Tratamento periodontal não cirúrgico em fumantes com SIRT-1, inflamassoma NLRP3 e LncRNAs

Haverá 4 grupos no estudo: periodontite de não fumantes (NSP), periodontite de fumantes (SP), controle saudável de não fumantes (HC) e controle saudável de fumantes (HCS).

Os grupos de periodontite no estudo (NSP e SP) incluirão pacientes com diagnóstico de periodontite de Estágio II e III, generalizada, Grau B, C clinicamente com base no relatório de consenso do Workshop Mundial de 2017 sobre a Classificação de Doenças Periodontais e Peri-Implantares e Condições e indivíduos sistemicamente saudáveis. Serão incluídos pacientes com perda de inserção clínica ≥3 mm em >30% dos locais, com profundidade de sondagem ≥5 mm em pelo menos seis dentes e com perda óssea radiográfica estendendo-se até ou além do terço médio da raiz no terço coronal. Serão incluídos pacientes com perda dentária relacionada à doença periodontal ≤4 dentes. A taxa de progressão da doença será classificada como Classe B ou C com base na evidência direta de progressão da doença confirmada por radiografias panorâmicas e evidência de destruição indireta proporcional ao acúmulo de biofilme. No grupo de fumantes com periodontite (SP) e grupo de fumantes saudáveis ​​(HCS), serão incluídos os participantes que relataram fumar >10 cigarros por dia durante >5 anos, enquanto os participantes dos grupos de não fumantes (NSP e HC) serão aqueles que relataram nunca ter fumado.

Medições Clínicas e Tratamento Periodontal Não Cirúrgico

Amostras de saliva e soro serão coletadas de todos os pacientes inicialmente e 3 meses após NSPT. Os parâmetros clínicos também serão registrados inicialmente e no 3º mês. O índice de placa (PI) e o índice gengival (GI) serão registrados em quatro locais por dente. A profundidade de sondagem de toda a boca (PD) e o nível de inserção clínica (CAL) serão detalhados por dente em seis locais, e a porcentagem de áreas de sangramento será registrada como presente ou ausente dentro de 20 segundos após a sondagem usando um sistema de pontuação binária. Um periodontista calibrado (ZTE) registrará todos os parâmetros clínicos usando sondagem manual. A calibração do examinador será fornecida antes de iniciar o estudo em uma pequena população piloto para alcançar uma precisão intra-examinador consistente. Após a coleta de amostras iniciais e registros de parâmetros clínicos, todos os pacientes receberão tratamento periodontal inicial, incluindo educação do paciente, raspagem bucal completa e alisamento radicular (SRP) e instruções de higiene oral do mesmo clínico experiente (ZTE).

Medição Laboratorial

Cada paciente será instruído a se abster de comer, beber e práticas de higiene oral por 12 horas antes da amostragem. Amostras de soro e saliva serão coletadas de cada paciente entre 8h00 e 10h00 da manhã antes do exame odontológico.

Coleta de Sangue: No escopo do estudo, um total de 5 mL de sangue serão coletados da veia antecubital de cada indivíduo por uma enfermeira especialista do Departamento de Periodontia.

Para coleta de soro, será realizada punção venosa e amostras de sangue serão coletadas, imediatamente resfriadas em gelo e centrifugadas a 4°C (800 rpm por 10 minutos). Após a coleta das amostras de saliva, elas serão centrifugadas imediatamente a 4°C (1000 rpm por 2 minutos). Após a amostragem, as amostras de soro e saliva serão armazenadas a -80°C até a análise. As concentrações de NLRP3, ASC, caspase-1, IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta e SIRT-1 serão analisadas por kits específicos de ensaio imunoenzimático (ELISA) em ambos amostras de soro e saliva. LncRNA SNHG5 e MEG3 serão examinados usando reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR).

Os níveis de IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta, NLRP3, SIRT-1, lncRNA SNHG5 e MEG3 em PMBC serão avaliados usando RT-PCR. Todas as etapas de análise de cada kit serão avaliadas utilizando o protocolo recomendado pelo fabricante.

Análise Estatística:

A análise estatística será realizada utilizando software comercialmente disponível (SPSS versão 22.0, SPSS). Neste estudo será utilizado um valor de significância (valor de p) <0,05. Este estudo foi concebido como um ensaio clínico prospectivo controlado. O tamanho da amostra do estudo foi calculado por meio do programa R Statistical Language (versão 4.1.2; The R Foundation for Statistical Computing, Viena, Áustria; http://www.r-project.org). Foi planejado incluir pelo menos 25 indivíduos em cada grupo para análise de Análise de Variância Unidirecional a ser realizada com nível de significância de 5%, poder estatístico de 80% e tamanho de efeito de 0,4 (f de Cohen = 0,4) para determinar se houver diferença significativa nos fatores inflamatórios entre os grupos de estudo (tabagismo periodontal, tabagismo periodontalmente saudável, não-fumante periodontite, não-fumante periodontalmente saudável).

As análises longitudinais incluirão dados apenas de pacientes que completaram todo o protocolo do estudo.