Trattamento dell'uveite grave bilaterale mediante IVT delle cellule T regolatrici: studio della tolleranza della dose (UVEREG)

Arsenale e limitazioni nel trattamento dell'uveite L'uveite è una delle principali cause di grave perdita della vista o addirittura di cecità nei bambini e nei giovani adulti. In quasi un terzo dei casi è associato a un agente infettivo, un altro terzo è integrato nel campo delle malattie autoimmuni come entità sistemiche tra cui (malattia di Behçet, sarcoidosi, spondiloartropatia ...) o limitato all'occhio (retinocoroidopatia di tipo Birdshot, oftalmia simpatica, vasculite retinica idiopatica). L'ultimo terzo rimane idiopatico, dove nonostante un'attenta ricerca eziologica, non viene identificata alcuna causa. I corticosteroidi sistemici sono spesso efficaci ma hanno effetti collaterali significativi e la compliance del paziente è spesso scarsa. Ecco perché a volte vengono somministrati direttamente nel segmento posteriore dell'occhio (vitreo), ma l'effetto è solo temporaneo, spesso inefficace e anche associato ad effetti collaterali. Inoltre, alcuni sono steroido-dipendenti e richiedono un trattamento con agenti immunosoppressori; che possono anche essere responsabili di molti effetti negativi e non sono sempre efficaci. In queste situazioni di impasse terapeutica, i ricercatori propongono un'iniezione di approccio di terapia cellulare di regolatori CD4 + CD25 + Foxp3 + (Tregs), direttamente nel corpo vitreo dei pazienti.

Un nuovo approccio terapeutico all'uveite mediante terapia cellulare È ora chiaramente stabilito che le Treg svolgono un ruolo fondamentale nel controllo delle malattie autoimmuni. Nell'uomo o nel topo, un profondo deficit di Treg è associato a una sindrome autoimmune molto grave, che porta alla morte. Nell'uveite, è anche dimostrato che le Treg controllano questa malattia nei topi carenti. Treg sono stati segnalati negli esseri umani. Inoltre, il nostro gruppo e altri hanno dimostrato che varie malattie autoimmuni possono essere prevenute mediante il trasferimento di Treg nei topi. Pertanto, la terapia cellulare mediante iniezione di Treg fa sperare nel trattamento delle malattie infiammatorie croniche e autoimmuni. Tuttavia, solo le Treg specifiche e non policlonali, hanno un forte potenziale terapeutico se somministrate per via sistemica. Le uniche Treg che possono essere utilizzate in clinica sono Treg policlonali purificate da biglie magnetiche alle quali vengono adsorbiti anticorpi anti-CD25. Questa tecnologia fornisce una preparazione cellulare arricchita in Tregs dal 50 al 70%, il resto costituito da cellule T effettrici (Teffs), linfociti B e cellule NK. Un'alternativa terapeutica all'iniezione sistemica di Treg specifiche consiste nell'iniettare Treg policlonali preattivate direttamente nel sito bersaglio della malattia autoimmune, in condizioni di grado clinico purificato.

Descrizione della popolazione in studio. Pazienti con uveite non infettiva steroide-dipendente grave bilaterale. Le eziologie infettive o tumorali sono state escluse dopo il completamento di una revisione completa dei sistemi. Tutti i pazienti avevano un test Quantiferon negativo e un test Mantoux normale. I test biologici inviati a laboratori specializzati elimineranno un'infezione attiva. In alcuni casi, l'umor acqueo ottenuto dopo AC tap e/o la biopsia vitreale ottenuta dopo vitrectomia saranno analizzati per il test diagnostico IL-10, il fattore di carico immunitario o l'analisi PCR (toxoplasmosi, herpes virus).

Fisiopatologia dell'uveite nell'uomo. Chemochine e citochine infiammatorie, come IL-6, IFN-g, IL-8 e MCP-1 e talvolta IL-1ß, IL-2 e TNF-alfa sono state trovate nell'umore acqueo e nel corpo vitreo di pazienti con uveite. Dato il piccolo volume disponibile in questi campioni umani (circa 100 ml), i dati sono ottenuti con molteplici tecniche di rilevamento mediante citometria a flusso, per misurare la concentrazione di trenta diverse citochine e chemochine in un volume di 50 microl.

Al fine di espandere lo studio ad altre citochine e chemochine, i ricercatori hanno utilizzato anche una tecnica semi-quantitativa denominata ""array di anticorpi"" che consente l'analisi di un numero di molecole diverse compreso tra 30 e 170. Questi risultati preliminari, valutati in alcuni pazienti, confermano la presenza del profilo infiammatorio Th1 nell'occhio di pazienti affetti da uveite (non mostrato) e confermano la nostra strategia

Rischi associati alle cellule iniettate. Nessun effetto collaterale dell'iniezione di Tregs è stato osservato nel modello murino preclinico. Nelle nostre strutture Biotherapies, la produzione di Treg, come previsto in questo saggio, conterrà dal 50 al 70% di Treg, definita dal fenotipo CD4 + Foxp3 + CD25 +. Pertanto, i ricercatori hanno testato l'effetto dei contaminanti leucocitari sull'effetto terapeutico nell'uveite nei topi. La presenza di tali contaminanti cellule effettrici T, cellule B, cellule NK, cellule dendritiche o macrofagi non ha causato effetti collaterali visibili a livello clinico o istologico. Un secondo rischio potenziale è che le Treg policlonali iniettate siano state differenziate in un diverso tipo cellulare. Uno studio precedente ha dimostrato che le Treg umane naturali possono differenziarsi in linfociti T di tipo Th17 in presenza di IL-2 o IL-15. Questa differenziazione è accentuata dall'aggiunta di IL-1ß, IL-6, IL-21 o IL-23. Sebbene gli investigatori non possano escludere formalmente la possibilità che l'IVT iniettato da Tregs possa differenziarsi in cellule Th17, poiché questo evento non è stato probabilmente rilevato nell'occhio con uveite (dati non mostrati).

Un altro potenziale rischio di disseminazione delle cellule iniettate dall'occhio a causa del reflusso alla congiuntiva durante l'IVT. L'ultimo rischio che può essere considerato è lo sviluppo del linfoma non-Hodgkin creando un ambiente tolerogenico dovuto alle cellule T regolatorie. Questo rischio è identico a quello associato all'attuale trattamento di riferimento dell'uveite: agenti immunosoppressori e corticosteroidi. Questi rischi non sono mai stati completamente descritti in letteratura sia negli animali che nell'uomo.

Dosaggio e numero di pazienti. I 3 livelli di dosi di Tregs saranno rispettivamente di 0,4, 1,2 e 3,6 milioni. La dose più bassa di 0,4 milioni di Treg corrispondente a 2 volte la dose efficace nei topi.

In questo studio verranno arruolati da due a 18 pazienti. Il finanziamento è previsto per 12 pazienti.

Buona pratica clinica (GCP) La ricerca sarà condotta in accordo con la GCP e la legislazione e la regolamentazione in vigore. Gli investigatori certificano che la ricerca sarà condotta in conformità con il protocollo di GCP Le strutture di Biotherapies svolgono attività di produzione, controllo di qualità secondo le normative vigenti per la terapia cellulare e il rispetto delle buone pratiche di terapia cellulare (BPTC) e anche secondo le procedure operative standard ( SOP). È richiesta specifica autorizzazione da ANSM per la realizzazione di questo saggio Per concludere, è ormai chiaramente stabilito che l'approccio della terapia cellulare dei regolatori CD4 + CD25 + Foxp3 (Tregs) gioca un ruolo critico nel controllo delle malattie autoimmuni nei test clinici sull'uomo o sul topo . Pertanto, questo studio clinico valuta l'effetto di Tolerance-dose di nei pazienti trattati con Tregs per uveite non infettiva grave bilaterale steroide-dipendente.