrice fáze II v randomizované kontrolované studii [24]. V současné době existuje fáze III, multicentrická, placebem kontrolovaná, randomizovaná a slepá studie pro vyhodnocení bezpečnosti a účinnosti alogenních BM-MSC, prováděných společností Osiris Therapeutics. (http: //www.clinicaltrials. Gov/CT2/Show/NCT00482092).
3. Studie formy I/II roztroušené sklerózy (MS) u pacientů s refrakterní MS potvrdily absenci nepříznivých účinků během sledování (6-28 měsíců). Zvýšení podílu CD4+ CD25+ regulačních T buněk se sníženými proliferativními odpověďmi lymfocytů a aktivačních markerů na dendritických buňkách bylo detekováno hodiny po transplantaci MSC. Pacienti se zlepšili na míře vizuální funkce, bez důkazů významných nežádoucích účinků. Po léčbě byla také snížena progrese obecného postižení.
4. Systémový lupus erythematosus (SLE) Snad nejpozoruhodnější výsledky lidské terapie MSC nyní vycházejí z klinických studií zaměřených na těžkou léčbu refrakterní SLE. Pacienti s aktivním onemocněním a lupusovou nefritidou, která nereagovala na měsíční i.v. Cyklofosfamid a perorální prednison (≥ 20 mg/den) prokázaly zlepšené výsledky při léčbě MSC. Index aktivity onemocnění (Sledai) u těchto pacientů se významně zlepšil při jednom, šesti a dvanácti měsících, stejně jako močový protein. V některých studiích dostávali pacienti s vysokým Sledai jednu infuzi alogenních BM-MSC z pasáže 3-5 od non-HLA odpovídající zdravé rodinné příslušníky. Jejich sledování dosáhlo mediánu 17,2 (3-36) měsíců, bez nepříznivých účinků, úmrtí nebo následného GVHD. Poměrně překvapivě se 24 h proteinurie významně snížila již v týdnu po terapii MSC, dokonce i předcházející změny v anti-DSDNA protilátkách, které se významně snížily za jeden měsíc a tři měsíce po dávce MSC. Buňky T regulačních (TREG), o nichž se zjistilo, že jsou kvantitativně a kvalitativně nedostatečné v aktivním SLE, byly obnoveny v prvním týdnu, jak bylo posuzováno procentem CD4+ Foxp3+ buněk mezi mononukleárními buňkami periferní krve. Jiné studie, i když s kratším sledováním také prokazují významné zlepšení, ověřené pro skóre Sledai, sérový albumin, 24 hodinový močový protein, sérový kreatinin, sérový komplement a anti-dsDNA protilátky. Nepochybně musí být terapie MSC dále prozkoumána v SLE.
5. SYRICKÁ SCLEROSE (SS) SS je onemocnění zprostředkované imunitou s významnou vaskulární a mikrovaskulární složkou, která často vede k ischemickým komplikacím. Protože MSC se mohou rozlišit na endoteliální buňky in vitro a také se podílet na tvorbě krevních cév v dospělých tkáních, byla hlášena terapie autologní i haploidentická dárce třetích stran MSC, což vedlo k výraznému zlepšení ve dvou samostatných zprávách.
6. Vyhledávání literatury o revmatoidní artritidě (RA) odhaluje, že více než sto předklinických studií o RA zvířecích modelech a devíti klinických studiích o lidských pacientů bylo dokončeno při použití terapie založené na MSC v RA a stanovení její bezpečnosti a účinnosti. Zatímco devět klinických studií stále probíhá. U dvou třetin těchto pacientů byla použita jediná dávka alogenních MSC při přibližně dávce mezi 1-10 x106/kg. Předpokládá se, že MSC se zaměřují na patogenní paměťové T buňky a zastavují progresi průběhu nemoci u pacientů s RA.
7. Polymyositis/dermatomyositida (PM/DM) polymyositis/dermatomyositis (PM/DM) je autoimunitní onemocnění charakterizované slabostí proximálních kosterních svalů a zjevnými kožními projevy a je známo, že ovlivňuje více orgánů, jako jsou svaly, plíce a ledny. V současné době není etiologie známa. Několik studií naznačilo, že buňky pomocných (TH) jsou zapojeny do patogeneze PM/DM, protože buněčná buněčná dysfunkce související s buňkami hraje důležitou roli při výskytu a vývoji PM nebo DM. MSCT by proto mohla poskytnout novou terapeutickou strategii pro léčbu PM a DM. Několik studií prokázalo, že tento přístup má slibné klinické výsledky. V jiné studii byli pacienti s 32 pm a DM injikováni intravenózně 1 x 106/kg MSC. Výsledky devítileté následné studie prokázaly, že se symptomy a sérologické ukazatele pacientů zlepšily, což ukazuje na účinnost a bezpečnost MSCT v PM a DM, zatímco 11 pacientů zemřelo z důvodů, které nesouvisí s transplantací.

In another study, 81 patients with PM/DM were randomly divided into two groups: 44 patients in the control group were individually treated with glucocorticoids and immunosuppressants for 6 months, while 37 patients in the transplantation group were injected intravenously with 3.5-5.2 × 107 UC-MSCS. Výsledky této studie ukázaly, že hodnoty kreatinové kinázy v obou skupinách byly významně sníženy; Skupina transplantace však měla lepší výsledky než kontrolní skupina v několika časových bodech a funkce plic byla ve transplantační skupině významně zlepšena. Jeden pacient zemřel po transplantaci a nedošlo k žádným komplikacím souvisejícím s transplantací. V současné době existuje pouze několik studií zkoumajících PM/DM a k vyhodnocení dlouhodobé účinnosti a bezpečnosti MSCT u pacientů s PM/DM je zapotřebí rozsáhlých a randomizovaných klinických studií, včetně rizik nádorů a infekcí, jakož i optimální dávkování a plánu transplantace.

Vzhledem k tomu, že klinický výsledek v případě, jak se zprávy a studie fáze I-II zdají občas zatěžující, existuje zoufalá potřeba provádět strukturované a nejlépe kontrolované multicentrické pokusy a výsledky dokumentu v naší vlastní populaci.