Biomarcatori diagnostici e prognostici per la malattia correlata a IgG4.

Raccolta dati I dati saranno raccolti dalla cartella clinica elettronica del database ospedaliero.

• Valutazione demografica e della malattia: raccolta di informazioni demografiche (età, sesso) e sulla malattia (insorgenza, durata dei sintomi, trattamenti). L'insorgenza della malattia sarà definita come il momento in cui viene eseguita la consulenza diagnostica ER-IGg4 secondo i criteri di Umehara. Verranno raccolti lo stato dell'evento di esito (recidiva di malattia) e la data in cui si verifica. Verranno raccolti la data di inizio del follow-up, la data dell'esito dell'evento, l'ultima visita di follow-up o l'ultimo contatto con il paziente in caso di soggetti persi.
• Valutazione clinica: La valutazione clinica sarà effettuata secondo criteri medici, tenendo conto della combinazione dello stato clinico del paziente e degli esami radiologici e sierologici complementari, classificando il paziente come attivo o inattivo.
• Studi radiologici: Verranno raccolti i dati degli esami radiologici sotto forma di TC e/o FDG18F-PET/TC eseguiti nella diagnosi e/o nel controllo evolutivo dei pazienti. Verranno presi in considerazione gli organi colpiti e l'aumento di 18F FDG in caso di PET-TC. In quei pazienti che hanno scansioni alla diagnosi e alle visite di controllo, verrà eseguito uno studio comparativo qualitativo delle immagini (nessun cambiamento, miglioramento, peggioramento).
• Studi di laboratorio: i plasmablasti sono uno degli stadi di differenziazione dei linfociti B. A livello del sangue periferico, gli investigatori possono identificarli contrassegnando le molecole sulla loro superficie. I plasmablasti sono definiti come cellule CD45+ CD19+ IgM- IgD- CD27+ CD38. L'uso di questi marcatori ci permette anche di identificare altri stadi di differenziazione come linfociti B naïve (CD45+ CD19+ IgD+ CD27-), zona marginale (CD45+ CD19+ IgD+ CD27+), class non-switched (CD45+ CD19+ IgM+ IgD+ IgD+ CD27+ CD38-), memoria a commutazione di classe (CD45+ CD19+ IgM- IgD- CD27+ CD38-), transitoria (CD45+ CD19+ IgM+ IgD+ CD27- CD38alto CD24alto), CD19basso (CD45+ CD19basso CD27+) o CD21basso (CD45+ CD19+ CD21basso CD38-).

Per analizzare le fasi di differenziazione dei linfociti B, i ricercatori eseguiranno un'analisi di citometria a flusso. In breve, dal sangue periferico in EDTA, i ricercatori eseguiranno un lavaggio e successiva colorazione con i diversi anticorpi monoclonali diretti contro le molecole di superficie di interesse marcate con fluorocromi. Dopo un'incubazione di 15 minuti, i globuli rossi vengono lisati, lavati nuovamente e analizzati nel citometro BD FACSLyric.

Per la determinazione dei linfociti follicolari T helper (Thf) e delle sottopopolazioni Thf1 e Thf2, i ricercatori eseguiranno anche analisi citometriche con colorazione con anticorpi monoclonali, definendo Tfh1 come linfociti T CD4+ CD45RA- CXCR5+ CCR6- CXCR3+ e Tfh2 come CD4+ CD45RA- CXCR5+ CCR6- CXCR3 - Linfociti T.

L'analisi delle interleuchine IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 sarà effettuata, dal nostro siero, mediante ELISA individualizzato per ciascuna di esse.

L'analisi dei campioni biologici e delle immagini sarà eseguita presso il centro di ricerca (Hospital Sant Pau de Barcelona).

Descrizione delle variabili 6.1. Studio di riferimento

• Variabili dipendenti o di risposta: attività di malattia, prevalenza di malattia IgG4-correlata secondo diversi gradi di certezza diagnostica, tipo di manifestazione clinica, numero di organi colpiti, concentrazione di IGg4 e reagenti di fase acuta.
• Variabili indipendenti: conta dei plasmablasti, stadi di differenziazione dei linfociti B e dei linfociti Thf nel sangue periferico e concentrazione sierica delle interleuchine (IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13).

6.2. Studio longitudinale

• Variabili dipendenti dalla risposta: la recidiva della malattia e la persistenza dell'attività della malattia saranno studiate secondo criteri medici.
• Variabili indipendenti: conta dei plasmablasti, stadi di differenziazione dei linfociti B e dei linfociti Thf nel sangue periferico e concentrazione sierica delle interleuchine (IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13).
• Variabili potenzialmente confondenti: dati demografici (età, sesso, razza), sottotipo di malattia correlata a IgG4 in base alla specificità dell'organo, numero di organi interessati, tempo dall'insorgenza dei sintomi e tempo all'inizio del trattamento, dose accumulata di corticosteroidi, trattamento immunomodulante o biologico.

Analisi statistica Verrà eseguita la trasformazione logaritmica dei livelli di biomarcatori se non seguono una distribuzione normale.

• Obiettivi 1 e 2: saranno calcolate la sensibilità, la specificità e l'area sotto la curva ROC. Verrà utilizzato il coefficiente di correlazione di Pearson o di Spearman a seconda delle condizioni di applicabilità.
• Obiettivo 3: Verrà eseguita la regressione univariata di Cox per valutare il valore prognostico dei biomarcatori per predire la recidiva. La sopravvivenza sarà definita come il tempo che intercorre tra la visita basale alla diagnosi e la data dell'esito dell'evento (recidiva o persistenza dell'attività infiammatoria). Il follow-up mediano sarà calcolato secondo il metodo inverso di Kaplan Meier. Saranno aggiunti altri fattori che possono essere correlati alla sopravvivenza (trattamento biologico, dose cumulativa di corticosteroidi, età, reagenti della fase acuta). Verrà inoltre eseguita un'analisi logistica binaria per valutare l'associazione tra biomarcatori e variabili dipendenti. Il livello di significatività sarà fissato al 5% bilateralmente. Verrà utilizzato il programma statistico Stata 14.0 per Windows.