Respuestas de anticuerpos a la infección por COVID-19 en pacientes hospitalizados (No-SARS)
Respuestas de anticuerpos a la infección por SARS-CoV 2 (COVID-19) en pacientes hospitalizados. Un estudio observacional prospectivo
1.5. ¿Por qué este estudio clínico?
La prevalencia de seropositividad después de la infección por SARS-CoV 2 podría tener sus propios beneficios potenciales en términos de predecir el final de la pandemia y la validez de la inmunidad colectiva. No está claro si la infección por SARS-CoV 2 tendría una inmunidad mediada por anticuerpos de larga duración y si la persistencia de los anticuerpos depende de la gravedad de la enfermedad. Depende sobre la gravedad de la enfermedad. Si se proporciona evidencia sobre la persistencia de anticuerpos que reflejan la respuesta inmunitaria protectora, el serodiagnóstico será una herramienta importante para identificar a las personas con diversos riesgos de infección y aquellas que necesitan recibir las próximas vacunas.
El estudio clínico prospectivo propuesto aquí evaluará la prevalencia de seropositividad después de la infección por SARS-CoV 2 en pacientes críticos en comparación con aquellos que no requieren ingreso en la unidad de cuidados intensivos (UCI) o ventilación invasiva con respecto a los niveles de IgM e IgG.
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Descripción detallada
1.1. Prevalencia de la infección por coronavirus:
La infección por el coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2) ha causado una pandemia en curso en la que se informó el primer caso en Wuhan, China, a principios de diciembre de 2019 y luego se propagó exponencialmente al resto del mundo.
La enfermedad tiene un amplio espectro de gravedad donde la mayoría de los casos han causado síntomas leves o ningún síntoma, el 15-20 % requiere hospitalización y los casos graves que necesitan ingreso en la unidad de cuidados intensivos representan aproximadamente el 3-5 %, lo que varía según los países con mortalidad informada. osciló entre el 30 y el 80 % para los pacientes con ventilación mecánica.
1.2. Respuesta inmune a la infección por coronavirus.
El sistema inmunitario responde a la infección por coronavirus de forma primaria mediante el desarrollo de respuestas de anticuerpos humorales, en las que los anticuerpos específicos de S y, en menor medida, de N se provocan típicamente en individuos infectados. Estudios previos realizados durante las epidemias del síndrome respiratorio agudo severo (SARS) y el síndrome respiratorio del Medio Oriente (MERS) identificaron anticuerpos específicos de S y N que se obtienen 2-3 semanas después de la infección y persisten durante varias semanas o meses. Durante esta pandemia de SARS-CoV-2, los estudios han revelado evidencia de seroconversión en aquellos pacientes que se recuperaron de infecciones por SARS-CoV-2 con un grado variable de respuesta.
1.3. Respuesta inmune a la infección por SARS-CoV 2.
Una serie de casos informó la respuesta de anticuerpos al SARS-CoV-2 en algunos pacientes y trabajadores de la salud en una unidad de diálisis pediátrica después del contacto con un paciente seropositivo donde la mayoría de ellos estaban asintomáticos.
Algunos estudios mostraron diferentes sensibilidades de seroconversión y cambios en los títulos a lo largo del tiempo según el grado de los síntomas, donde aquellos que tenían síntomas tenían una respuesta de anticuerpos específicos contra S (IgM/IgG) más alta y más sostenible en sus sueros en comparación con los pacientes asintomáticos.
Otro estudio de 149 pacientes que se recuperaron de una enfermedad leve por SARS-CoV-2 a quienes se les extrajo sangre después de un promedio de 39 días después del inicio de los síntomas tenían títulos neutralizantes variables: menos de 1:50 en el 33% y menos de 1:1,000 en el 79%, mientras que solo el 1% mostró títulos superiores a 1:5.000 y concluyen que la mayoría de los plasmas convalecientes obtenidos de individuos que se recuperan del SARS-CoV-2 no contienen niveles altos de actividad de anticuerpos neutralizantes.
1.4. Respuesta inmune a la infección por SARS-CoV 2 y gravedad de la enfermedad.
Otros investigadores informaron que en el grupo asintomático, la mediana de duración de la excreción viral fue de 19 días (rango intercuartil (RIC), 15-26 días). La duración más corta de excreción viral en el grupo asintomático fue de 6 días y la más larga fue de 45 días. En pacientes con síntomas leves, la mediana de duración de la excreción viral fue de 14 días (IQR, 9-22 días). Curiosamente, el 81,1 % de los pacientes asintomáticos dieron positivo para (antígeno: ¿específico de S?) IgG 3-4 semanas después de la exposición y el 83,8 % del grupo sintomático dio positivo para (antígeno: ¿específico de S?) IgG 3-4 semanas después de la exposición. En la fase aguda, (antígeno por especificar) niveles de IgG en el grupo asintomático (mediana S/CO, 3,4; IQR, 1,6-10,7) fueron significativamente menores (P = 0,005) en relación con el grupo sintomático (mediana S/CO, 20,5; IQR, 5,8-38,2). Cabe destacar que el 93,3 % del grupo asintomático experimentó una disminución en los niveles de IgG durante la fase de convalecencia (8 semanas después de la hospitalización) en comparación con el 96,8 % del grupo sintomático: la mediana del porcentaje de disminución fue del 71,1 % (rango, 32,8-88,8 % ) y 76,2% (rango, 10,9-96,2%) respectivamente.
Otros investigadores publicados en línea en medRxiv, y aún no revisados por pares, informaron que el 40 % de las personas asintomáticas se volvieron seronegativas y el 12,9 % del grupo sintomático se volvió negativo para (antígeno) IgG en la fase de convalecencia temprana (8 semanas).
Se espera que los pacientes con SARS-Cov2 que sobrevivieron a una enfermedad crítica tengan una respuesta inmunitaria máxima que los ayudó a sobrevivir a su enfermedad, se investigará si esta respuesta tiene un efecto prolongado o no en comparación con otros pacientes hospitalizados que no están en estado crítico con menos gravedad de la enfermedad. ,
Objetivos
Dada la evidencia disponible en esta área, los investigadores medirían los niveles de anticuerpos de unión específicos de S y N, así como los anticuerpos neutralizantes de N de pacientes con COVID-19 con diferente gravedad de la enfermedad en los diferentes períodos de tiempo.
Los objetivos generales de este ensayo clínico observacional paralelo prospectivo son probar la persistencia de las respuestas de anticuerpos humorales medidas por los niveles de anticuerpos de unión y neutralización después de la infección por coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2) en pacientes hospitalizados con diferente gravedad de enfermedad en diferentes intervalos de tiempo.
Aquí, los investigadores tienen como objetivo medir la proporción de pacientes con anticuerpos positivos específicos de S y específicos de N durante 4 a 6 y al menos 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2 en pacientes hospitalizados en la UCI y fuera de la UCI.
Los investigadores proporcionarían información a la comunidad científica para predecir la inmunidad colectiva a corto plazo de la enfermedad.
Hipótesis
Los investigadores plantean la hipótesis de que, en comparación con los pacientes hospitalizados sintomáticos, es probable que los pacientes en estado crítico produzcan anticuerpos protectores duraderos contra este virus después de la infección por SARS-CoV-2.
DISEÑO DEL ESTUDIO
Un estudio longitudinal observacional prospectivo multicéntrico en pacientes con SARS-CoV 2. El estudio se llevará a cabo de acuerdo con las Pautas de Buena Práctica Clínica (BPC) y cumplirá con los principios de la Declaración de Helsinki. El estudio se inscribirá en un registro público.
Tipo de estudio
Inscripción (Anticipado)
Contactos y Ubicaciones
Ubicaciones de estudio
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Eastern
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Dammam, Eastern, Arabia Saudita, 31952
- Imam Abdulrahman Bin Faisal University
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
Acepta Voluntarios Saludables
Géneros elegibles para el estudio
Método de muestreo
Población de estudio
Los pacientes hospitalizados sintomáticos (UCI y no UCI) con infección por SARS-CoV 2 confirmada por laboratorio admitidos en los centros participantes serán evaluados, los pacientes elegibles recibirán su consentimiento y luego se evaluará el momento del inicio de los síntomas.
Los pacientes se incluirán para la prueba de los niveles de anticuerpos específicos del virus si pasan al menos 2 semanas desde el inicio de los síntomas.
Descripción
Criterios de inclusión:
- Infección sintomática con al menos 2 semanas de intervalo desde el inicio de los síntomas.
- COVID-19 confirmado por laboratorio con prueba de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) positiva para SARS-CoV-2 de hisopos nasofaríngeos u orofaríngeos.
- Pacientes hospitalizados en salas aisladas o UCI.
- Acuerdo para la toma de muestras de sangre durante el transcurso del estudio.
Criterio de exclusión:
- Rechazar el consentimiento para participar.
- El embarazo.
- Pacientes asintomáticos, que son PCR positivos durante la detección de rutina al ingreso
- Administración de inmunoglobulinas dentro de los 3 meses previos incluyendo plasma de convaleciente de Covid-19.
- Pacientes con órdenes de no reanimar
- Pacientes con enfermedades terminales independientemente de la gravedad de la infección por SARS-CoV 2.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
Cohortes e Intervenciones
Grupo / Cohorte |
Intervención / Tratamiento |
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Pacientes críticos con SARS-Cov2
Pacientes en estado crítico con insuficiencia respiratoria hipoxémica aguda definida como aquellos ingresados en la UCI y que reciben ventilación mecánica (invasiva o no invasiva) u oxígeno suplementario de alto nivel (a través de una cánula nasal de alto flujo o mascarilla facial sin reinhalación a una tasa de flujo de 15 L por min o más), en o durante la hospitalización
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Los niveles de anticuerpos de unión específicos de S y de N se medirán mediante un ensayo de inmunoabsorción enzimático (ELISA).
Brevemente, se recubrirán placas de 96 pocillos con proteínas S o N recombinantes purificadas y se incubarán durante 1 hora a temperatura ambiente.
A continuación, las placas se lavarán cinco veces con 1X PBS.
Las regiones no unidas de las proteínas S recubiertas se bloquean con un 5 % de leche descremada en polvo.
Después de la incubación durante la noche a 4 C.
Las placas se lavan varias veces con 5X PBS.
Las muestras de suero de los pacientes se añaden por duplicado y se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente.
Después de varios lavados.
Se añade conjugado anti-human IgG HRP.
Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, las placas se lavan con PBS 1X cinco veces 3,3', 5,5', se añade sustrato de tetrametilbencidina (TMB) a cada pocillo y se incuban durante 5 minutos.
Luego se detendrá la reacción con ácido sulfúrico 0,2 M y se medirá la absorbancia a 450 nm.
Los anticuerpos neutralizantes contra la proteína S del SARS-CoV-2 se miden mediante un ensayo de microneutralización de PV.
Brevemente, los plásmidos individuales que expresan el gen S.fl, los genes de luciferasa y los genes indicadores se cotransfectan en células 293T para producir pseudovirus que expresan luciferasa.
A continuación, se añaden los pseudovirus en un volumen igual a placas de 96 pocillos y se incuban a 37ºC durante 1 hora.
A continuación, las células 293T que expresan ACE2 se añaden a las placas de 96 pocillos con 100 ul de sueros de pacientes por duplicado.
Después de una sola ronda de replicación, las células se lisan con tampón de lisis.
La actividad de luciferasa se mide con el kit de ensayo de luciferasa.
La actividad de las luciferasas es proporcional al número de células infectadas.
A continuación, se mide la actividad de luciferasa mediante el dispositivo luminómetro y se calcula la tasa de neutralización.
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Pacientes hospitalizados sintomáticos de SARS-Cov2 no críticos
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Los niveles de anticuerpos de unión específicos de S y de N se medirán mediante un ensayo de inmunoabsorción enzimático (ELISA).
Brevemente, se recubrirán placas de 96 pocillos con proteínas S o N recombinantes purificadas y se incubarán durante 1 hora a temperatura ambiente.
A continuación, las placas se lavarán cinco veces con 1X PBS.
Las regiones no unidas de las proteínas S recubiertas se bloquean con un 5 % de leche descremada en polvo.
Después de la incubación durante la noche a 4 C.
Las placas se lavan varias veces con 5X PBS.
Las muestras de suero de los pacientes se añaden por duplicado y se incuban durante 1 hora a temperatura ambiente.
Después de varios lavados.
Se añade conjugado anti-human IgG HRP.
Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, las placas se lavan con PBS 1X cinco veces 3,3', 5,5', se añade sustrato de tetrametilbencidina (TMB) a cada pocillo y se incuban durante 5 minutos.
Luego se detendrá la reacción con ácido sulfúrico 0,2 M y se medirá la absorbancia a 450 nm.
Los anticuerpos neutralizantes contra la proteína S del SARS-CoV-2 se miden mediante un ensayo de microneutralización de PV.
Brevemente, los plásmidos individuales que expresan el gen S.fl, los genes de luciferasa y los genes indicadores se cotransfectan en células 293T para producir pseudovirus que expresan luciferasa.
A continuación, se añaden los pseudovirus en un volumen igual a placas de 96 pocillos y se incuban a 37ºC durante 1 hora.
A continuación, las células 293T que expresan ACE2 se añaden a las placas de 96 pocillos con 100 ul de sueros de pacientes por duplicado.
Después de una sola ronda de replicación, las células se lisan con tampón de lisis.
La actividad de luciferasa se mide con el kit de ensayo de luciferasa.
La actividad de las luciferasas es proporcional al número de células infectadas.
A continuación, se mide la actividad de luciferasa mediante el dispositivo luminómetro y se calcula la tasa de neutralización.
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Cambios en los niveles de anticuerpos específicos contra S en pacientes gravemente enfermos en comparación con casos leves.
Periodo de tiempo: Cambios desde el inicio (4 a 6 semanas) a las 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Las mediciones dependen de los reconocimientos de epítopos para proteínas S sintéticas adsorbidas.
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Cambios desde el inicio (4 a 6 semanas) a las 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Cambios en los niveles de anticuerpos específicos de N en pacientes gravemente enfermos en comparación con casos leves.
Periodo de tiempo: Cambios desde el inicio (4 a 6 semanas) a las 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Las mediciones dependen de los reconocimientos de epítopos para proteínas N sintéticas adsorbidas
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Cambios desde el inicio (4 a 6 semanas) a las 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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S anticuerpos de unión específicos de SARS-CoV-2
Periodo de tiempo: 4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Los títulos de los anticuerpos de unión específica S del SARS-CoV-2 se analizarían como se describe en las intervenciones
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4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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N anticuerpos de unión específicos de SARS-CoV-2
Periodo de tiempo: 4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Los títulos de los anticuerpos de unión específica a N del SARS-CoV-2 se analizarían como se describe en las intervenciones
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4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Anticuerpos neutralizantes dirigidos contra la proteína S del SARS-CoV-2
Periodo de tiempo: 4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Los títulos de los anticuerpos neutralizantes dirigidos contra la proteína S del SARS-CoV-2 se analizarían como se describe en las intervenciones.
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4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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La categoría de gravedad de los enfermos críticos
Periodo de tiempo: Día 0, 4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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La categoría de gravedad de los pacientes en estado crítico se estimaría utilizando una puntuación APACHI II.
Puntuación mínima = 0; puntuación máxima = 71.
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Día 0, 4 a 6 semanas y 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Duración de la UCI
Periodo de tiempo: Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Duración de la estancia en la UCI desde el día del ingreso a la UCI
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Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Duración de las estancias en el hospital
Periodo de tiempo: Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Duración de la estancia hospitalaria desde el día del ingreso hospitalario
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Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Estado vivo a los 28 días
Periodo de tiempo: Durante 28 días después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Si los pacientes están vivos o muertos a través de una entrevista telefónica.
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Durante 28 días después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Estado vivo a los 90 días
Periodo de tiempo: Durante 90 días después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Si los pacientes están vivos o muertos a través de una entrevista telefónica.
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Durante 90 días después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Correlación entre los niveles de anticuerpos neutralizantes S y la gravedad de la enfermedad
Periodo de tiempo: Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Correlacionar los niveles de anticuerpos neutralizantes S en pacientes gravemente enfermos en comparación con los casos leves.
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Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Correlación entre los niveles de anticuerpos neutralizantes de N y la gravedad de la enfermedad
Periodo de tiempo: Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Correlacionar los niveles de anticuerpos neutralizantes de N en pacientes gravemente enfermos en comparación con los casos leves.
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Durante 16 semanas después del inicio de los síntomas de la infección por SARS-Cov2
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Mohammed S Alshahrani, MD, Critical Care and emergency Department, Associate Professor, College of Medicine, Imam Abdulrahman Ben Faisal University
- Investigador principal: Iman Almansour, PhD, Associate Professor, Department of epidemic disease research, IRMC, IAU
- Director de estudio: Mohamed R El Tahan, MD, Anesthesiology Department, Associate Professor, College of Medicine
Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (ANTICIPADO)
Finalización primaria (ANTICIPADO)
Finalización del estudio (ANTICIPADO)
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
Publicado por primera vez (ACTUAL)
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (ACTUAL)
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
Última verificación
Más información
Términos relacionados con este estudio
Términos MeSH relevantes adicionales
- Procesos Patológicos
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- COVID-19
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- Efectos fisiológicos de las drogas
- Factores inmunológicos
- Anticuerpos
- Anticuerpos, Bloqueo
- Inmunoglobulinas
Otros números de identificación del estudio
- ICU-06072020
Plan de datos de participantes individuales (IPD)
¿Planea compartir datos de participantes individuales (IPD)?
Descripción del plan IPD
Marco de tiempo para compartir IPD
Criterios de acceso compartido de IPD
Tipo de información de apoyo para compartir IPD
- PROTOCOLO DE ESTUDIO
- SAVIA
- CIF
- RSC
Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
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