Novas abordagens de citometria de fluxo para melhorar a detecção de células tumorais em CTCL

Os linfomas cutâneos primários são um grupo de tumores derivados de linfócitos (principalmente linfócitos T) que afetam principalmente a pele (como a micose fungóide, MF), embora possam se espalhar para além da pele em estágios mais avançados - por exemplo, para o sangue - ou já pode estar disseminado inicialmente, como é o caso da síndrome de Sézary (SS), tumor com comportamento muito agressivo desde o início, que por definição já apresenta disseminação sanguínea no momento do diagnóstico. São tumores muito raros e de difícil diagnóstico porque muitas vezes as lesões cutâneas são indistinguíveis de processos benignos (estes últimos muito mais comuns que os linfomas cutâneos). Por esse motivo, não é incomum que o diagnóstico seja tardio, com o consequente impacto negativo no prognóstico do paciente se for um tumor. Atualmente, o diagnóstico da disseminação sanguínea (cuja quantidade também é essencial porque impacta no prognóstico, quanto pior, maior a carga tumoral no sangue) é realizado pela citometria de fluxo, que substituiu a morfologia convencional. No entanto, as técnicas de citometria de fluxo utilizadas atualmente na maioria dos laboratórios clínicos não estão padronizadas entre os diferentes centros e, portanto, a comparabilidade dos resultados (mesmo ao longo do tempo, no mesmo centro) e a sua utilização nos ambientes clínicos é difícil.

Neste projeto, hipotetizamos que a aplicação de novas estratégias de "fluxo de próxima geração" propostas pelo grupo colaborativo internacional EuroFlow (ao qual pertence o requerente desta proposta) melhoraria a detecção de células tumorais circulantes em pacientes com células T cutâneas. linfoma, o que permitiria melhorar o manejo clínico dos pacientes. Portanto neste projeto pretendemos como OBJETIVO GERAL aplicar estratégias padronizadas de citometria de fluxo de última geração desenvolvidas pelo Consórcio EuroFlow para a detecção e quantificação rápida, específica, sensível e reprodutível de células tumorais em pacientes com MF/SS, através: i) da aplicação de procedimentos padronizados de coloração de amostras com painéis de anticorpos elaborados após rodadas anteriores de testes, o que permitiria distinguir linfócitos T tumorais de células T normais (especificidade); ii) adaptar a técnica para analisar um grande número de células, a fim de alcançar uma elevada sensibilidade de detecção, também crucial para uma monitorização mais precisa da doença residual no sangue após o tratamento com as novas terapias disponíveis nos linfomas cutâneos de células T; e iii) desenvolvimento de estratégias de análise automática de dados de citometria, para que os resultados não dependam da experiência pessoal do citometrista.

IMPACTO. A disponibilidade de uma nova estratégia padronizada de citometria de fluxo para detecção (e quantificação) sensível e específica de células tumorais circulantes no sangue (e na pele) de pacientes com linfoma cutâneo de células T fornecerá uma ferramenta essencial para apoiar o diagnóstico dermo-hematológico, com o possibilidade de tradução para diagnóstico de rotina num curtíssimo prazo após a conclusão do projecto, para a sua aplicação em hospitais que disponham de Laboratório de Citometria/Imunopatologia, com o objectivo de: i) Fazer um diagnóstico precoce e preciso (diferencial) entre linfoma - lesão benigna em pacientes com lesões cutâneas; ii) Detecção de células tumorais no sangue com maior sensibilidade do que os métodos convencionais, para estabelecer com mais precisão a disseminação sanguínea de um linfoma cutâneo primário de células T e para avaliar a resposta aos tratamentos atuais de uma forma mais confiável e sensível