Trattamento parodontale non chirurgico nei fumatori con inflammasoma SIRT-1, NLRP3 e LncRNA

Ci saranno 4 gruppi nello studio: parodontite non fumatrice (NSP), parodontite fumatrice (SP), controllo sano non fumatore (HC) e controllo sano fumatore (HCS).

I gruppi di parodontite nello studio (NSP e SP) includeranno pazienti con diagnosi di parodontite di stadio II e III, generalizzata, di grado B, C sulla base clinica del rapporto di consenso del workshop mondiale 2017 sulla classificazione delle malattie parodontali e perimplantari e Condizioni e individui sistemicamente sani. Saranno inclusi pazienti con perdita di attacco clinica ≥ 3 mm in > 30% dei siti, con profondità di sondaggio ≥ 5 mm in almeno sei denti e con perdita ossea radiografica estesa fino o oltre il terzo medio della radice nel terzo coronale. Saranno inclusi pazienti con perdita dei denti correlata alla malattia parodontale ≤4 denti. Il tasso di progressione della malattia sarà classificato come Classe B o C sulla base dell'evidenza diretta della progressione della malattia confermata da radiografie panoramiche e dell'evidenza di distruzione indiretta proporzionale agli accumuli di biofilm. Nel gruppo dei fumatori con periodontite (SP) e nel gruppo dei fumatori sani (HCS), saranno inclusi i partecipanti che hanno riferito di fumare più di 10 sigarette al giorno per più di 5 anni, mentre i partecipanti ai gruppi di non fumatori (NSP e HC) saranno quelli che ha riferito di non aver mai fumato.

Misurazioni cliniche e trattamento parodontale non chirurgico

Campioni di saliva e siero verranno raccolti da tutti i pazienti inizialmente e 3 mesi dopo l'NSPT. Verranno registrati anche i parametri clinici inizialmente e al 3° mese. L'indice di placca (PI) e l'indice gengivale (GI) saranno registrati in quattro siti per dente. La profondità di sondaggio dell'intera bocca (PD) e il livello di attacco clinico (CAL) saranno dettagliati per dente in sei siti e la percentuale di aree sanguinanti verrà registrata come presente o assente entro 20 secondi dopo il sondaggio utilizzando un sistema di punteggio binario. Un parodontologo calibrato (ZTE) registrerà tutti i parametri clinici utilizzando il sondaggio manuale. La calibrazione dell'esaminatore verrà fornita prima di iniziare lo studio su una piccola popolazione pilota per ottenere una precisione intra-esaminatore coerente. Dopo la raccolta dei campioni di base e delle registrazioni dei parametri clinici, tutti i pazienti riceveranno un trattamento parodontale iniziale, compresa l'educazione del paziente, l'ablazione dell'intera bocca e la levigatura radicolare (SRP) e istruzioni di igiene orale dallo stesso medico esperto (ZTE).

Misurazione di laboratorio

A ciascun paziente verrà chiesto di astenersi dal mangiare, dal bere e dalle pratiche di igiene orale per 12 ore prima del campionamento. Campioni di siero e saliva verranno raccolti da ciascun paziente tra le 8:00 e le 10:00 del mattino prima della visita odontoiatrica.

Prelievo di sangue: nell'ambito dello studio, un totale di 5 ml di sangue verranno raccolti dalla vena antecubitale di ciascun individuo da un infermiere esperto del Dipartimento di Parodontologia.

Per il prelievo del siero, verrà eseguita una puntura venosa e verranno raccolti campioni di sangue, immediatamente raffreddati su ghiaccio e centrifugati a 4°C (800 giri/min per 10 minuti). Dopo la raccolta dei campioni di saliva, questi verranno immediatamente centrifugati a 4°C (1000 giri/min per 2 minuti). Dopo il campionamento, sia i campioni di siero che quelli di saliva verranno conservati a -80°C fino al momento dell'analisi. Le concentrazioni di NLRP3, ASC, caspasi-1, IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta e SIRT-1 saranno analizzate mediante specifici kit ELISA (enzima-linked immunosorbent assay) in entrambi campioni di siero e saliva. LncRNA SNHG5 e MEG3 saranno esaminati utilizzando la reazione a catena della polimerasi in tempo reale (RT-PCR).

I livelli di IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta, NLRP3, SIRT-1, lncRNA SNHG5 e MEG3 nel PMBC saranno valutati utilizzando RT-PCR. Tutte le fasi di analisi per ciascun kit verranno valutate utilizzando il protocollo raccomandato dal produttore.

Analisi statistica:

L'analisi statistica verrà eseguita utilizzando il software disponibile in commercio (SPSS versione 22.0, SPSS). In questo studio verrà utilizzato un valore di significatività (valore p) <0,05. Questo studio è concepito come uno studio clinico prospettico controllato. La dimensione del campione dello studio è stata calcolata utilizzando il programma R Statistical Language (versione 4.1.2; La Fondazione R per il calcolo statistico, Vienna, Austria; http://www.r-project.org). È stato pianificato di includere almeno 25 individui in ciascun gruppo per l'analisi dell'analisi della varianza unidirezionale da condurre con un livello di significatività del 5%, potenza statistica dell'80% e dimensione dell'effetto di 0,4 (f di Cohen = 0,4) per determinare se esiste una differenza significativa nei fattori infiammatori tra i gruppi di studio (parodontite fumatrice, parodontite sana parodontalmente fumatrice, parodontite parodontale non fumatrice, parodontite sana parodontale non fumatrice).

Le analisi longitudinali includeranno solo i dati dei pazienti che completano l'intero protocollo di studio.