Nechirurgická parodontální léčba u kuřáků na SIRT-1, NLRP3 Inflammasom a LncRNA

Ve studii budou 4 skupiny: nekuřácká parodontitida (NSP), kuřácká parodontitida (SP), nekuřácká zdravá kontrola (HC) a zdravá kontrola kouření (HCS).

Skupiny parodontitidy ve studii (NSP a SP) budou zahrnovat pacienty s diagnózou II. a III. stádia, generalizované parodontitidy stupně B, C klinicky na základě konsenzuální zprávy Světového semináře o klasifikaci parodontálních a periimplantátových onemocnění v roce 2017 a Stavy a systémově zdraví jedinci. Budou zahrnuti pacienti s klinickou ztrátou úponu ≥ 3 mm na > 30 % míst, s hloubkou sondy ≥ 5 mm u alespoň šesti zubů as radiografickým úbytkem kostní hmoty přesahujícím nebo za střední třetinu kořene v koronální třetině. Budou zahrnuti pacienti se ztrátou zubů související s parodontózou ≤ 4 zuby. Míra progrese onemocnění bude klasifikována jako třída B nebo C na základě přímého důkazu progrese onemocnění potvrzeného panoramatickými rentgenovými snímky a důkazu nepřímé destrukce úměrné akumulaci biofilmu. Ve skupině kuřácké parodontitidy (SP) a skupině kuřáků zdravě (HCS) budou zahrnuti účastníci, kteří uvedli, že kouří >10 cigaret denně po dobu >5 let, zatímco účastníci ve skupinách nekuřáků (NSP a HC) budou ti, kteří uvedl, že nikdy nekouřil.

Klinická měření a nechirurgická parodontologická léčba

Vzorky slin a séra budou odebrány všem pacientům na počátku a 3 měsíce po NSPT. Klinické parametry budou také zaznamenávány zpočátku a ve 3. měsíci. Index plaku (PI) a gingivální index (GI) budou zaznamenávány na čtyřech místech na zub. Hloubka sondování v celých ústech (PD) a úroveň klinického připojení (CAL) budou podrobně popsány pro každý zub na šesti místech a procento krvácejících oblastí bude zaznamenáno jako přítomné nebo nepřítomné do 20 sekund po sondování pomocí binárního bodovacího systému. Kalibrovaný parodontolog (ZTE) zaznamená všechny klinické parametry pomocí ručního sondování. Kalibrace zkoušejícího bude poskytnuta před zahájením studie na malé pilotní populaci, aby se dosáhlo konzistentní přesnosti v rámci vyšetřovatele. Po odběru základních vzorků a záznamů klinických parametrů bude všem pacientům poskytnuta počáteční periodontální léčba, včetně edukace pacienta, škálování na plných ústech a hoblování kořenů (SRP) a pokynů pro ústní hygienu od stejného zkušeného lékaře (ZTE).

Laboratorní měření

Každý pacient bude instruován, aby se po dobu 12 hodin před odběrem vzorků zdržel jídla, pití a ústní hygieny. Vzorky séra a slin budou odebrány každému pacientovi mezi 8:00 a 10:00 ráno před zubním vyšetřením.

Odběr krve: V rámci studie bude odbornou sestrou z oddělení parodontologie odebráno celkem 5 ml krve z antekubitální žíly každého jedince.

Pro odběr séra se provede žilní punkce a odeberou se vzorky krve, které se okamžitě ochladí na ledu a odstředí při 4 °C (800 ot./min po dobu 10 minut). Po odběru vzorků slin budou ihned centrifugovány při 4 °C (1000 ot./min po dobu 2 minut). Po odběru vzorků budou vzorky séra i slin skladovány při -80 °C až do analýzy. Koncentrace NLRP3, ASC, kaspázy-1, IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta a SIRT-1 budou analyzovány pomocí specifických souprav ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) v obou vzorky séra a slin. LncRNA SNHG5 a MEG3 budou zkoumány pomocí polymerázové řetězové reakce v reálném čase (RT-PCR).

Hladiny IL-18, IL-lbeta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta, NLRP3, SIRT-1, lncRNA SNHG5 a MEG3 v PMBC budou hodnoceny pomocí RT-PCR. Všechny kroky analýzy pro každou soupravu budou vyhodnoceny pomocí protokolu doporučeného výrobcem.

Statistická analýza:

Statistická analýza bude provedena pomocí komerčně dostupného softwaru (SPSS verze 22.0, SPSS). V této studii bude použita hodnota významnosti (p-hodnota) <0,05. Tato studie je navržena jako prospektivní kontrolovaná klinická studie. Velikost vzorku studie byla vypočtena pomocí programu R Statistical Language (verze 4.1.2; The R Foundation for Statistical Computing, Vídeň, Rakousko; http://www.r-project.org). Bylo plánováno zahrnout alespoň 25 jedinců do každé skupiny pro provedení jednosměrné analýzy rozptylu s hladinou významnosti 5 %, statistickou silou 80 % a velikostí účinku 0,4 (Cohenovo f=0,4), aby bylo možné určit pokud existuje signifikantní rozdíl v zánětlivých faktorech mezi studovanými skupinami (kuřácká parodontitida, kouření parodontu zdravé, nekuřácké parodontitidy, nekuřáci parodontitidy zdravé).

Podélné analýzy budou zahrnovat data pouze od pacientů, kteří dokončí celý protokol studie.