Genes maternos y epimutaciones: síndrome de Beckwith-Wiedemann y riesgos reproductivos
Papel de los genes de efecto materno y las epimutaciones en el síndrome de Beckwith-Wiedemann y los resultados reproductivos adversos
Descripción general del estudio
Estado
Condiciones
Intervención / Tratamiento
Descripción detallada
El primer objetivo del proyecto es definir la incidencia de genes de efecto materno (MEG) y específicamente de variantes patógenas de SCMC como causa de diferencias en los resultados reproductivos en la población femenina infértil y en madres de niños con BWS. Para este objetivo, se reclutarán tres cohortes de pacientes: mujeres sanas con descendencia afectada por BWS y peculiar historia reproductiva de nuestra población de familias de BWS diagnosticadas clínica y molecularmente (Cohorte 1), mujeres menores de 35 años sometidas a TAR por infertilidad (definida como falta de lograr un embarazo después de 12 meses o más de relaciones sexuales regulares sin protección) y sin poder obtener un nacimiento vivo después de tres ciclos completos o después de la transferencia de al menos 6 blastocistos (Cohorte 2), y mujeres menores de 35 años, con RPL (Pérdida Recurrente del Embarazo). definida como la pérdida de dos o más embarazos antes de las 24 semanas de gestación) (Cohorte 3).
Para identificar variantes patogénicas, se realizará la secuenciación del exoma completo (WES) como primer enfoque en todos los pacientes reclutados. El análisis WES se llevará a cabo siguiendo varios pasos. Primero, los investigadores analizarán diferentes subconjuntos de genes, pertenecientes a:
- Genes de efecto materno como componentes de SCMC y otros genes relacionados;
- Genes esenciales en la maduración del ovocito y la progresión del cigoto a través de las primeras fases de la embriogénesis o altamente expresados en diferentes etapas de la maduración del ovocito;
- Genes con funciones conocidas y potenciales en el establecimiento y control de la impronta genómica e involucrados en reacciones de metilación del ADN.
Posteriormente, se analizarán variantes con un alto puntaje de patogenicidad, para identificar aquellos genes que puedan estar asociados con el fenómeno, pero que no pertenezcan a las categorías de genes descritas anteriormente. Finalmente, los investigadores realizarán un análisis de secuenciación del genoma completo (WGS) en un subgrupo seleccionado de madres con BWS con historias clínicas peculiares y análisis WES negativo, para explorar todas las regiones reguladoras y no codificantes a las que no se dirige WES.
El segundo objetivo de este proyecto es emplear un análisis de metilación de todo el genoma para identificar cambios de metilación en mujeres con problemas reproductivos, incluidas aquellas con descendencia afectada por BWS. Tareas específicas serán:
- Determinar la metilación de todo el genoma de los leucocitos sanguíneos de las cohortes de mujeres descritas en el objetivo 1 y compararla con la de un número similar de controles del mismo sexo y edad;
- Determinar la metilación de todo el genoma de ovocitos no fertilizados derivados de ciclos de ART fallidos de las mismas cohortes y compararla con la de ovocitos de control (derivados de donaciones para investigación o conjuntos de datos públicos).
La metilación del ADN se determinará en leucocitos sanguíneos mediante análisis de matriz de metilación y en ovocitos no fertilizados mediante secuenciación con bisulfito unicelular (scBS-Seq).
El tercer objetivo del proyecto es determinar los mecanismos moleculares que subyacen a la infertilidad femenina y al trastorno de impronta asociado con variantes dañinas del gen SCMC mediante el empleo de un modelo de ratón. Tareas específicas serán:
- Determinar la metilación del genoma completo y los perfiles de ARN de los ovocitos Padi6 mut/mut y de los embriones preimplantación obtenidos después de FIV con espermatozoides de tipo salvaje;
- Transferencia de los blastocistos derivados de la FIV descrita en a) a hembras pseudopreñadas y análisis de la metilación del ADN y el ARN del genoma completo en los embriones derivados de la mitad de la gestación mediante BS-seq y RNA-seq;
- Minicribado de compuestos epigenéticos en embriones Padi6 mut/mut de 2 células. La metilación del ADN y la expresión del ARN de los ovocitos y embriones de ratón se determinarán mediante scBS-seq y scRNA-seq del genoma completo.
Tipo de estudio
Inscripción (Estimado)
Fase
- No aplica
Contactos y Ubicaciones
Estudio Contacto
- Nombre: Marco Reschini, MSc
- Número de teléfono: +390255034303
- Correo electrónico: marco.reschini@policlinico.mi.it
Copia de seguridad de contactos de estudio
- Nombre: Edgardo Somigliana, PhD
- Número de teléfono: +390255034303
- Correo electrónico: edgardo.somigliana@policlinico.mi.it
Ubicaciones de estudio
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Milan, Italia, 20145
- Reclutamiento
- Istituto Auxologico Italiano
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Contacto:
- Silvia Russo, Phd
- Número de teléfono: +393493237520
- Correo electrónico: s.russo@auxologico.it
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Milan, Italia, 20122
- Reclutamiento
- Fondazione IRCCS Ca' Granda Ospedale Maggiore Policlinico
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Contacto:
- Edgardo Somigliana, PhD
- Número de teléfono: +390255034303
- Correo electrónico: edgardo.somigliana@policlinico.mi.it
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Criterios de participación
Criterio de elegibilidad
Edades elegibles para estudiar
- Adulto
- Adulto Mayor
Acepta Voluntarios Saludables
Descripción
Criterios de inclusión:
- Cohorte 1: mujeres sanas con descendencia afectada por BWS y antecedentes reproductivos peculiares de nuestra población de familias de BWS diagnosticadas clínica y molecularmente;
- Cohorte 2: mujeres menores de 35 años sometidas a TAR por infertilidad (definida como la imposibilidad de lograr un embarazo después de 12 meses o más de relaciones sexuales regulares sin protección) y que no pueden obtener un nacimiento vivo después de tres ciclos completos o después de la transferencia de al menos 6 blastocistos;
- Cohorte 3: mujeres menores de 35 años, con RPL (definida como la pérdida de dos o más embarazos antes de las 24 semanas de gestación).
Criterio de exclusión:
- Presencia de alteraciones del cariotipo convencional y molecular.
- aparición de causas conocidas que pueden provocar una disminución de la fertilidad o abortos recurrentes: trastornos de los ovarios, como el síndrome de ovario poliquístico y otros trastornos foliculares, trastornos del sistema endocrino que provocan desequilibrios en los niveles de hormonas reproductivas, enfermedades autoinmunes, infertilidad masculina, uterina o tubárica disfunciones y malformaciones, disfunciones tiroideas trombofílicas o no corregidas.
Plan de estudios
¿Cómo está diseñado el estudio?
Detalles de diseño
- Propósito principal: Ciencia básica
- Asignación: No aleatorizado
- Modelo Intervencionista: Asignación paralela
- Enmascaramiento: Ninguno (etiqueta abierta)
Armas e Intervenciones
Grupo de participantes/brazo |
Intervención / Tratamiento |
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Experimental: mujeres sanas con descendencia afectada por BWS
mujeres sanas con descendencia afectada por BWS y una historia reproductiva peculiar de nuestra población de familias de BWS diagnosticadas clínica y molecularmente
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La secuenciación del exoma completo se realizará como primer enfoque en todos los pacientes reclutados. En primer lugar, analizaremos diferentes subconjuntos de genes, pertenecientes a:
Posteriormente, se analizarán variantes con un alto puntaje de patogenicidad, para identificar aquellos genes que puedan estar asociados con el fenómeno, pero que no pertenezcan a las categorías de genes descritas anteriormente. Finalmente, realizaremos un análisis de secuenciación del genoma completo (WGS) en un subgrupo seleccionado de madres con BWS con historias clínicas peculiares y análisis WES negativo, para explorar todas las regiones reguladoras y no codificantes a las que no se dirige WES.
Se realizará un análisis de metilación de todo el genoma para identificar cambios de metilación en mujeres con problemas reproductivos, incluidas aquellas con descendencia afectada por BWS.
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Experimental: mujeres menores de 35 años sometidas a ART
mujeres menores de 35 años sometidas a tratamiento antirretroviral por infertilidad (definida como la imposibilidad de lograr un embarazo después de 12 meses o más de relaciones sexuales regulares sin protección) y que no pueden obtener un nacimiento vivo después de tres ciclos completos o después de la transferencia de al menos 6 blastocistos
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La secuenciación del exoma completo se realizará como primer enfoque en todos los pacientes reclutados. En primer lugar, analizaremos diferentes subconjuntos de genes, pertenecientes a:
Posteriormente, se analizarán variantes con un alto puntaje de patogenicidad, para identificar aquellos genes que puedan estar asociados con el fenómeno, pero que no pertenezcan a las categorías de genes descritas anteriormente. Finalmente, realizaremos un análisis de secuenciación del genoma completo (WGS) en un subgrupo seleccionado de madres con BWS con historias clínicas peculiares y análisis WES negativo, para explorar todas las regiones reguladoras y no codificantes a las que no se dirige WES.
Se realizará un análisis de metilación de todo el genoma para identificar cambios de metilación en mujeres con problemas reproductivos, incluidas aquellas con descendencia afectada por BWS.
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Experimental: mujeres menores de 35 años, con RPL
mujeres menores de 35 años, con RPL (definida como la pérdida de dos o más embarazos antes de las 24 semanas de gestación)
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La secuenciación del exoma completo se realizará como primer enfoque en todos los pacientes reclutados. En primer lugar, analizaremos diferentes subconjuntos de genes, pertenecientes a:
Posteriormente, se analizarán variantes con un alto puntaje de patogenicidad, para identificar aquellos genes que puedan estar asociados con el fenómeno, pero que no pertenezcan a las categorías de genes descritas anteriormente. Finalmente, realizaremos un análisis de secuenciación del genoma completo (WGS) en un subgrupo seleccionado de madres con BWS con historias clínicas peculiares y análisis WES negativo, para explorar todas las regiones reguladoras y no codificantes a las que no se dirige WES.
Se realizará un análisis de metilación de todo el genoma para identificar cambios de metilación en mujeres con problemas reproductivos, incluidas aquellas con descendencia afectada por BWS.
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¿Qué mide el estudio?
Medidas de resultado primarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Incidencia de MEG
Periodo de tiempo: WES en genes específicos en todas las cohortes y matriz SNP se realizará después de la inscripción y se finalizará dentro del mes 17. La última parte relacionada con WGS en un subgrupo seleccionado de madres BWS se completará del 16 al mes 20.
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Incidencia de MEG, particularmente variantes patogénicas de SCMC, en población femenina infértil y madres de niños afectados por BWS
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WES en genes específicos en todas las cohortes y matriz SNP se realizará después de la inscripción y se finalizará dentro del mes 17. La última parte relacionada con WGS en un subgrupo seleccionado de madres BWS se completará del 16 al mes 20.
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Medidas de resultado secundarias
Medida de resultado |
Medida Descripción |
Periodo de tiempo |
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Comparar la metilación del ADN
Periodo de tiempo: Las muestras recolectadas se evaluarán para determinar la metilación del genoma completo dentro del mes 20.
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Metilación del ADN del genoma completo de los leucocitos sanguíneos de las cohortes de mujeres con problemas reproductivos, incluidas aquellas con descendencia afectada por BWS, y comparándolo con el de un número similar de controles del mismo sexo y edad. El análisis bioinformático se utilizará para inferir regiones metiladas diferencialmente a partir de datos de metilación y para clasificar el estado de las mujeres según los perfiles de metilación. Debido a la compleja distribución asociada con los perfiles de metilación del genoma completo, las técnicas de reducción de dimensionalidad (p. ej. PCA, MDS) y métodos de agrupamiento (tanto jerárquicos como basados en centroides) se utilizarán para evaluar la importancia de regiones específicas (p. ej. loci impresos) para discriminar a las mujeres priorizadas de los controles según sus perfiles de metilación. con problemas reproductivos, incluidos aquellos con descendencia afectada por BWS |
Las muestras recolectadas se evaluarán para determinar la metilación del genoma completo dentro del mes 20.
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Colaboradores e Investigadores
Colaboradores
Investigadores
- Investigador principal: Edgardo Somigliana, PhD, Fondazione IRCCS Ca' Granda, Ospedale Maggiore Policlinico
Fechas de registro del estudio
Fechas importantes del estudio
Inicio del estudio (Actual)
Finalización primaria (Estimado)
Finalización del estudio (Estimado)
Fechas de registro del estudio
Enviado por primera vez
Primero enviado que cumplió con los criterios de control de calidad
Publicado por primera vez (Actual)
Actualizaciones de registros de estudio
Última actualización publicada (Actual)
Última actualización enviada que cumplió con los criterios de control de calidad
Última verificación
Más información
Términos relacionados con este estudio
Términos MeSH relevantes adicionales
Otros números de identificación del estudio
- PNRR-MR1-2022-12376622
Información sobre medicamentos y dispositivos, documentos del estudio
Estudia un producto farmacéutico regulado por la FDA de EE. UU.
Estudia un producto de dispositivo regulado por la FDA de EE. UU.
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