Нехирургическое лечение пародонта у курильщиков с помощью SIRT-1, NLRP3 Inflammasome и LncRNAs

В исследовании будут участвовать 4 группы: пародонтит некурящих (NSP), пародонтит курящих (SP), контрольная группа некурящих здоровых (HC) и контрольная группа здоровых курящих (HCS).

Группы пародонтита в исследовании (NSP и SP) будут включать пациентов с диагностированной стадией II и III, генерализованным пародонтитом степени B, C клинически на основании консенсусного отчета Всемирного семинара 2017 года по классификации заболеваний пародонта и периимплантатов и Условия и системно здоровые люди. Будут включены пациенты с клинической потерей прикрепления ≥3 мм в >30% участков, с глубиной зондирования ≥5 мм как минимум в шести зубах и с рентгенологической потерей костной ткани, распространяющейся до или за пределы средней трети корня в коронковой трети. В исследование будут включены пациенты с потерей <4 зубов из-за заболеваний пародонта. Скорость прогрессирования заболевания будет классифицирована как класс B или C на основании прямых доказательств прогрессирования заболевания, подтвержденных панорамными рентгенограммами, и доказательств косвенного разрушения, пропорционального накоплению биопленки. В группу курящего пародонтита (SP) и группу здорового курения (HCS) будут включены участники, которые сообщили о курении >10 сигарет в день в течение >5 лет, тогда как участниками групп некурящих (NSP и HC) будут те, кто сообщил, что никогда не курил.

Клинические измерения и нехирургическое пародонтальное лечение

Образцы слюны и сыворотки будут взяты у всех пациентов первоначально и через 3 месяца после NSPT. Клинические параметры также будут записываться первоначально и на 3-м месяце. Индекс зубного налета (PI) и индекс десны (GI) будут записываться в четырех местах на каждый зуб. Глубина зондирования всего рта (PD) и уровень клинического прикрепления (CAL) будут подробно описаны для каждого зуба в шести местах, а процент областей кровотечения будет записан как присутствующий или отсутствующий в течение 20 секунд после зондирования с использованием бинарной системы оценки. Квалифицированный пародонтолог (ZTE) запишет все клинические параметры с помощью ручного зондирования. Калибровка эксперта будет предоставлена ​​перед началом исследования на небольшой пилотной группе для достижения постоянной точности внутри экзаменатора. После сбора исходных образцов и записи клинических параметров все пациенты получат начальное пародонтологическое лечение, включая обучение пациента, удаление зубного камня во рту и строгание корня (SRP), а также инструкции по гигиене полости рта от одного и того же опытного врача (ZTE).

Лабораторные измерения

Каждому пациенту будет дано указание воздерживаться от еды, питья и гигиены полости рта в течение 12 часов перед взятием образца. Образцы сыворотки и слюны будут взяты у каждого пациента между 8:00 и 10:00 утра перед стоматологическим осмотром.

Отбор проб крови: В рамках исследования опытная медсестра отделения пародонтологии возьмет в общей сложности 5 мл крови из локтевой вены каждого человека.

Для забора сыворотки будет выполнена венозная пункция, образцы крови будут собраны, немедленно охлаждены на льду и центрифугированы при 4°C (800 об/мин в течение 10 минут). После сбора образцов слюны их немедленно центрифугируют при 4°C (1000 об/мин в течение 2 минут). После отбора пробы как сыворотки, так и слюны будут храниться при температуре -80°C до проведения анализа. Концентрации NLRP3, ASC, каспазы-1, IL-18, IL-1бета, TNF-альфа, IL-10, TGF-бета и SIRT-1 будут анализироваться с помощью специальных наборов для иммуноферментного анализа (ELISA) в обоих случаях. образцы сыворотки и слюны. LncRNA SNHG5 и MEG3 будут исследованы с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-PCR).

Уровни IL-18, IL-1beta, TNF-alfa, IL-10, TGF-beta, NLRP3, SIRT-1, lncRNA SNHG5 и MEG3 в PMBC будут оцениваться с помощью RT-PCR. Все этапы анализа для каждого набора будут оцениваться с использованием протокола, рекомендованного производителем.

Статистический анализ:

Статистический анализ будет проводиться с использованием коммерчески доступного программного обеспечения (SPSS версии 22.0, SPSS). В этом исследовании будет использоваться значение значимости (р-значение) <0,05. Данное исследование задумано как проспективное контролируемое клиническое исследование. Размер выборки исследования был рассчитан с использованием программы R Statistical Language (версия 4.1.2; Фонд статистических вычислений R, Вена, Австрия; http://www.r-project.org). Планировалось включить не менее 25 человек в каждую группу для проведения одностороннего дисперсионного анализа с уровнем значимости 5%, статистической мощностью 80% и величиной эффекта 0,4 (коэновское f=0,4) для определения при наличии достоверной разницы в воспалительных факторах между исследуемыми группами (курящие пародонтит, курящие пародонтально здоровые, некурящие пародонтит, некурящие пародонтально здоровые).

Продольный анализ будет включать данные только от пациентов, завершивших весь протокол исследования.