- ICH GCP
- Registro de ensayos clínicos de EE. UU.
- Ensayo clínico NCT04413292
Survivina y fibulina-3 en enfermedades respiratorias benignas y malignas
Niveles de expresión local y circulante de survivina y fibulina-3 en enfermedades respiratorias benignas y malignas
Propósito: Survivin es un miembro común de los inhibidores de la familia de proteínas de apoptosis (IAP) con un papel doble en la promoción de la proliferación celular y la prevención de la apoptosis. La fibulina-3, una glicoproteína de la matriz, se presentó recientemente como un nuevo biomarcador prometedor para el mesotelioma pleural maligno. El objetivo de este estudio fue validar los niveles de expresión de survivina y fibulina-3 en enfermedades respiratorias benignas y malignas.
Pacientes y métodos: El estudio incluyó a 73 pacientes, con diversas enfermedades respiratorias benignas y malignas. Para la validación de los datos, se eligió un grupo de control que incluía 20 sujetos sanos. Se realizaron las valoraciones clínicas y radiológicas de los individuos incluidos. Los niveles séricos de survivina y fibulina-3 se midieron utilizando kits de ensayo ELISA, mientras que sus expresiones locales en el pulmón y la pleura se evaluaron mediante análisis de transferencia Western.
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Descripción detallada
Diseño del estudio y participantes El estudio de cohorte prospectivo actual se llevó a cabo con 73 pacientes de ambos sexos, con enfermedades respiratorias benignas y malignas recientemente diagnosticadas, reclutados de los Departamentos de Oncología y Cirugía Cardio-Torácica, Hospitales Universitarios de Qena, Universidad del Valle del Sur, Egipto. Los pacientes incluidos se clasificaron en 4 grupos. El grupo A incluyó 21 pacientes con cáncer de pulmón, el grupo B incluyó 21 pacientes con diversas enfermedades pulmonares benignas, el grupo D incluyó 15 pacientes con mesotelioma pleural maligno (MPM) y el grupo E incluyó 16 pacientes con diversas enfermedades pleurales benignas. Además, 20 sujetos sanos no relacionados de la misma edad y sexo sirven como grupo de control (grupo C). Se excluyeron los pacientes con insuficiencia renal, insuficiencia hepática, compromiso cardiopulmonar grave, coagulopatía o inestabilidad hemodinámica. El estudio fue aprobado por el comité de ética de la Facultad de Medicina de la Universidad de South Valley, Qena, Egipto, y se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de todos los sujetos incluidos. La duración del estudio fue de dos años desde el 1 de enero de 2017 hasta el 30 de diciembre de 2019.
Recopilación de datos Se tomaron antecedentes completos y exámenes clínicos completos para cada paciente incluido. Además, se realizaron evaluaciones radiológicas por CXR y CT simples, e investigaciones de laboratorio de rutina (lactato deshidrogenasa sérica (LDH), proteína total, albúmina, funciones hepáticas y renales, ESR y CBC). Se tomaron múltiples biopsias pulmonares y se enviaron para examen histopatológico cuando estuvo indicado. Se realizó toracocentesis en los casos con derrame pleural comprobado. Se realizó el análisis estándar del líquido pleural que incluyó: pH, pruebas bioquímicas de pleura/suero (LDH, glucosa, albúmina y adenosina desaminasa (ADA), citología y pruebas microbiológicas (cultivo Z-N, L-J) y recuento diferencial de células) y los criterios originales de Light ( proporción de líquido pleural/proteína sérica >0,5, proporción de LDH pleural/sérica >0,6 o LDH en líquido pleural más de dos tercios del límite superior del valor sérico normal) para discriminar los derrames pleurales exudativos de los trasudativos. Se realizó toracoscopio para pacientes con citología indecisa o análisis de líquido pleural, y se tomaron múltiples biopsias pleurales para examen histopatológico. El derrame pleural maligno se diagnosticó si la citología del líquido pleural o los hallazgos de la biopsia pleural eran positivos para malignidad.
La estadificación del MPM se realizó utilizando van Meerbeeck et al, mientras que la del cáncer de pulmón se evaluó según Lim et al.
Muestras de sangre y colecciones de líquido de derrame pleural Se extrajeron cinco ml de sangre venosa de cada sujeto incluido utilizando tubos de gel separador de suero y se dejó coagular a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se centrifugó durante 15 minutos a 1000 g. Los sueros separados se almacenaron en alícuotas usando criotubos de 1 ml a -80°C para posteriores ensayos bioquímicos de survivina y fibulina-3. Además, se centrifugaron 10 ml de fluidos pleurales de los pacientes incluidos durante 15 minutos a 1000 g y se almacenaron en alícuotas utilizando criotubos de 1 ml a -800 °C para ensayos moleculares posteriores de los niveles de expresión de survivina y fibulina-3 mediante análisis de transferencia Western.
Ensayos ELISA de IGF-I y survivina Las determinaciones cuantitativas de survivina y fibulina-3 en suero se lograron utilizando kits de ensayo ELISA disponibles comercialmente suministrados por Chongqing Biospes Co., Ltd, China con números de catálogo BYE3519 y BYEK2017 respectivamente. Los ensayos se realizaron utilizando un lector ELISA de microplaca (EMR 500, EE. UU.), de acuerdo con el protocolo de fabricación.
Evaluaciones de transferencia Western de los niveles de expresión de survivina y fibulina-3 Se homogeneizaron biopsias pulmonares y pleurales en tampón de lisis RIPA enfriado con hielo (Sigma-Aldrich, Milán, Italia), que contenía un cóctel de inhibidor de proteasa al 1% (Cell Signaling Technology, Inc., MA, EE. UU.) utilizando un homogeneizador de rotor-estator Potter-Elvehjem (homogeneizador de vidrio/teflón), equipado con un mortero de teflón y almacenado congelado a -70 °C para la evaluación posterior de las expresiones de fibulina-3 y survivina nuclear tisular mediante la técnica de transferencia Western.
Se desnaturalizaron las proteínas en cada pulmón correspondiente, homogeneizados de tejido pleural o muestra de derrame pleural a 95 °C durante 5 minutos en tampón Laemmli 2x seguido de la adición de 2-mercaptoetanol al 5%. La electroforesis SDS-PAGE se logró cargando 50 µg de proteína por carril a 75 voltios mediante gel de resolución (18 % para survivina y 15 % para fibulina-3) seguido de 125 voltios durante aproximadamente 2 horas y transferidos a una membrana de PVDF usando T-77 Unidad de transferencia semiseca ECL (Amersham BioSciences UK Ltd) durante 2 horas. La inmunotransferencia se realizó incubando la membrana de PVDF en tampón TBS que contenía Tween al 0,1 % y leche descremada al 5 % durante una hora a 4 °C, seguido de una incubación durante la noche a 4 °C con anticuerpo policlonal anti-survivina de conejo (Bioss Inc., Massachusetts , EE. UU.) y anticuerpo policlonal anti-fibulina-3 de conejo (Novus Biologicals, LLC, Littleton, CO, EE. UU.) a una dilución de 1:1500. Después de lavarse tres veces con tampón TBST, cada membrana se incubó durante 1 hora a temperatura ambiente con un anticuerpo secundario anti-ratón de cabra conjugado con fosfatasa alcalina (Novus Biologicals, LLC, Littleton, CO, EE. UU.) a una dilución de 1:5000 . Después de lavarse cuatro veces en TBST, el anticuerpo unido a la membrana se detectó con un kit de detección de sustrato BCIP/NBT disponible comercialmente (Genemed Biotechnologies, Inc., CA, EE. UU.). La carga de proteína equivalente para cada carril se confirmó extrayendo y volviendo a transferir cada membrana a 4 °C contra el anticuerpo monoclonal de ratón anti β-actina (Santa Cruz Biotechnology, Inc., CA, EE. UU.) a una dilución de 1:5000. El análisis se repitió 3 veces para asegurar la reproducibilidad de los resultados. La cuantificación se realizó utilizando el software ImageJ y se expresó como la densidad de banda en relación con la de β-actina.
Análisis estadístico La entrada y el análisis de datos se realizaron con SPSS versión 19 (Statistical Package for Social Science). Los datos se presentaron como número, porcentaje, media y desviación estándar para los datos paramétricos. Para la comparación de variables cualitativas se utilizó la prueba de Chi-cuadrado y la prueba exacta de Fisher. Se utilizó la prueba t independiente para comparar variables cuantitativas entre dos grupos. La correlación de Pearson se realizó para medir la correlación entre variables cuantitativas. Se utilizó el programa Medcalc para calcular la sensibilidad, la especificidad, los valores predictivos positivos y negativos con el cálculo del AUC (IC del 95 %). El valor de p se consideró estadísticamente significativo cuando <0,05.
Tipo de estudio
Inscripción (Actual)
Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Descripción
Criterios de inclusión:
- cualquier paciente con enfermedades respiratorias benignas o malignas y acepta ser incluido en el estudio
Criterio de exclusión:
- Se excluyeron pacientes con insuficiencia renal, insuficiencia hepática, compromiso cardiopulmonar severo, coagulopatía o hemodinámicamente inestables.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Grupo A
21 pacientes con cáncer de pulmón
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análisis de expresión de biomarcadores
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Grupo B
21 pacientes con diversas enfermedades pulmonares benignas
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análisis de expresión de biomarcadores
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Grupo C
Controles saludables
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análisis de expresión de biomarcadores
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Grupo D
15 pacientes con mesotelioma pleural maligno (MPM)
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análisis de expresión de biomarcadores
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Grupo E
16 pacientes con diversas enfermedades pleurales benignas
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análisis de expresión de biomarcadores
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
---|---|---|
analizar los niveles de expresión locales y circulantes de ambos biomarcadores en diversas enfermedades pulmonares y pleurales benignas y malignas
Periodo de tiempo: 2 años
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conocer las posibles correlaciones entre ellos y su utilidad en el diagnóstico y discriminación de lesiones malignas de benignas que afectan a las vías respiratorias.
|
2 años
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (ACTUAL)
Finalización primaria (ACTUAL)
Finalización del estudio (ACTUAL)
Fechas de registro del estudio
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Más información
Términos relacionados con este estudio
Palabras clave
Términos MeSH relevantes adicionales
- Neoplasias
- Neoplasias por sitio
- Enfermedades bronquiales
- Neoplasias de las vías respiratorias
- Neoplasias torácicas
- Neoplasias Pulmonares
- Trastornos de la respiración
- Enfermedades de las vías respiratorias
- Neoplasias Bronquiales
- Mecanismos moleculares de acción farmacológica
- Inhibidores de enzimas
- Inhibidores de la proteasa
- Inhibidores de cisteína proteinasa
- Proteína BIRC5, humana
Otros números de identificación del estudio
- SVU-QFM-100
Plan de datos de participantes individuales (IPD)
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Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
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