Tratamiento periodontal no quirúrgico en fumadores con SIRT-1, inflamasoma NLRP3 y LncRNA

Habrá 4 grupos en el estudio: periodontitis para no fumadores (NSP), periodontitis para fumadores (SP), control saludable para no fumadores (HC) y control saludable para fumadores (HCS).

Los grupos de periodontitis en el estudio (NSP y SP) incluirán pacientes diagnosticados con periodontitis en estadio II y III, generalizada, Grado B, C clínicamente según el informe de consenso del Taller Mundial de 2017 sobre la Clasificación de Enfermedades Periodontales y Periimplantarias y Condiciones e individuos sistémicamente sanos. Se incluirán pacientes con pérdida de inserción clínica ≥3 mm en >30% de los sitios, con profundidad de sondaje ≥5 mm en al menos seis dientes y con pérdida ósea radiológica que se extiende hasta o más allá del tercio medio de la raíz en el tercio coronal. Se incluirán pacientes con pérdida de dientes relacionada con una enfermedad periodontal ≤4 dientes. La tasa de progresión de la enfermedad se clasificará como Clase B o C según la evidencia directa de progresión de la enfermedad confirmada por radiografías panorámicas y la evidencia de destrucción indirecta proporcional a las acumulaciones de biopelículas. En el grupo de fumar periodontitis (SP) y el grupo de fumar saludable (HCS), se incluirán los participantes que informaron haber fumado >10 cigarrillos por día durante >5 años, mientras que los participantes en los grupos de no fumadores (NSP y HC) serán aquellos que informó que nunca había fumado.

Mediciones clínicas y tratamiento periodontal no quirúrgico

Se recolectarán muestras de saliva y suero de todos los pacientes inicialmente y 3 meses después de la NSPT. Los parámetros clínicos también se registrarán inicialmente y al tercer mes. El índice de placa (PI) y el índice gingival (GI) se registrarán en cuatro sitios por diente. La profundidad de sondaje (PD) de toda la boca y el nivel de inserción clínica (CAL) se detallarán por diente en seis sitios, y el porcentaje de áreas sangrantes se registrará como presente o ausente dentro de los 20 segundos posteriores al sondaje utilizando un sistema de puntuación binario. Un periodontólogo calibrado (ZTE) registrará todos los parámetros clínicos mediante sondaje manual. Se proporcionará la calibración del examinador antes de comenzar el estudio en una pequeña población piloto para lograr una precisión constante dentro del examinador. Después de la recolección de muestras de referencia y registros de parámetros clínicos, todos los pacientes recibirán tratamiento periodontal inicial, incluida la educación del paciente, raspado bucal completo y alisado radicular (SRP) e instrucciones de higiene bucal del mismo médico experimentado (ZTE).

Medición de laboratorio

Se indicará a cada paciente que se abstenga de comer, beber y practicar prácticas de higiene bucal durante 12 horas antes de la toma de muestras. Se recolectarán muestras de suero y saliva de cada paciente entre las 8:00 y las 10:00 de la mañana antes del examen dental.

Muestreo de sangre: en el alcance del estudio, una enfermera experta del Departamento de Periodoncia extraerá un total de 5 ml de sangre de la vena antecubital de cada individuo.

Para tomar muestras de suero, se realizará una punción venosa y se recolectarán muestras de sangre, que se enfriarán inmediatamente en hielo y se centrifugarán a 4 ° C (800 rpm durante 10 minutos). Después de la recolección de muestras de saliva, se centrifugarán inmediatamente a 4°C (1000 rpm durante 2 minutos). Después del muestreo, tanto las muestras de suero como de saliva se almacenarán a -80 °C hasta su análisis. Las concentraciones de NLRP3, ASC, caspasa-1, IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta y SIRT-1 se analizarán mediante kits de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) específicos en ambos muestras de suero y saliva. LncRNA SNHG5 y MEG3 se examinarán mediante la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR).

Los niveles de IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta, NLRP3, SIRT-1, lncRNA SNHG5 y MEG3 en PMBC se evaluarán mediante RT-PCR. Todos los pasos de análisis de cada kit se evaluarán utilizando el protocolo recomendado por el fabricante.

Análisis estadístico:

El análisis estadístico se realizará utilizando software disponible comercialmente (SPSS versión 22.0, SPSS). En este estudio, se utilizará un valor de significancia (valor p) de <0,05. Este estudio está diseñado como un ensayo clínico controlado prospectivo. El tamaño de la muestra del estudio se calculó utilizando el programa R Statistical Language (versión 4.1.2; La Fundación R para Computación Estadística, Viena, Austria; http://www.r-project.org). Se planeó incluir al menos 25 individuos en cada grupo para el análisis de varianza unidireccional que se realizaría con un nivel de significancia del 5%, un poder estadístico del 80% y un tamaño del efecto de 0,4 (f de Cohen = 0,4) para determinar si hay una diferencia significativa en los factores inflamatorios entre los grupos de estudio (periodontitis de fumadores, periodontitis de no fumadores, periodontitis de no fumadores, periodontitis de no fumadores).

Los análisis longitudinales incluirán datos únicamente de los pacientes que completen todo el protocolo del estudio.