Adherencia a tenofovir para guiar y evaluar rápidamente la PrEP y la terapia contra el VIH (TARGET)

Objetivos del estudio

Objetivo primario:

• Determinar la farmacocinética de tenofovir (TFV) en sangre, orina y plasma en adultos con adherencia perfecta, mediana y baja a tenofovir disoproxil fumarato (TDF).

Objetivos secundarios

• Determinar la tasa de lavado de tenofovir en sangre, plasma y orina entre participantes con varios niveles de adherencia al TDF.
• Determinar las concentraciones en estado estacionario de TFV en sangre y plasma entre niveles controlados de adherencia al TDF.
• Comparar la concordancia entre las concentraciones de TFV en sangre, plasma y orina.
• Determinar las concentraciones valle de tenofovir-difosfato intracelular (TFV-DP) en muestras de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) y gotas de sangre seca (DBS) en adultos con adherencia farmacológica perfecta, media y baja.
• Identificar posibles umbrales de concentración para la interpretación clínica de una prueba binaria de adherencia en el punto de atención para la medición de TFV (y/o TFV-DP) en relación con la adherencia a TDF.

Diseño:

El diseño del estudio es un estudio farmacocinético aleatorizado y abierto en voluntarios adultos sanos. El estudio implica la recopilación de datos clínicos y especímenes biológicos, y los sujetos darán su consentimiento informado por escrito para participar. Se inscribirán voluntarios adultos sanos (serología VIH y Ag de superficie de hepatitis B negativos). Una vez obtenido el consentimiento por escrito, se realizará la visita de selección. El equipo de estudio obtendrá el número de teléfono, la dirección y la información de contacto pertinente de cada participante.

Visita de selección:

La evaluación de los participantes se realizará dentro de los 14 días posteriores a la inscripción. Se administrará un cuestionario detallado de antecedentes demográficos y de salud. Se extraerán diez ml de sangre para las evaluaciones iniciales: hemograma completo, prueba de anticuerpos contra el VIH, prueba de Ag de superficie de la hepatitis B, pruebas de función renal y hepática y almacenamiento de sangre en el biorrepositorio. Las pruebas de sangre y química se utilizarán para excluir sujetos con cualquier prueba de laboratorio anormal entre el recuento de neutrófilos, hemoglobina, plaquetas, AST o ALT. Una prueba anormal se definirá como Grado ≥3 según la tabla DAIDS para clasificar la gravedad de los eventos adversos en adultos y niños, versión 2.0 de noviembre de 2014). Los resultados del examen clínico y las evaluaciones de laboratorio de referencia se revisarán para determinar los criterios de inclusión/exclusión.

Entrada:

Todas las visitas de entrada comenzarán un lunes por la mañana. Después de recibir información detallada sobre el cronograma del estudio, los sujetos que cumplan con los criterios de inclusión serán inscritos y aleatorizados (1:1:1) en uno de 3 grupos para recibir una cantidad controlada de dosis de Truvada® (Gilead Sciences Inc.), que contiene tenofovir disoproxil fumarato (TDF, 300 mg) y emtricitabina (FTC, 200 mg) durante 6 semanas. Al participante se le explicará cuidadosamente el horario de dosificación de medicamentos, el horario de visitas y los posibles efectos secundarios de los medicamentos.

Inscribiremos un total de 30 adultos con muestras PK evaluables (10 por grupo). Todos los participantes comenzarán el TDF en la mañana de la visita de Entrada. El período de tratamiento de 6 semanas se eligió para garantizar concentraciones de tenofovir en las diferentes matrices (es decir, sangre, plasma, orina, PBMC) imitan las condiciones esperadas en pacientes con dosificación crónica de adherencia farmacológica perfecta, mediana y baja. El cronograma de muestreo de sangre/orina se basa en la vida media plasmática informada de tenofovir y los resultados de estudios farmacocinéticos previos.

Las concentraciones de tenofovir se determinarán en cada participante durante tres fases del estudio (1) período inicial, (2) muestreo farmacocinético intensivo y (3) período de lavado.

Fase 1: Período de inicio (Ingreso a las 6 semanas) Visita previa a la 2.ª dosis: Inmediatamente antes de la segunda dosis (es decir, Grupo 1: 24 posdosis (día n.° 2; martes por la mañana); Grupo 2: 48 horas después de la dosis (día n.º 3; miércoles por la mañana); y Grupo 3; 72 horas después de la dosis (Día #4; jueves por la mañana) el sujeto regresará al hospital. Se extraerá una sola muestra de sangre (5 ml). A partir de esta muestra de sangre venosa, se prepararán 5 gotas de sangre seca (50 µL/mancha) en una tarjeta de papel de filtro Whatman 903. La sangre restante se centrifugará y el plasma se almacenará. Se recolectará una sola muestra de sangre entera por punción digital y en una segunda tarjeta de papel de filtro Whatman 903 se prepararán 2 gotas de sangre seca (50 µL/mancha). Se extraerán 10 ml de sangre por separado para recolectar PBMC para determinar las concentraciones de tenofovir-DP intracelular. Finalmente, se recolectará una muestra de orina puntual (5-10 mL). Todas las muestras se almacenarán entre -70 °C y -80 °C.

Semanas 3 y 5 (ambos lunes por la mañana, antes de la dosis): se extraerá una sola muestra de sangre (5 ml) antes de la administración de la dosis. A partir de esta muestra de sangre venosa, se prepararán 5 gotas de sangre seca (50 µL/mancha) en una tarjeta de papel de filtro Whatman 903. La sangre restante se centrifugará y el plasma se almacenará. Se recolectará una sola muestra de sangre entera por punción digital y se prepararán 2 gotas de sangre seca (50 µL/mancha) en una segunda tarjeta de papel de filtro Whatman 903. Se extraerán 10 ml de sangre por separado para recolectar PBMC para determinar las concentraciones de tenofovir-DP intracelular. Finalmente, se recolectará una muestra de orina puntual (5-10 mL). Todas las muestras se almacenarán entre -70 °C y -80 °C. Se realizarán pruebas de función renal y hepática.

Fase 2: Muestreo PK intensivo (a partir del lunes por la mañana de la semana 7 durante 24 horas) Visita PK intensiva de la semana 7: el lunes por la mañana de la semana 7, los sujetos regresarán al hospital temprano en la mañana. Un oficial médico realizará un examen físico y se extraerá sangre para las evaluaciones de seguridad de laboratorio (AST y ALT). Siguiendo su horario diario normal de ingesta de medicamentos por la mañana, se extraerá una muestra de sangre antes de la dosis y se administrará una sola tableta de Truvada® con el estómago vacío (al menos 6 horas de ayuno antes). Esta será la última dosis de Truvada® para todos los sujetos. Se recolectará sangre venosa (3 ml/punto de tiempo) 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12 y 24 horas después de la dosis. En cada punto de tiempo, se recolectará una DBS de sangre venosa (5 puntos) y una punción en el dedo (2 puntos). Se realizarán pruebas de función renal y hepática.

Las muestras de orina se recolectarán antes de la dosis y en intervalos de 0 a 4 horas, 4 a 8 horas, 8 a 12 horas y 12 a 24 horas. A los sujetos se les extraerá una dosis previa de 10 ml de sangre adicional y las PBMC se recolectarán y almacenarán entre -70 °C y -80 °C. Después de 24 horas, el participante será dado de alta del hospital. Se le pedirá al sujeto que recolecte toda su orina hasta su próxima visita de estudio en 24 horas.

Fase 3: Muestreo de farmacocinética de lavado (semana 7 a la semana 10) Semana 7 (miércoles a sábado): después de completar el muestreo de farmacocinética intensiva, los participantes regresarán a la clínica una vez al día durante los próximos 4 días (es decir, hasta el sábado). de la semana 7) para una sola extracción de sangre venosa (5 ml), recolección de muestra por punción digital para una gota de sangre seca y una muestra de orina (5-10 ml). Se le pedirá al sujeto que recolecte toda su orina hasta su próxima visita a la clínica.

Semana 8 (lunes y jueves): el lunes y el jueves de la semana 8 se extraerá una sola muestra de sangre venosa, una muestra de sangre seca por punción digital y una muestra de orina (5-10 ml). Se recolectará una sola muestra de PBMC (10 ml de sangre) el lunes por la mañana de la semana 8 (es decir, 1 semana desde la última dosis de TDF).

Semana 9 (lunes): el lunes se extraerá una sola muestra de sangre venosa, una muestra de punción digital para una gota de sangre seca y una muestra de orina (5-10 ml). También se recolectará una sola muestra de PBMC (10 ml de sangre) el lunes (es decir, 2 semanas desde la última dosis de TDF).

Semana 10 (lunes): el lunes se extraerá una sola muestra de sangre venosa, una muestra de punción digital para una gota de sangre seca y una muestra de orina (5-10 ml). También se recolectará una sola muestra de PBMC (10 ml de sangre) el lunes por la mañana (es decir, 3 semanas desde la última dosis de TDF).

Visita de fin de estudio (es decir, final de la semana 10):

El lunes se realizará una sola extracción de sangre venosa, una muestra de punción digital para una gota de sangre seca y una prueba de orina (5-10 ml). También se recolectará una sola muestra de PBMC (10 ml de sangre) el lunes (es decir, 4 semanas desde la última dosis de TDF). Se realizarán pruebas de función renal y hepática.

En este momento los participantes habrán completado el estudio y no se realizarán evaluaciones adicionales.

Las concentraciones de tenofovir se medirán utilizando ensayos validados de cromatografía líquida-espectrometría de masas de triple cuadrupolo (LC-MS/MS) en la Facultad de Ciencias Médicas Asociadas de la Universidad de Chiang Mai. Las concentraciones intracelulares de tenofovir-difosfato (TFV-DP) se determinarán mediante un ensayo validado basado en LC-MS.