Niechirurgiczne leczenie przyzębia u palaczy przy użyciu inflamasomów SIRT-1, NLRP3 i LncRNA

W badaniu zostaną uwzględnione 4 grupy: zapalenie przyzębia niepalące (NSP), zapalenie przyzębia palące (SP), zdrowa osoba niepaląca (HC) i zdrowa osoba paląca (HCS).

Grupy pacjentów z zapaleniem przyzębia objęte badaniem (NSP i SP) będą obejmować pacjentów, u których zdiagnozowano zapalenie przyzębia w stadium II i III, uogólnione, zapalenie przyzębia stopnia B, C klinicznie w oparciu o konsensus Światowych warsztatów na temat klasyfikacji chorób przyzębia i chorób wokół implantów w 2017 r. Warunki i osoby zdrowe układowo. Uwzględnieni zostaną pacjenci z kliniczną utratą przyczepu ≥3 mm w >30% miejsc, z głębokością sondowania ≥5 mm w co najmniej sześciu zębach i radiologiczną utratą kości sięgającą do lub poza środkową jedną trzecią korzenia w trzeciej części koronowej. Uwzględnieni zostaną pacjenci, u których utrata zębów w wyniku chorób przyzębia wynosi ≤ 4 zęby. Szybkość postępu choroby zostanie sklasyfikowana w klasie B lub C na podstawie bezpośrednich dowodów postępu choroby potwierdzonych zdjęciami panoramicznymi i dowodów pośredniego zniszczenia proporcjonalnego do nagromadzenia biofilmu. Do grupy palącej zapalenie przyzębia (SP) i grupy palącej zdrowej (HCS) uwzględnieni zostaną uczestnicy, którzy zgłosili palenie > 10 papierosów dziennie przez ponad 5 lat, natomiast uczestnikami grup niepalących (NSP i HC) będą osoby, które zgłosiło, że nigdy nie paliło.

Pomiary kliniczne i niechirurgiczne leczenie przyzębia

Od wszystkich pacjentów początkowo i 3 miesiące po NSPT zostaną pobrane próbki śliny i surowicy. Parametry kliniczne będą również rejestrowane na początku i w 3. miesiącu. Wskaźnik płytki nazębnej (PI) i wskaźnik dziąsła (GI) będzie rejestrowany w czterech miejscach na ząb. Głębokość sondowania całej jamy ustnej (PD) i kliniczny poziom przyczepu (CAL) zostaną szczegółowo określone dla każdego zęba w sześciu miejscach, a procent obszarów krwawienia zostanie zarejestrowany jako obecny lub nieobecny w ciągu 20 sekund po sondowaniu przy użyciu binarnego systemu punktacji. Kalibrowany periodontolog (ZTE) zarejestruje wszystkie parametry kliniczne za pomocą ręcznego sondowania. Kalibracja badacza zostanie przeprowadzona przed rozpoczęciem badania na małej populacji pilotażowej, aby uzyskać stałą dokładność wewnątrz badacza. Po pobraniu próbek wyjściowych i zapisach parametrów klinicznych wszyscy pacjenci zostaną poddani wstępnemu leczeniu periodontologicznemu, obejmującemu edukację pacjenta, skaling całej jamy ustnej i planowanie korzeni (SRP) oraz instrukcje dotyczące higieny jamy ustnej od tego samego doświadczonego lekarza (ZTE).

Pomiar laboratoryjny

Każdy pacjent zostanie poinstruowany, aby przed pobraniem próbki powstrzymywał się od jedzenia, picia i higieny jamy ustnej przez 12 godzin. Od każdego pacjenta w godzinach 8:00 – 10:00 rano przed badaniem stomatologicznym pobierane będą próbki surowicy i śliny.

Pobieranie krwi: W ramach badania wykwalifikowana pielęgniarka z Oddziału Periodontologii pobierze od każdego pacjenta łącznie 5 ml krwi z żyły łokciowej od każdego pacjenta.

W celu pobrania surowicy zostanie wykonane nakłucie żylne, pobrane zostaną próbki krwi, natychmiast schłodzone na lodzie i odwirowane w temperaturze 4°C (800 obr./min. przez 10 minut). Po pobraniu próbki śliny należy je natychmiast odwirować w temperaturze 4°C (1000 obr./min. przez 2 minuty). Po pobraniu próbki zarówno surowicy, jak i śliny będą przechowywane do czasu analizy w temperaturze -80°C. Stężenia NLRP3, ASC, kaspazy-1, IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta i SIRT-1 będą analizowane za pomocą specjalnych zestawów do testów immunoenzymatycznych (ELISA) w obu przypadkach próbki surowicy i śliny. LncRNA SNHG5 i MEG3 zostaną zbadane przy użyciu reakcji łańcuchowej polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-PCR).

Poziomy IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta, NLRP3, SIRT-1, lncRNA SNHG5 i MEG3 w PMBC będą oceniane za pomocą RT-PCR. Wszystkie etapy analizy każdego zestawu zostaną ocenione przy użyciu protokołu zalecanego przez producenta.

Analiza statystyczna:

Analiza statystyczna zostanie przeprowadzona przy użyciu oprogramowania dostępnego na rynku (SPSS wersja 22.0, SPSS). W tym badaniu zostanie zastosowana wartość istotności (wartość p) <0,05. Badanie to zaprojektowano jako prospektywne kontrolowane badanie kliniczne. Liczebność próby w badaniu została obliczona przy użyciu programu R Statistical Language (wersja 4.1.2; Fundacja R na rzecz Obliczeń Statystycznych, Wiedeń, Austria; http://www.r-project.org). Planowano włączenie co najmniej 25 osób do każdej grupy do przeprowadzenia jednokierunkowej analizy wariancji przy poziomie istotności 5%, mocy statystycznej 80% i wielkości efektu 0,4 (f=0,4 Cohena) w celu ustalenia czy istnieje istotna różnica w zakresie czynników zapalnych pomiędzy badanymi grupami (palenie przyzębia, palenie przyzębia zdrowe, zapalenie przyzębia niepalenie, zapalenie przyzębia niepalenie).

Analizy podłużne będą obejmować dane wyłącznie od pacjentów, którzy ukończyli cały protokół badania.