Tratamento da Uveíte Bilateral Grave por IVT de Células T Reguladoras: Estudo da Tolerância de Dose (UVEREG)

Arsenal e limitações no tratamento da uveíte A uveíte é uma das principais causas de perda visual grave ou mesmo cegueira em crianças e adultos jovens. Em quase um terço dos casos, está associada a um agente infeccioso, outro terço está integrado no campo das doenças autoimunes como entidades sistémicas incluindo (doença de Behçet, sarcoidose, espondiloartropatia...) ou limitadas ao olho (retinocoroidopatia tipo Birdshot, oftalmia simpática, vasculite retiniana idiopática). O último terço permanece idiopático, onde apesar de uma pesquisa etiológica cuidadosa, nenhuma causa é identificada. Os corticosteróides sistêmicos costumam ser eficazes, mas têm efeitos colaterais significativos e a adesão do paciente costuma ser ruim. É por isso que às vezes são administrados diretamente no segmento posterior do olho (vítreo), mas o efeito é apenas temporário, muitas vezes ineficaz e também associado a efeitos colaterais. Além disso, alguns são dependentes de esteroides, necessitando de tratamento com agentes imunossupressores; que também podem ser responsáveis ​​por muitos efeitos adversos e nem sempre são eficazes. Nessas situações de impasse terapêutico, os pesquisadores propõem uma abordagem de terapia celular com injeção de reguladores CD4+CD25+Foxp3+ (Tregs), diretamente no vítreo dos pacientes.

Uma nova abordagem terapêutica uveíte por terapia celular Agora está claramente estabelecido que Tregs desempenham um papel crítico no controle de doenças autoimunes. No homem ou no camundongo, um déficit profundo nas Tregs está associado a uma síndrome autoimune muito grave, levando à morte. Na uveíte, também foi demonstrado que as Tregs controlam essa doença em camundongos deficientes. Tregs foram relatados em humanos. Além disso, nosso grupo e outros demonstraram que várias doenças autoimunes podem ser prevenidas pela transferência de Tregs em camundongos. Assim, a terapia celular por injeção de Tregs aumenta as esperanças no tratamento de doenças inflamatórias e autoimunes crônicas. No entanto, apenas as Tregs específicas e não policlonais apresentam forte potencial terapêutico quando administradas sistemicamente. As únicas Tregs que podem ser usadas na clínica são Tregs policlonais purificadas por esferas magnéticas às quais são adsorvidos anticorpos anti-CD25. Essa tecnologia fornece uma preparação celular enriquecida em Tregs de 50 a 70%, sendo o restante composto por células T efetoras (Teffs ), linfócitos B e células NK. Uma alternativa terapêutica à injeção sistêmica de Tregs específicas é injetar Tregs policlonais pré-ativadas diretamente no local alvo da doença autoimune, em condição de grau clínico purificado.

Descrição da população do estudo. Pacientes com uveíte não infecciosa bilateral grave dependente de esteroides. Etiologias infecciosas ou tumorais foram excluídas após a conclusão de uma revisão abrangente dos sistemas. Todos os pacientes tiveram teste de Quantiferon negativo e teste de Mantoux normal. Testes biológicos enviados a laboratórios especializados eliminarão uma infecção ativa. Em alguns casos, o humor aquoso obtido após torneira AC e/ou biópsia vítrea obtida após vitrectomia será analisado para ensaio diagnóstico de IL-10, fator de carga imune ou análise de PCR (toxoplasmose, herpes vírus).

Fisiopatologia da uveíte em humanos. Quimiocinas e citocinas inflamatórias, como IL-6, IFN-g, IL-8 e MCP-1 e, às vezes, IL-1ß, IL-2 e TNF-alfa foram encontradas no humor aquoso e vítreo de pacientes com uveíte . Dado o pequeno volume disponível nestas amostras humanas (cerca de 100 ml), os dados são obtidos com técnicas de detecção múltipla por citometria de fluxo, para medir a concentração de trinta citocinas e quimiocinas diferentes em um volume de 50 µl.

A fim de expandir o estudo para outras citocinas e quimiocinas, os pesquisadores também usaram uma técnica semi-quantitativa chamada ""array de anticorpos"", que permite a análise de várias moléculas diferentes, variando de 30 a 170. Esses resultados preliminares, avaliados em alguns pacientes, confirmam a presença de perfil inflamatório Th1 no olho de pacientes com uveíte (não mostrado) e confirmam nossa estratégia

Riscos associados às células injetadas. Nenhum efeito colateral da injeção de Tregs foi observado no modelo pré-clínico de camundongos. Em nossas instalações de Bioterapias, a produção de Tregs, conforme previsto neste ensaio, conterá 50 a 70% de Tregs, definido pelo fenótipo CD4 + Foxp3 + CD25 +. Portanto, os investigadores testaram o efeito de contaminantes de leucócitos no efeito terapêutico na uveíte em camundongos. A presença de tais contaminantes células T efetoras, células B, células NK, células dendríticas ou macrófagos não causou efeitos colaterais visíveis nos níveis clínico ou histológico. Um segundo risco potencial é que as Tregs policlonais injetadas tenham sido diferenciadas em um tipo de célula diferente. Estudo anterior mostrou que Tregs humanas naturais podem se diferenciar em linfócitos T tipo Th17 na presença de IL-2 ou IL-15. Essa diferenciação é acentuada pela adição de IL-1ß, IL-6, IL-21 ou IL-23 . Embora os investigadores não possam excluir formalmente a possibilidade de TIV injetada com Tregs poder se diferenciar em células Th17, uma vez que esse evento provavelmente não foi detectado na uveíte ocular (dados não mostrados).

Outro risco potencial de disseminação das células injetadas do olho devido ao refluxo na conjuntiva durante o IVT. O último risco que pode ser considerado é o desenvolvimento de linfoma não-Hodgkin pela criação de um ambiente tolerogênico devido às células T reguladoras. Este risco é idêntico ao associado ao atual tratamento de referência da uveíte: imunossupressores e corticosteróides. Esses riscos nunca foram totalmente descritos na literatura, tanto em animais quanto em humanos.

Dosagem e número de pacientes. Os 3 níveis de doses de Tregs serão respectivamente 0,4, 1,2 e 3,6 milhões. A dose mais baixa de 0,4 milhão de Tregs corresponde a 2 vezes a dose efetiva em camundongos.

Dois a 18 pacientes serão inscritos neste julgamento. O financiamento é fornecido para 12 pacientes.

Boas práticas clínicas (GCP) A pesquisa será conduzida de acordo com o GCP e a legislação e regulamentação vigentes. Os investigadores certificam que a pesquisa será conduzida de acordo com o protocolo do GCP As instalações da Biotherapies realizam atividades de produção, controle de qualidade de acordo com os regulamentos atuais para terapia celular e conformidade com as boas práticas de Terapia Celular (BPTC) e também de acordo com os procedimentos operacionais padrão ( POP). Autorização específica é necessária da ANSM para a realização deste ensaio Para concluir, agora está claramente estabelecido que a abordagem de terapia celular de reguladores CD4 + CD25 + Foxp3 (Tregs) desempenha um papel crítico no controle de doenças autoimunes em testes clínicos em humanos ou camundongos . Portanto, este ensaio clínico avalia o efeito da dose de tolerância em pacientes tratados com Tregs para uveíte não infecciosa bilateral grave dependente de esteroides.