Biomarcadores de diagnóstico y pronóstico para enfermedades relacionadas con IgG4.

Recogida de datos Los datos se recogerán de la historia clínica electrónica de la base de datos del hospital.

• Evaluación demográfica y de enfermedades: Recopilación de información demográfica (edad, sexo) y de enfermedades (inicio, duración de los síntomas, tratamientos). El inicio de la enfermedad se definirá como el momento en que se realiza el asesoramiento diagnóstico de ER-IGg4 según los criterios de Umehara. Se recogerá el estado del evento desenlace (recaída de la enfermedad) y la fecha en que se produce. Se recogerá la fecha de inicio de seguimiento, fecha de evento de desenlace, última visita de seguimiento o último contacto con el paciente en caso de pérdidas de sujetos.
• Evaluación clínica: La evaluación clínica se realizará según criterio médico, teniendo en cuenta la combinación del estado clínico del paciente y los exámenes radiológicos y serológicos complementarios, clasificando al paciente en activo o inactivo.
• Estudios radiológicos: Se recogerán los datos de los exámenes radiológicos en forma de TC y/o FDG18F-PET/TC realizados en el diagnóstico y/o control evolutivo de los pacientes. Se tendrán en cuenta los órganos afectados y el aumento de 18F FDG en caso de PET-CT. En aquellos pacientes a los que se les realicen exploraciones en las visitas de diagnóstico y control, se realizará un estudio cualitativo comparativo de las imágenes (sin cambios, mejoría, empeoramiento).
• Estudios de laboratorio: Los plasmablastos son una de las etapas de diferenciación de los linfocitos B. A nivel de sangre periférica, los investigadores pueden identificarlos marcándolos contra moléculas en su superficie. Los plasmablastos se definen como células CD45+ CD19+ IgM- IgD- CD27+ CD38high. El uso de estos marcadores también nos permite identificar otros estadios de diferenciación como linfocitos B naïve (CD45+ CD19+ IgD+ CD27-), zona marginal (CD45+ CD19+ IgD+ CD27+), clase no conmutada (CD45+ CD19+ IgM+ IgD+ IgD+ CD27+ CD38-), memoria conmutada de clase (CD45+ CD19+ IgM- IgD- CD27+ CD38-), de transición (CD45+ CD19+ IgM+ IgD+ CD27- CD38high CD24high), CD19low (CD45+ CD19low CD27+) o CD21low (CD45+ CD19+ CD21low CD38-).

Para analizar las etapas de diferenciación de los linfocitos B, los investigadores realizarán un análisis de citometría de flujo. En resumen, a partir de sangre periférica en EDTA, los investigadores realizarán un lavado y posterior tinción con los diferentes anticuerpos monoclonales dirigidos contra las moléculas de superficie de interés marcadas con fluorocromos. Después de una incubación de 15 minutos, los glóbulos rojos se lisan, se lavan de nuevo y se analizan en el citómetro BD FACSLyric.

Para la determinación de linfocitos T auxiliares foliculares (Thf) y subpoblaciones Thf1 y Thf2, los investigadores también realizarán análisis de citometría con tinción de anticuerpos monoclonales, definiendo Tfh1 como CD4+ CD45RA- CXCR5+ CCR6- CXCR3+ linfocitos T y Tfh2 como CD4+ CD45RA- CXCR5+ CCR6- CXCR3 - Linfocitos T.

El análisis de las interleucinas IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 se realizará, a partir de nuestro suero, mediante ELISA individualizado para cada una de ellas.

El análisis de las biomuestras e imágenes se realizará en el centro de investigación (Hospital Sant Pau de Barcelona).

Descripción de las variables 6.1. Estudio de referencia

• Variables dependientes o de respuesta: Actividad de la enfermedad, prevalencia de enfermedad relacionada con IgG4 según diferentes grados de certeza diagnóstica, tipo de manifestación clínica, número de órganos afectados, concentración de IGg4 y reactantes de fase aguda.
• Variables independientes: recuento de plasmablastos, estadios de diferenciación de linfocitos B y linfocitos Thf en sangre periférica y concentración sérica de interleucinas (IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13).

6.2. Estudio longitudinal

• Variables dependientes de la respuesta: Se estudiará la recaída de la enfermedad y la persistencia de la actividad de la enfermedad según criterio médico.
• Variables independientes: recuento de plasmablastos, estadios de diferenciación de linfocitos B y linfocitos Thf en sangre periférica y concentración sérica de interleucinas (IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13).
• Variables potencialmente confusoras: Datos demográficos (edad, sexo, raza), subtipo de enfermedad relacionada con IgG4 según la especificidad de órgano, número de órganos afectados, tiempo desde el inicio de los síntomas y tiempo hasta el inicio del tratamiento, dosis acumulada de corticosteroides, tratamiento inmunomodulador o biológico.

Análisis estadístico Se realizará una transformación logarítmica de los niveles de biomarcadores si no siguen una distribución normal.

• Objetivos 1 y 2: Se calculará la sensibilidad, la especificidad y el área bajo la curva ROC. Se utilizará el coeficiente de correlación de Pearson o de Spearman según las condiciones de aplicabilidad.
• Objetivo 3: Se realizará una regresión de Cox univariada para evaluar el valor pronóstico de los biomarcadores para predecir la recaída. La supervivencia se definirá como el tiempo entre la visita inicial en el momento del diagnóstico y la fecha del evento de resultado (recaída o persistencia de la actividad inflamatoria). La mediana de seguimiento se calculará según el método inverso de Kaplan Meier. Se añadirán otros factores que puedan estar relacionados con la supervivencia (tratamiento biológico, dosis acumulada de corticoides, edad, reactantes de fase aguda). También se realizará un análisis logístico binario para evaluar la asociación entre biomarcadores y variables dependientes. El nivel de significación se fijará en el 5% de forma bilateral. Se utilizará el programa estadístico Stata 14.0 para Windows.