Nové přístupy průtokové cytometrie ke zlepšení detekce nádorových buněk v CTCL

Primární kožní lymfomy jsou skupinou nádorů odvozených z lymfocytů (většinou T lymfocytů), které primárně postihují kůži (např. mycosis fungoides, MF), i když se mohou v pokročilejších stadiích šířit i mimo kůži – např. do krve – popř. může být již zpočátku diseminovaný, jako je tomu u Sézaryho syndromu (SS), nádoru s velmi agresivním chováním od počátku, který již z definice má při diagnóze krevní diseminaci. Jsou to velmi vzácné nádory a je obtížné je diagnostikovat, protože kožní léze jsou často nerozeznatelné od benigních procesů (ten je mnohem častější než kožní lymfomy). Z tohoto důvodu nezřídka dochází k opoždění diagnózy s následným negativním dopadem na prognózu pacienta, pokud se jedná o nádor. V současné době se diagnostika diseminace krve (jejíž množství je zásadní i proto, že ovlivňuje prognózu, čím horší je vyšší nádorová zátěž v krvi) provádí průtokovou cytometrií, která nahradila konvenční morfologii. Techniky průtokové cytometrie používané v současnosti ve většině klinických laboratoří však nejsou standardizovány mezi různými centry, a proto je srovnatelnost výsledků (i v čase, ve stejném centru) a jejich použití v klinických podmínkách obtížné.

V tomto projektu HYPOTÉZUJEME, že aplikace nových strategií „toku nové generace“ navržených mezinárodní kolaborativní skupinou EuroFlow (do které žadatel tohoto návrhu patří) by zlepšila detekci cirkulujících nádorových buněk u pacientů s kožními T-buňkami lymfom, což by umožnilo zlepšit klinický management pacientů. Proto si v tomto projektu klademe jako OBECNÝ CÍL za cíl aplikovat standardizované strategie průtokové cytometrie nové generace vyvinuté konsorciem EuroFlow pro rychlou, specifickou, citlivou a reprodukovatelnou detekci a kvantifikaci nádorových buněk u pacientů s MF/SS, prostřednictvím: i) aplikace standardizovaných postupů barvení vzorků s panely protilátek navrženými po předchozích kolech testování, které by umožnily odlišit nádorové T lymfocyty od normálních T buněk (specifičnost); ii) přizpůsobení techniky k analýze velkého počtu buněk za účelem dosažení vysoké citlivosti detekce, která je rovněž zásadní pro přesnější sledování reziduálního onemocnění v krvi po léčbě novými dostupnými terapiemi u kožních T-buněčných lymfomů; a iii) vývoj strategií automatické analýzy cytometrických dat tak, aby výsledky nezávisely na osobní zkušenosti cytometra.

DOPAD. Dostupnost nové standardizované strategie průtokové cytometrie pro citlivou a specifickou detekci (a kvantifikaci) cirkulujících nádorových buněk v krvi (a kůži) pacientů s kožním T-buněčným lymfomem poskytne základní nástroj pro podporu dermo-hematologické diagnostiky. možnost převedení na rutinní diagnostiku ve velmi krátké době po dokončení projektu pro jeho aplikaci v nemocnicích, které mají laboratoř cytometrie/imunopatologie, s cílem: i) Stanovení časné a přesné (diferenciální) diagnózy mezi lymfomy - benigní léze u pacientů s kožními lézemi; ii) Detekce nádorových buněk v krvi s větší citlivostí než konvenční metody, pro přesnější stanovení krevní diseminace primárního kožního T-buněčného lymfomu a pro spolehlivější a citlivější posouzení odpovědi na současnou léčbu