Nuevos enfoques de citometría de flujo para mejorar la detección de células tumorales en CTCL

Los linfomas cutáneos primarios son un grupo de tumores derivados de linfocitos (principalmente linfocitos T) que afectan principalmente a la piel (como la micosis fungoide, MF), aunque pueden extenderse más allá de la piel en estadios más avanzados -por ejemplo, a la sangre- o Puede que ya esté diseminado inicialmente, como es el caso del síndrome de Sézary (SS), un tumor con un comportamiento muy agresivo desde el principio, que por definición ya tiene diseminación sanguínea en el momento del diagnóstico. Son tumores muy raros y difíciles de diagnosticar porque muchas veces las lesiones cutáneas son indistinguibles de los procesos benignos (estos últimos mucho más frecuentes que los linfomas cutáneos). Por este motivo, no es raro que el diagnóstico se retrase, con el consiguiente impacto negativo en el pronóstico del paciente si se trata de un tumor. Actualmente, el diagnóstico de la diseminación sanguínea (cuya cantidad también es fundamental porque influye en el pronóstico cuanto peor es la mayor carga tumoral en la sangre) se realiza mediante citometría de flujo, que ha sustituido a la morfología convencional. Sin embargo, las técnicas de citometría de flujo utilizadas actualmente en la mayoría de los laboratorios clínicos no están estandarizadas entre los diferentes centros y, por tanto, la comparabilidad de los resultados (incluso a lo largo del tiempo, en el mismo centro) y su uso en el ámbito clínico es difícil.

En este proyecto, PRESENTAMOS LA HIPOTESIS de que la aplicación de novedosas estrategias de "flujo de próxima generación" propuestas por el grupo colaborativo internacional EuroFlow (al que pertenece el solicitante de esta propuesta) mejoraría la detección de células tumorales circulantes en pacientes con células T cutáneas. linfoma, lo que permitiría mejorar el manejo clínico de los pacientes. Por ello, en este proyecto pretendemos como OBJETIVO GENERAL aplicar estrategias estandarizadas de citometría de flujo de próxima generación desarrolladas por el Consorcio EuroFlow para la detección y cuantificación rápida, específica, sensible y reproducible de células tumorales en pacientes con MF/SS. mediante: i) la aplicación de procedimientos estandarizados de tinción de muestras con paneles de anticuerpos diseñados luego de rondas de pruebas previas, que permitirían distinguir los linfocitos T tumorales de las células T normales (especificidad); ii) adaptar la técnica para analizar un gran número de células, con el fin de lograr una alta sensibilidad de detección, también crucial para un seguimiento más preciso de la enfermedad residual en sangre tras el tratamiento con las nuevas terapias disponibles en los linfomas cutáneos de células T; y iii) desarrollo de estrategias de análisis automático de datos de citometría, para que los resultados no dependan de la experiencia personal del citometrista.

IMPACTO. La disponibilidad de una nueva estrategia estandarizada de citometría de flujo para la detección (y cuantificación) sensible y específica de células tumorales circulantes en la sangre (y la piel) de pacientes con linfoma cutáneo de células T proporcionará una herramienta esencial para apoyar el diagnóstico dermohematológico, con la posibilidad de trasladarlo al diagnóstico rutinario en el muy corto plazo posterior a la finalización del proyecto, para su aplicación en hospitales que cuenten con un Laboratorio de Citometría/Inmunopatología, con el objetivo de: i) Realizar un diagnóstico (diferencial) temprano y certero entre linfoma - lesión benigna en pacientes con lesiones cutáneas; ii) Detectar células tumorales en sangre con mayor sensibilidad que los métodos convencionales, para establecer con mayor precisión la diseminación sanguínea de un linfoma cutáneo primario de células T y evaluar la respuesta a los tratamientos actuales de una manera más confiable y sensible.