Nowatorskie metody cytometrii przepływowej poprawiające wykrywanie komórek nowotworowych w CTCL

Pierwotne chłoniaki skóry to grupa nowotworów wywodzących się z limfocytów (głównie limfocytów T), które atakują głównie skórę (takie jak ziarniniak grzybiasty, MF), chociaż mogą rozprzestrzeniać się poza skórę w bardziej zaawansowanych stadiach – na przykład do krwi – lub może być już początkowo rozsiany, jak ma to miejsce w przypadku zespołu Sézary'ego (SS), guza od początku zachowującego się bardzo agresywnie, który z definicji ma rozsiew do krwi już w chwili rozpoznania. Są to nowotwory bardzo rzadkie i trudne do zdiagnozowania, gdyż często zmiany skórne są nie do odróżnienia od procesów łagodnych (te ostatnie znacznie częściej niż chłoniaki skóry). Z tego powodu nierzadko zdarza się, że diagnoza jest opóźniona, co w konsekwencji ma negatywny wpływ na rokowanie pacjenta, jeśli jest to nowotwór. Obecnie w diagnostyce rozsiewu krwi (którego ilość jest również istotna, ponieważ wpływa na rokowanie, im większe obciążenie nowotworem we krwi) przeprowadza się za pomocą cytometrii przepływowej, która zastąpiła konwencjonalną morfologię. Jednakże techniki cytometrii przepływowej stosowane obecnie w większości laboratoriów klinicznych nie są ujednolicone w różnych ośrodkach, dlatego porównywalność wyników (nawet w czasie, w tym samym ośrodku) i ich zastosowanie w warunkach klinicznych jest trudne.

W tym projekcie stawiamy hipotezę, że zastosowanie nowatorskich strategii „przepływu nowej generacji” zaproponowanych przez międzynarodową grupę współpracy EuroFlow (do której należy wnioskodawca tej propozycji) poprawiłoby wykrywanie krążących komórek nowotworowych u pacjentów ze skórnymi limfocytami T chłoniaka, co umożliwiłoby poprawę postępowania klinicznego z pacjentami. Dlatego w tym projekcie naszym CELEM OGÓLNYM jest zastosowanie standaryzowanych strategii cytometrii przepływowej nowej generacji opracowanej przez konsorcjum EuroFlow w celu szybkiego, specyficznego, czułego i powtarzalnego wykrywania i oznaczania ilościowego komórek nowotworowych u pacjentów z MF/SS, poprzez: i) zastosowanie standaryzowanych procedur barwienia próbek za pomocą paneli przeciwciał zaprojektowanych po poprzednich rundach testów, które pozwolą na odróżnienie limfocytów T nowotworowych od prawidłowych limfocytów T (swoistość); ii) przystosowanie techniki do analizy dużej liczby komórek w celu osiągnięcia wysokiej czułości wykrywania, kluczowej również dla dokładniejszego monitorowania choroby resztkowej we krwi po leczeniu nowymi terapiami dostępnymi w chłoniakach skórnych z komórek T; oraz iii) opracowanie strategii automatycznej analizy danych cytometrycznych, tak aby wyniki nie zależały od osobistego doświadczenia cytometra.

UDERZENIE. Dostępność nowej, standaryzowanej strategii cytometrii przepływowej umożliwiającej czułe i specyficzne wykrywanie (i oznaczanie ilościowe) krążących komórek nowotworowych we krwi (i skórze) pacjentów ze skórnym chłoniakiem z komórek T zapewni istotne narzędzie wspierające diagnostykę dermo-hematologiczną, przy możliwość przełożenia na diagnostykę rutynową w bardzo krótkim czasie po zakończeniu projektu, do zastosowania w szpitalach posiadających Pracownię Cytometrii/Immunopatologii, w celu: i) Postawienia wczesnej i dokładnej (różnicowej) diagnostyki chłoniaka - zmiany łagodne u pacjentów ze zmianami skórnymi; ii) Wykrywanie komórek nowotworowych we krwi z większą czułością niż metody konwencjonalne, w celu dokładniejszego określenia rozsiewu krwi pierwotnego chłoniaka skórnego z komórek T oraz oceny odpowiedzi na obecne metody leczenia w bardziej niezawodny i czuły sposób