Luuytimen ja veri-B-solujen immuunivasteiden analyysi influenssarokotteelle
Tämä oli vaiheen IV avoin ja yhden haaran tutkimus, jonka tavoitteena oli ottaa enintään 55 tervettä miestä ja ei-raskaana olevaa naista yhteen paikkaan, iältään 18–49 vuotta. Tämä tutkimus oli suunniteltu arvioimaan humoraalista vastetta influenssarokotteelle ja humoraalisen immuniteetin kestoa influenssarokotteelle terveillä aikuisilla. Osallistujia oli yhteensä 27.
Tämä oli monivuotinen tutkimus. Vuoden osallistumisen jälkeen osallistujille tarjottiin mahdollisuutta osallistua tutkimukseen enintään kolmena peräkkäisenä vuotena edellyttäen, että kelpoisuusvaatimukset täyttyivät joka vuosi. Osallistujat, jotka päättivät jatkaa tutkimuksessa ensimmäisen osallistumisvuoden jälkeen, seulottiin uudelleen jatkuvan kelpoisuuden varmistamiseksi, ja he suostuivat uudelleen ennen myöhempää osallistumista. Tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena oli tutkia humoraalisen immuniteetin kestoa influenssavirukselle ihmisillä.
Huomautus: Vuoden 2019 koronavirustaudin (COVID-19) pandemian vuoksi kaikki ei-välttämättömät tutkimukset keskeytettiin maaliskuun 2020 puolivälissä. Uudet ilmoittautumiset asetettiin odottamaan tätä tutkimusta varten. Myös seurantakäynnit keskeytettiin, mikä vaikutti osallistujien myöhempien seurantakäyntien ajoitukseen. Päivän 7 ja 14 osallistujien vierailuihin ei ollut vaikutusta. Tässä tutkimuksessa oli osallistujia, joiden 28. ja 90. päivän vierailuihin vaikutti ei-olennaisten tutkimusten tilapäinen keskeyttäminen. Näin ollen Emory University Institutional Review Boardille lähetettiin pyyntö pidentää 28. ja 90. päivän vierailujen poissaolon ikkunoita enintään 180 päiväksi, jotta varmistetaan, että osallistujien tuomiseen on riittävästi aikaa. jääneet vierailut. Ilmoittautuminen tähän tutkimukseen päättyi 31.3.2020, ennen kuin tutkimustoimintaa voitiin jatkaa Emoryssa.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Ehdot
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Tämä oli vaiheen IV avoin ja yhden haaran tutkimus, jonka tavoitteena oli ottaa enintään 55 tervettä miestä ja ei-raskaana olevaa naista yhteen paikkaan, iältään 18–49 vuotta. Tämä tutkimus oli suunniteltu arvioimaan humoraalista vastetta influenssarokotteelle ja humoraalisen immuniteetin kestoa influenssarokotteelle terveillä aikuisilla. Osallistujia oli yhteensä 27.
Tässä tutkimuksessa käytetty laboratoriotekniikka luonnehti antigeenispesifisten B-solujen ja plasmablastien pysyvyyttä ja klonotyyppiä veressä ja luuytimessä. Ilmoittautuneille osallistujille annettiin lisensoitu kausiluonteinen inaktivoitu influenssarokote (annettiin osana tutkimusta). Rokote annettiin pakkausselosteen mukaisesti, ja tutkimukseen osallistuneet luovuttivat sarjanäytteitä veri- ja luuydinspiraatista immunologian seurantaa varten.
Turvallisuutta arvioitiin tutkimukseen ilmoittautumishetkestä viimeiseen opintokäyntiin seuraamalla elintoimintoja, terveydentilan muutoksia ja kohdennettua fyysistä tarkastusta turvallisuuslaboratorioissa ennen jokaista luuytimen aspiraatiomenettelyä. Humoraalisen immuniteetin toistuvia mittauksia saatiin 7 päivää, 14 päivää, 28 päivää, 90 päivää ja yksi vuosi rokotuksen jälkeen influenssarokotuksen B-soluvasteiden suuruuden, kloonien monimuotoisuuden ja pysyvyyden arvioimiseksi.
Tämä oli monivuotinen tutkimus. Vuoden osallistumisen jälkeen osallistujille tarjottiin mahdollisuutta osallistua tutkimukseen enintään kolmena peräkkäisenä vuotena edellyttäen, että kelpoisuusvaatimukset täyttyivät joka vuosi. Osallistujat, jotka päättivät jatkaa tutkimuksessa ensimmäisen osallistumisvuoden jälkeen, seulottiin uudelleen jatkuvan kelpoisuuden varmistamiseksi, ja he suostuivat uudelleen ennen myöhempää osallistumista.
Uudelleen ilmoittautuvat osallistujat saivat uudet aihetunnisteet, ja ne lasketaan mukaan seuraavien osallistumisvuosien ilmoittautuneiden kokonaismäärään. Erillistä aiherekisteriä pidetään joka vuosi, kun tutkittava ilmoittautuu uudelleen tutkimukseen. Ilmoittautuminen ensi vuodelle alkaa kausi-influenssarokotteen saatavuudesta. Osallistujille, jotka päättävät ilmoittautua tutkimukseen uudelleen, päivän 365 käynti (+/- 3 kuukauden ikkuna) olisi myös seuraavan vuoden 0. päivän käynti. Tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena on tutkia humoraalisen immuniteetin kestoa influenssavirukselle ihmisillä. Toissijainen tutkimuksen tavoite on rokotteen aiheuttamien B-soluvasteiden pitkittäinen seuranta painottaen erityisesti laajasti neutraloivia HA:n (hemagglutiniinin) kantareaktiivisia vasteita.
Huomautus: Vuoden 2019 koronavirustaudin (COVID-19) pandemian vuoksi kaikki ei-välttämättömät tutkimukset keskeytettiin maaliskuun 2020 puolivälissä. Uudet ilmoittautumiset asetettiin odottamaan tätä tutkimusta varten. Myös seurantakäynnit keskeytettiin, mikä vaikutti osallistujien myöhempien seurantakäyntien ajoitukseen. Päivän 7 ja 14 osallistujien vierailuihin ei ollut vaikutusta. Tässä tutkimuksessa on osallistujia, joiden 28. ja 90. päivän vierailuihin vaikutti ei-olennaisten tutkimusten tilapäinen keskeyttäminen. Näin ollen Emory University Institutional Review Boardille lähetettiin pyyntö pidentää 28. ja 90. päivän vierailujen poissaolon ikkunoita enintään 180 päiväksi, jotta varmistetaan, että osallistujien tuomiseen on riittävästi aikaa. jääneet vierailut. Ilmoittautuminen tähän tutkimukseen päättyi 31.3.2020, ennen kuin tutkimustoimintaa voitiin jatkaa Emoryssa.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Vaihe
- Vaihe 4
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
Georgia
-
Atlanta, Georgia, Yhdysvallat, 30322-1059
- Emory Clinic - Winship Cancer Institute
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- Mies- tai ei-raskaana olevat 18–49-vuotiaat naiset (mukaan lukien).
- Koehenkilöt, jotka pystyvät antamaan kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen ennen minkään tutkimusmenettelyn aloittamista.
- Aiheet ymmärtävät ja noudattavat suunniteltuja opintomenettelyjä ja ovat käytettävissä kaikille opintokäynneille.
- Turvallisuuslaboratoriot:
- Valkosolujen määrä (WBC), normaalin alarajan 4 000 mikrolitraa kohti (uL) ja normaalin ylärajan 10 000 mikrolitraa kohti (uL) sisällä.
- Hemoglobiini, normaalin alarajan 11,4 grammaa desilitraa kohden (gm/dL) ja normaalin ylärajan 16,1 grammaa desilitraa kohden (gm/dl) vertailualueella.
- Hematokriitti, normaalin alarajan 33,3 prosentin ja normaalin ylärajan 46,5 prosentin vertailualueella.
- Verihiutalemäärä, normaalin alarajan 150 000 mikrolitraa kohti (uL) ja normaalin ylärajan 400 000 mikrolitraa kohti (uL) sisällä.
- Protrombiiniaika (PT/INR), PT alle tai yhtä suuri kuin normaalin yläraja 13,1 sekuntia; Kansainvälinen normalisoitu suhde (INR) normaalin vertailualueen sisällä on alle 1,5 (normaali alue ei-antikoaguloituneilla potilailla).
- Kreatiniini viitealueella normaalin alarajan 0,4 milligrammaa desilitraa kohden (mg / dL) ja normaalin ylärajan 1,2 milligrammaa desilitraa kohden (mg / dL).
- Kalium, normaalin alarajan 3,6 millimolaarisen (mM) ja normaalin ylärajan 5,1 millimolaarisen (mM) vertailualueella.
- Syke > / = 55 - < / = 100 minuutissa.
- Systolinen verenpaine > / = 90 - < / = 150 elohopeamillimetriä (mmHg).
- Diastolinen verenpaine < 90 elohopeamillimetriä (mmHg).
- Suun lämpötila < 100 Fahrenheit-astetta.
- Hengitys on tasaista, työstämätöntä ja > 10/minuutti - < 20/minuutti.
- Hedelmällisessä iässä olevilla naisilla on oltava negatiivinen virtsaraskaustesti seulontakäynnillä, ilmoittautumiskäynnillä ja ennen myöhempiä luuytimen aspiraatiotoimenpiteitä. Hedelmällisessä iässä olevien naishenkilöiden on suostuttava harjoittamaan raittiutta, käyttämään estemenetelmää ehkäisyssä tai käyttämään Yhdysvaltain elintarvike- ja lääkeviraston (FDA) hyväksymää ehkäisymuotoa.
- Koehenkilöt, jotka eivät ole saaneet kausi-influenssarokotetta kuluvana vuonna (syyskuu-kesäkuu).
Poissulkemiskriteerit:
- Jos nainen, aktiivinen raskaus tai imetys tai suunnittelee raskautta tutkimukseen osallistumisen aikana.
- Kohteen raportti lääketieteellisestä sairaudesta tai tilasta, joka paikan päätutkijan tai asianmukaisen osatutkijan mielestä on vasta-aihe tutkimukseen osallistumiselle. Tämä sisältää kaikki akuutit tai krooniset sairaudet tai tilat, jotka määritellään jatkuviksi vähintään 3 kuukautta (määriteltynä 90 päivää) ja jotka asettaisivat tutkittavalle kohtuuttoman loukkaantumisriskin, tekisivät potilaan kykenemättömäksi täyttämään protokollan vaatimuksia, tai saattaa häiritä vastausten arviointia tai koehenkilön onnistunutta suorittaa tämä tutkimus.
- Aiheraportti antikoagulanttien tai pitkäaikaisen (yli 14 päivää) systeemisten steroidien tai muiden immunosuppressiivisten lääkkeiden käytöstä.
- Aiheraportti tunnetusta allergiasta lidokaiinille.
- Kohderaportti tunnetusta yliherkkyydestä tai allergiasta kananmunalle, muna- tai kanaproteiinille, raportti allergiasta tutkimusrokotteen aineosille tai muille tutkimusrokotteen aineosille.
- Aiheraportti tunnetusta lateksiallergiasta.
- Kohteen raportti vakavista reaktioista aiemman rokotuksen jälkeen lisensoiduilla tai luvattomilla influenssavirusrokotteilla.
- Aiheraportti Guillain-Barren oireyhtymän historiasta.
- Koehenkilöt, jotka uskovat, että he eivät voi sietää luuydinpyrkimyksiä ilman sedaatiota.
- Koehenkilöt, joilla on aktiivinen infektio tai joilla on akuutti sairaus 72 tunnin sisällä ennen tutkimusrokotusta. Koehenkilöllä on ollut akuutti sairaus, joka on lähes parantunut ja jäljelle jää vain vähäisiä jäännösoireita, jos paikan päätutkijan tai asianmukaisen osatutkijan mielestä jäännösoireet eivät häiritse kykyä arvioida turvallisuusparametreja laitoksen edellyttämällä tavalla. protokollaa.
- Koehenkilöt, jotka osallistuvat toiseen kliiniseen tutkimukseen, jossa käytetään tutkimusaineita tai rokotteita.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
- Ensisijainen käyttötarkoitus: Ennaltaehkäisy
- Jako: Ei käytössä
- Inventiomalli: Yksittäinen ryhmätehtävä
- Naamiointi: Ei mitään (avoin tarra)
Aseet ja interventiot
Osallistujaryhmä / Arm |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kokeellinen: Influenssavirusrokote inaktivoitu
Kaikki tutkimuksen osallistujat saivat lisensoidun inaktivoidun influenssarokotteen intramuskulaarisesti (IM) päivänä 0.
|
Synteettinen rokote, joka koostuu kolmesta inaktivoidusta influenssaviruksesta: kahdesta eri influenssatyypin A kannasta ja yhdestä influenssatyypin B kannasta.
Kolmiarvoinen influenssarokote formuloidaan vuosittain tulevalla influenssakaudella vallitsevien influenssakantojen perusteella.
Kaikki osallistujat saivat rokotteen lihakseen (IM) päivänä 0.
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Influenssaspesifisten vasta-aineita erittävien solujen (ASC) lukumäärä veressä
Aikaikkuna: Päivä 7
|
Kausi-influenssarokotteelle spesifinen veren immunoglobuliini G (IgG) ASC mitattiin entsyymikytketyllä immunosorbenttipisteellä (ELISPOT) käyttäen rokotteella päällystettyjä levyjä.
Influenssaspesifisten ASC-solujen määrä miljoonaa perifeerisen veren mononukleaarisolua kohden on raportoitu.
|
Päivä 7
|
|
Luuytimessä olevien influenssaspesifisten vasta-aineita erittävien solujen (ASC) lukumäärä
Aikaikkuna: Päivä 0
|
Influenssaspesifinen IgG ASC ja kokonais-IgG ASC mitattiin luuydinnäytteistä ELISPOTilla käyttämällä influenssarokotteella tai kokonais-IgG:n sieppausvasta-aineella päällystettyjä levyjä.
Influenssaspesifiset luuytimen IgG ASC -luvut ilmaistaan prosenttiosuutena luuytimen IgG ASC -kokonaisluvusta.
|
Päivä 0
|
|
Luuytimessä olevien influenssaspesifisten vasta-aineita erittävien solujen (ASC) lukumäärä
Aikaikkuna: Päivä 28
|
Influenssaspesifinen IgG ASC ja kokonais-IgG ASC mitattiin luuydinnäytteistä ELISPOTilla käyttämällä influenssarokotteella tai kokonais-IgG:n sieppausvasta-aineella päällystettyjä levyjä.
Influenssaspesifiset luuytimen IgG ASC -luvut ilmaistaan prosenttiosuutena luuytimen IgG ASC -kokonaisluvusta.
|
Päivä 28
|
|
Luuytimessä olevien influenssaspesifisten vasta-aineita erittävien solujen (ASC) lukumäärä
Aikaikkuna: Päivä 365
|
Influenssaspesifinen IgG ASC ja kokonais-IgG ASC mitattiin luuydinnäytteistä ELISPOTilla käyttämällä influenssarokotteella tai kokonais-IgG:n sieppausvasta-aineella päällystettyjä levyjä.
Influenssaspesifiset luuytimen IgG ASC -luvut ilmaistaan prosenttiosuutena luuytimen IgG ASC -kokonaisluvusta.
|
Päivä 365
|
|
Influenssaspesifisten B-muistisolujen määrä veressä
Aikaikkuna: Päivä 0
|
Influenssaspesifiset muisti-B-solut määritettiin ELISPOT:lla perifeerisen veren mononukleaarisolujen polyklonaalisen stimulaation jälkeen ASC:n tuottamiseksi.
Influenssaspesifiset muisti-B-solutiheydet raportoidaan stimuloiduista viljelmistä löydettyjen IgG:tä erittävien solujen prosenttiosuutena.
|
Päivä 0
|
|
Influenssaspesifisten B-muistisolujen määrä veressä
Aikaikkuna: Päivä 28
|
Influenssaspesifiset muisti-B-solut määritettiin ELISPOT:lla perifeerisen veren mononukleaarisolujen polyklonaalisen stimulaation jälkeen ASC:n tuottamiseksi.
Influenssaspesifiset muisti-B-solutiheydet raportoidaan stimuloiduista viljelmistä löydettyjen IgG:tä erittävien solujen prosenttiosuutena.
|
Päivä 28
|
|
Influenssaspesifisten B-muistisolujen määrä veressä
Aikaikkuna: Päivä 365
|
Influenssaspesifiset muisti-B-solut määritettiin ELISPOT:lla perifeerisen veren mononukleaarisolujen polyklonaalisen stimulaation jälkeen ASC:n tuottamiseksi.
Influenssaspesifiset muisti-B-solutiheydet raportoidaan stimuloiduista viljelmistä löydettyjen IgG:tä erittävien solujen prosenttiosuutena.
|
Päivä 365
|
|
Koehenkilöiden lukumäärä, jotka alun perin muuttuivat serokonversioksi ja säilyttivät serokonversion 1 vuoden kuluttua rokotuksesta
Aikaikkuna: Päivä 365
|
Alkuserokonversio määritellään siten, että sillä on ennen rokotusta (päivä 0) hemagglutinaation eston (HAI) tiitteri < 1:40 tiettyä kantaa vastaan ja päivänä 28 rokotuksen jälkeinen tiitteri > / = 1:40 samaa kantaa vastaan TAI ennen rokotusta. rokotuksen HAI-tiitteri >1:40 ja tiitterin nousu vähintään 4-kertaiseksi päivänä 28 verrattuna päivään 0. Serokonversion ylläpito niillä, jotka alun perin muuttuivat serokonversioksi, määritellään HAI-tiitterin ylläpitämiseksi >/= 40 vuoden kuluttua niillä. päivän 0 tiitterit < 40 TAI ylläpitävät >/= 4-kertaista nousua HAI-tiitterissä yhden vuoden kohdalla verrattuna päivään 0. HAI-määritykset suoritettiin käyttämällä 0,75 % marsun punasoluja ja viruskantavaroja, jotka oli sovitettu kunkin luovuttajan saamien rokotteiden kantojen kanssa. |
Päivä 365
|
|
Koehenkilöiden lukumäärä, jotka saavuttivat serokonversion jokaiseen rokotteen kantaan
Aikaikkuna: Päivä 28
|
Serokonversio määritellään siten, että sen hemagglutinaation eston (HAI) tiitteri ennen rokotusta (päivä 0) on < 1:40 tiettyä kantaa vastaan ja päivän 28 rokotuksen jälkeinen tiitteri > / = 1:40 samaa kantaa vastaan TAI rokotusta edeltävä HAI tiitteri > 1:40 ja tiitterin nousu vähintään 4-kertaiseksi päivänä 28.
HAI-määritykset suoritettiin käyttämällä 0,75 % marsun punasoluja ja viruskantavaroja, jotka oli sovitettu kunkin luovuttajan saamien rokotteiden kantojen kanssa.
|
Päivä 28
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Hemagglutiniinivarren reaktiivisten vasteiden esiintymistiheys influenssarokotteeseen verenplasmablastien joukossa
Aikaikkuna: Päivä 7
|
Kausi-influenssarokotteelle spesifinen veren IgG ASC mitattiin ELISPOTilla käyttämällä levyjä, jotka oli päällystetty kimeerisellä hemagglutiniiniantigeenillä, joka sisälsi pandeemisen H1-kantadomeenin fuusioituna H9-influenssaviruksen päädomeeniin.
Kanta-spesifisten ASC:iden lukumäärät miljoonaa perifeerisen veren mononukleaarisolua kohden on raportoitu.
|
Päivä 7
|
|
Hemagglutiniinin kantareaktiivisten vasteiden esiintymistiheys influenssarokotteelle luuytimen plasmasolujen joukossa
Aikaikkuna: Päivä 365
|
Influenssaspesifinen IgG ASC ja kokonais-IgG ASC mitattiin luuydinnäytteistä ELISPOTilla käyttämällä levyjä, jotka oli päällystetty kimeerisellä H9-pää/H1-varren hemagglutiniiniantigeenillä tai kokonais-IgG-sieppausvasta-aineella.
Varsikohtaiset luuytimen IgG ASC -luvut ilmaistaan prosentteina luuytimen IgG ASC -kokonaisluvusta.
|
Päivä 365
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Tutkijat
- Päätutkija: Edmund K Waller, MD, PhD, Emory University
Julkaisuja ja hyödyllisiä linkkejä
Yleiset julkaisut
- Thompson WW, Shay DK, Weintraub E, Brammer L, Cox N, Anderson LJ, Fukuda K. Mortality associated with influenza and respiratory syncytial virus in the United States. JAMA. 2003 Jan 8;289(2):179-86. doi: 10.1001/jama.289.2.179.
- Wrammert J, Smith K, Miller J, Langley WA, Kokko K, Larsen C, Zheng NY, Mays I, Garman L, Helms C, James J, Air GM, Capra JD, Ahmed R, Wilson PC. Rapid cloning of high-affinity human monoclonal antibodies against influenza virus. Nature. 2008 May 29;453(7195):667-71. doi: 10.1038/nature06890. Epub 2008 Apr 30.
- Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Prevention and control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 2013 Sep 20;62(RR-07):1-43. Erratum In: MMWR Recomm Rep. 2013 Nov 15;62(45):906.
- Kunzel W, Glathe H, Engelmann H, Van Hoecke C. Kinetics of humoral antibody response to trivalent inactivated split influenza vaccine in subjects previously vaccinated or vaccinated for the first time. Vaccine. 1996 Aug;14(12):1108-10. doi: 10.1016/0264-410x(96)00061-8.
- Pica N, Palese P. Toward a universal influenza virus vaccine: prospects and challenges. Annu Rev Med. 2013;64:189-202. doi: 10.1146/annurev-med-120611-145115.
- Slifka MK, Antia R, Whitmire JK, Ahmed R. Humoral immunity due to long-lived plasma cells. Immunity. 1998 Mar;8(3):363-72. doi: 10.1016/s1074-7613(00)80541-5.
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Arvioitu)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muita asiaankuuluvia MeSH-ehtoja
Muut tutkimustunnusnumerot
- 14-0059
- HHSN272201400004C
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Yhdysvalloissa valmistettu ja sieltä viety tuote
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .