Biomarcadores de diagnóstico e prognóstico para doenças relacionadas a IgG4.

Coleta de dados Os dados serão coletados do prontuário eletrônico do banco de dados do hospital.

• Avaliação demográfica e da doença: Coleta de informações demográficas (idade, sexo) e da doença (início, duração dos sintomas, tratamentos). O início da doença será definido como o momento em que o aconselhamento diagnóstico de ER-IGg4 é realizado de acordo com os critérios de Umehara. Serão coletados o status do evento de desfecho (recaída da doença) e a data em que ocorreu. A data de início do acompanhamento, data do evento de resultado, última visita de acompanhamento ou último contato com o paciente no caso de indivíduos perdidos serão coletados.
• Avaliação clínica: A avaliação clínica será realizada a critério médico, levando em consideração a combinação do quadro clínico do paciente e os exames radiológicos e sorológicos complementares, classificando o paciente em ativo ou inativo.
• Estudos radiológicos: Serão coletados dados de exames radiológicos na forma de TC e/ou FDG18F-PET/CT realizados no diagnóstico e/ou controle evolutivo dos pacientes. Serão levados em consideração os órgãos acometidos e o aumento de 18F FDG em caso de PET-CT. Nos pacientes que tiverem exames nas consultas de diagnóstico e controle, será realizado um estudo comparativo qualitativo das imagens (sem alteração, melhora, piora).
• Estudos laboratoriais: Os plasmablastos são um dos estágios de diferenciação dos linfócitos B. No nível do sangue periférico, os investigadores podem identificá-los marcando contra moléculas em sua superfície. Os plasmablastos são definidos como células CD45+ CD19+ IgM- IgD- CD27+ CD38high. O uso desses marcadores também permite identificar outros estágios de diferenciação como linfócitos B virgens (CD45+ CD19+ IgD+ CD27-), zona marginal (CD45+ CD19+ IgD+ CD27+), classe não comutada (CD45+ CD19+ IgM+ IgD+ IgD+ CD27+ CD38-), memória comutada de classe (CD45+ CD19+ IgM- IgD- CD27+ CD38-), transicional (CD45+ CD19+ IgM+ IgD+ CD27- CD38high CD24high), CD19low (CD45+ CD19low CD27+) ou CD21low (CD45+ CD19+ CD21low CD38-).

Para analisar os estágios de diferenciação dos linfócitos B, os pesquisadores farão uma análise de citometria de fluxo. Resumidamente, a partir do sangue periférico em EDTA, os investigadores farão uma lavagem e posterior coloração com os diferentes anticorpos monoclonais dirigidos contra as moléculas de superfície de interesse marcadas com fluorocromos. Após uma incubação de 15 minutos, os glóbulos vermelhos são lisados, lavados novamente e analisados ​​no citômetro BD FACSLyric.

Para a determinação de linfócitos T auxiliares foliculares (Thf) e subpopulações Thf1 e Thf2, os investigadores também realizarão análise citométrica com coloração de anticorpo monoclonal, definindo Tfh1 como linfócitos T CD4+ CD45RA- CXCR5+ CCR6- CXCR3+ e Tfh2 como CD4+ CD45RA- CXCR5+ CCR6- CXCR3 - Linfócitos T.

A análise das interleucinas IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13 será realizada, a partir de nosso soro, por ELISAs individualizados para cada uma delas.

A análise das bioamostras e imagens será realizada no centro de pesquisa (Hospital Sant Pau de Barcelona).

Descrição das variáveis ​​6.1. Estudo de linha de base

• Variáveis ​​dependentes ou de resposta: Atividade da doença, prevalência de doença relacionada a IgG4 de acordo com diferentes graus de certeza diagnóstica, tipo de manifestação clínica, número de órgãos afetados, concentração de IGg4 e reagentes de fase aguda.
• Variáveis ​​independentes: contagem de plasmablastos, estágios de diferenciação de linfócitos B e linfócitos Thf no sangue periférico e concentração sérica de interleucinas (IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13).

6.2. Estudo longitudinal

• Variáveis ​​dependentes da resposta: A recidiva da doença e a persistência da atividade da doença serão estudadas de acordo com critérios médicos.
• Variáveis ​​independentes: contagem de plasmablastos, estágios de diferenciação de linfócitos B e linfócitos Thf no sangue periférico e concentração sérica de interleucinas (IL-4, IL-5, IL-10 e IL-13).
• Variáveis ​​potencialmente confundidoras: Dados demográficos (idade, sexo, raça), subtipo da doença relacionada à IgG4 de acordo com a especificidade do órgão, número de órgãos afetados, tempo desde o início dos sintomas e tempo até o início do tratamento, dose acumulada de corticosteroide, tratamento imunomodulador ou biológico.

Análise estatística A transformação logarítmica dos níveis de biomarcadores será realizada se eles não seguirem uma distribuição normal.

• Objetivos 1 e 2: Serão calculadas a sensibilidade, especificidade e área sob a curva ROC. O coeficiente de correlação de Pearson ou Spearman será utilizado de acordo com as condições de aplicabilidade.
• Objetivo 3: A regressão univariada de Cox será realizada para avaliar o valor prognóstico dos biomarcadores para predizer recaída. A sobrevida será definida como o tempo entre a visita inicial no momento do diagnóstico até a data do evento final (recaída ou persistência da atividade inflamatória). O seguimento mediano será calculado de acordo com o método inverso de Kaplan Meier. Outros fatores que podem estar relacionados à sobrevida (tratamento biológico, dose cumulativa de corticosteroide, idade, reagentes de fase aguda) serão adicionados. Análise logística binária também será realizada para avaliar a associação entre biomarcadores e variáveis ​​dependentes. O nível de significância será fixado em 5% bilateralmente. Será utilizado o programa estatístico Stata 14.0 for Windows.