Nuovi approcci alla citometria a flusso per migliorare la rilevazione delle cellule tumorali nel CTCL

I linfomi cutanei primitivi sono un gruppo di tumori derivati ​​da linfociti (principalmente linfociti T) che colpiscono principalmente la pelle (come la micosi fungoide, MF), sebbene possano diffondersi oltre la pelle negli stadi più avanzati - ad esempio, al sangue - o può essere già disseminato inizialmente, come nel caso della sindrome di Sézary (SS), un tumore dal comportamento molto aggressivo fin dall'inizio, che per definizione presenta già disseminazione ematica al momento della diagnosi. Sono tumori molto rari e difficili da diagnosticare perché spesso le lesioni cutanee sono indistinguibili dai processi benigni (questi ultimi molto più frequenti dei linfomi cutanei). Per questo motivo non è raro che la diagnosi venga ritardata, con il conseguente impatto negativo sulla prognosi del paziente se si tratta di un tumore. Attualmente, la diagnosi della disseminazione ematica (la cui entità è essenziale anche perché incide sulla prognosi tanto più grave quanto maggiore è la carica tumorale nel sangue) viene eseguita mediante citometria a flusso, che ha sostituito la morfologia convenzionale. Tuttavia, le tecniche di citometria a flusso attualmente utilizzate nella maggior parte dei laboratori clinici non sono standardizzate tra i diversi centri, e quindi la comparabilità dei risultati (anche nel tempo, nello stesso centro) e il loro utilizzo in ambito clinico è difficile.

In questo progetto, IPOTESIamo che l'applicazione di nuove strategie di "flusso di prossima generazione" proposte dal gruppo collaborativo internazionale EuroFlow (a cui appartiene il richiedente di questa proposta) migliorerebbe il rilevamento delle cellule tumorali circolanti in pazienti con cellule T cutanee linfoma, che consentirebbe di migliorare la gestione clinica dei pazienti. Pertanto, in questo progetto, miriamo come OBIETTIVO GENERALE ad applicare strategie standardizzate di citometria a flusso di nuova generazione sviluppate dal Consorzio EuroFlow per il rilevamento e la quantificazione rapidi, specifici, sensibili e riproducibili delle cellule tumorali in pazienti con MF/SS, attraverso: i) l'applicazione di procedure standardizzate di colorazione dei campioni con pannelli di anticorpi progettati dopo precedenti cicli di test, che consentirebbero di distinguere i linfociti T tumorali dalle cellule T normali (specificità); ii) adattare la tecnica per analizzare un gran numero di cellule, al fine di ottenere un'elevata sensibilità di rilevamento, cruciale anche per un monitoraggio più preciso della malattia residua nel sangue dopo il trattamento con le nuove terapie disponibili nei linfomi cutanei a cellule T; e iii) sviluppo di strategie di analisi automatica dei dati citometrici, in modo che i risultati non dipendano dall'esperienza personale del citometrista.

IMPATTO. La disponibilità di una nuova strategia di citometria a flusso standardizzata per il rilevamento sensibile e specifico (e la quantificazione) delle cellule tumorali circolanti nel sangue (e nella pelle) di pazienti con linfoma cutaneo a cellule T fornirà uno strumento essenziale per supportare la diagnosi dermo-ematologica, con la possibilità di possibilità di passare alla diagnosi di routine nel brevissimo termine dopo il completamento del progetto, per la sua applicazione negli ospedali che dispongono di un Laboratorio di Citometria/Immunopatologia, con l'obiettivo di: i) Effettuare una diagnosi (differenziale) precoce e accurata tra linfoma - lesione benigna in pazienti con lesioni cutanee; ii) Rilevamento delle cellule tumorali nel sangue con maggiore sensibilità rispetto ai metodi convenzionali, per stabilire con maggiore precisione la diffusione ematica di un linfoma cutaneo primario a cellule T e per valutare la risposta ai trattamenti attuali in modo più affidabile e sensibile