Tratamiento de la Uveítis Severa Bilateral por IVT de T-Células Reguladoras: Estudio de Tolerancia de Dosis (UVEREG)

Arsenal y limitaciones en el tratamiento de la uveítis La uveítis es una de las principales causas de pérdida visual grave o incluso ceguera en niños y adultos jóvenes. En casi un tercio de los casos se asocia a un agente infeccioso, otro tercio se integra en el campo de las enfermedades autoinmunes como entidades sistémicas incluidas (enfermedad de Behçet, sarcoidosis, espondiloartropatía…) o limitadas al ojo (retinocoroidopatía tipo Birdshot, oftalmía simpática, vasculitis retiniana idiopática). El último tercio permanece idiopático, donde a pesar de una cuidadosa investigación etiológica, no se identifica la causa. Los corticosteroides sistémicos a menudo son efectivos pero tienen efectos secundarios significativos y el cumplimiento del paciente suele ser deficiente. Es por eso que a veces se administran directamente en el segmento posterior del ojo (vítreo), pero el efecto es solo temporal, a menudo ineficaz y también asociado con efectos secundarios. Además, algunos son dependientes de esteroides y requieren tratamiento con agentes inmunosupresores; que también pueden ser responsables de muchos efectos adversos y no siempre son efectivos. En estas situaciones de impasse terapéutico, los investigadores proponen un enfoque de terapia celular mediante la inyección de reguladores + CD4 + CD25 + Foxp3 (Tregs), directamente en el vítreo de los pacientes.

Un nuevo enfoque terapéutico para la uveítis mediante terapia celular Ahora está claramente establecido que las células Treg desempeñan un papel fundamental en el control de las enfermedades autoinmunes. En el hombre o el ratón, un déficit profundo de Tregs se asocia con un síndrome autoinmune muy grave que conduce a la muerte. En la uveítis, también se ha demostrado que las Tregs controlan esta enfermedad en ratones deficientes. Se han informado Tregs en humanos. Además, nuestro grupo y otros han demostrado que varias enfermedades autoinmunes pueden prevenirse mediante la transferencia de Tregs en ratones. Por lo tanto, la terapia celular mediante inyección de Tregs genera esperanzas para el tratamiento de enfermedades autoinmunes e inflamatorias crónicas. Sin embargo, solo las Treg específicas y no policlonales tienen un fuerte potencial terapéutico cuando se administran sistémicamente. Las únicas Treg que se pueden usar en la clínica son las Treg policlonales purificadas por perlas magnéticas en las que se adsorbe el anticuerpo anti-CD25. Esta tecnología proporciona una preparación celular enriquecida en Tregs del 50 al 70%, el resto consiste en células T efectoras (Teffs), linfocitos B y células NK. Una alternativa terapéutica a la inyección sistémica de Treg específicas es inyectar Treg policlonales preactivadas directamente en el sitio objetivo de la enfermedad autoinmune, en condición de grado clínico purificado.

Descripción de la población de estudio. Pacientes con uveítis no infecciosa bilateral grave dependiente de esteroides. Las etiologías infecciosas o tumorales se excluyeron después de completar una revisión exhaustiva de los sistemas. Todos los pacientes tenían una prueba de Quantiferon negativa y una prueba de Mantoux normal. Las pruebas biológicas enviadas a laboratorios especializados eliminarán una infección activa. En algunos casos, el humor acuoso obtenido después de una punción AC y/o la biopsia vítrea obtenida después de una vitrectomía se analizarán para el ensayo de diagnóstico IL-10, factor de carga inmune o análisis PCR (toxoplasmosis, virus del herpes).

Fisiopatología de la uveítis en humanos. En el humor acuoso y vítreo de pacientes con uveítis se encontraron quimiocinas y citocinas inflamatorias, como IL-6, IFN-g, IL-8 y MCP-1 y, en ocasiones, IL-1ß, IL-2 y TNF-alfa. Dado el pequeño volumen disponible en estas muestras humanas (alrededor de 100 ml), los datos se obtienen con múltiples técnicas de detección mediante citometría de flujo, para medir la concentración de treinta citocinas y quimiocinas diferentes en un volumen de 50 microl.

Para ampliar el estudio a otras citocinas y quimiocinas, los investigadores también utilizaron una técnica semicuantitativa denominada "matriz de anticuerpos" que permite el análisis de un número de moléculas diferentes que van desde 30 a 170. Estos resultados preliminares, evaluados en algunos pacientes, confirman la presencia de perfil inflamatorio Th1 en el ojo de pacientes que padecen uveítis (no mostrado) y confirman nuestra estrategia

Riesgos asociados con las células inyectadas. No se han observado efectos secundarios de la inyección de Tregs en el modelo de ratón preclínico. En nuestras instalaciones de Bioterapias, la producción de Tregs, tal como se establece en este ensayo, contendrá del 50 al 70% de Tregs, definidas por el fenotipo CD4+ Foxp3+ CD25+. Por lo tanto, los investigadores probaron el efecto de los contaminantes de leucocitos sobre el efecto terapéutico en la uveítis en ratones. La presencia de dichos contaminantes efectores de células T, células B, células NK, células dendríticas o macrófagos no provocó efectos secundarios visibles a nivel clínico o histológico. Un segundo riesgo potencial es que las Treg policlonales inyectadas se hayan diferenciado en un tipo de célula diferente. Un estudio anterior mostró que las Treg humanas naturales pueden diferenciarse en linfocitos T de tipo Th17 en presencia de IL-2 o IL-15. Esta diferenciación se acentúa con la adición de IL-1ß, IL-6, IL-21 o IL-23. Aunque los investigadores no pueden excluir formalmente la posibilidad de que las Treg inyectadas con IVT puedan diferenciarse en células Th17, ya que este evento probablemente no se haya detectado en el ojo con uveítis (datos no mostrados).

Otro riesgo potencial de diseminación de las células inyectadas del ojo debido al reflujo en la conjuntiva durante la IVT. El último riesgo que se puede considerar es el desarrollo de linfoma no Hodgkin al crear un ambiente tolerogénico debido a las células T reguladoras. Este riesgo es idéntico al asociado con el actual tratamiento de referencia de la uveítis: agente inmunosupresor y corticosteroides. Estos riesgos nunca se han descrito completamente en la literatura tanto en animales como en humanos.

Dosis y número de pacientes. Los 3 niveles de dosis de Tregs serán respectivamente 0,4, 1,2 y 3,6 millones. La dosis más baja de 0,4 millones de Treg correspondiente a 2 veces la dosis efectiva en ratones.

Se inscribirán de dos a 18 pacientes en este ensayo. Se proporciona financiación para 12 pacientes.

Buenas prácticas clínicas (BPC) La investigación se llevará a cabo de conformidad con las BPC y la normativa y legislación vigente. Los investigadores certifican que la investigación se llevará a cabo de acuerdo con el protocolo de BPC Las instalaciones de Bioterapias realizan actividades de producción, control de calidad de acuerdo con la normativa vigente para la terapia celular y el cumplimiento de las buenas prácticas de Terapia Celular (BPTC) y también de acuerdo con los procedimientos operativos estándar ( COMPENSACIÓN). Se requiere autorización específica de la ANSM para la realización de este ensayo. Para concluir, ahora está claramente establecido que el enfoque de terapia celular de los reguladores CD4 + CD25 + Foxp3 (Tregs) juega un papel fundamental en el control de enfermedades autoinmunes en pruebas clínicas en humanos o ratones. . Por lo tanto, este ensayo clínico evalúa el efecto de Tolerancia-dosis de en pacientes tratados con Tregs por uveítis no infecciosa bilateral grave dependiente de esteroides.