A vékonybél nyálkahártya alatti váza zsírszövetből származó őssejtekkel kombinálva zsírsejteket tartalmazó hypodermisz

Emberi zsírszöveteket öt egészséges felnőtt nőtől nyertünk, akiken hasi zsírleszíváson estek át. 28 és 45 év közöttiek voltak (átlag: 32,15±4,8 év), és nem volt fertőző vagy endokrin betegsége. Minden emberi mintát használó protokollt jóváhagyott a Nanfang Hospital Institutional Review Board (n. 18502), és a mintákat írásos beleegyezéssel vették. Az emberekből származó 10 milliliter eldobott zsírszövetet alaposan mostuk azonos térfogatú foszfáttal pufferolt sóoldattal (PBS); finom, homogén készítménnyé darálva; és 37 °C-on 30 percig emésztjük 0,125% I. típusú kollagenázzal. Az enzimaktivitást 10% FBS-t tartalmazó Dulbecco módosított Eagle táptalajjal (DMEM) semlegesítettük. Ezután a mintát 200 mm-es nejlonhálón átszűrtük, hogy eltávolítsuk a sejttörmeléket, és 1500 fordulat/perc sebességgel centrifugáljuk 5 percig. A csapadékot 6-10 ml NH4Cl-ben újraszuszpendáltuk, és szobahőmérsékleten 10 percig inkubáltuk a szennyező vörösvértestek lizálására. A vegyületet 1500 fordulat/perc sebességgel centrifugáltuk további 5 percig. Az ASC-ket centrifugálással gyűjtöttük össze a fent leírtak szerint, 2 ml kontrolltápközegben (10% FBS-t és 1% antibiotikumot/antimikotikus oldatot tartalmazó DMEM) újraszuszpendáltuk, és 37 °C-on 5% CO2-t tartalmazó párásított kamrában inkubáltuk 48 órán keresztül. Ezt követően a lemezeket alaposan mostuk PBS-sel, hogy eltávolítsuk a visszamaradó, nem tapadó vörösvértesteket és a törmeléket. A kapott sejtpopulációt ASC-nek nevezték el, és a tenyészeteket 3 napos időközönként tápközeg-cserékkel szaporítottuk. Minden kísérlethez az 1-6. passzázs sejtjeit használtuk.