Fase I de infusión de células NK de donantes seleccionados después de trasplante alogénico de células madre (DLI-NK)

• colección de células

  o Los linfocitos se recolectarán del donante original y autorizado lo antes posible, alrededor del día 60 posterior al trasplante.

• Selección de células NK

  o Las células se obtendrán después de una doble selección: agotamiento de CD3+ seguido de selección de CD56+ usando un dispositivo aprobado en Europa (Corporación Miltenyi)

• Activación ex vivo de células NK

  o activación ex-vivo: interleucina-2 según procedimiento clásico (7 días a 37°C con medio de grado clínico RPMI suplementado con 10% de suero fetal bovino, 0,5 x 106 celulas/ml, 1000 U/ml d'IL- 2 (interleucina, proleucina)

• Infusión de células NK (60 a 90 días después del trasplante)

• nivel 1: 1 x 10e6 células NK/kg;
• nivel 2: 5 x 10e6 células NK/kg;
• nivel 3: > 5.10e6 y ≤ 5.10e7 celulas NK/kg

Inmunomonitorización: ontogenia de NK después de la transferencia in vivo, caracterización de la expresión de KIR (fenotipo y genotipo), documentación de la actividad funcional contra la línea de células tumorales y las líneas de células B transformadas con EBV. Estos estudios permitirán calibrar aún más la cinética de la función de las células NK (citotoxicidad y producción de citocinas) y responder a diferentes preguntas de inmunología fundamental.

Se realizarán los siguientes estudios:

1. Análisis de los primeros pasos de aGVHD, activación inmune y toxicidad
2. Impacto de las infusiones en la reconstitución de NK y las células mieloides, incluidas las células dendríticas
3. Efectos antileucémicos