Dünndarm-Submukosa-Gerüst kombiniert mit aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen, um eine adipozytenhaltige Hypodermis zu bilden

Menschliches Fettgewebe wurde von fünf gesunden erwachsenen Frauen gewonnen, die sich einer Fettabsaugung am Bauch unterzogen hatten. Sie waren 28 bis 45 Jahre alt (Durchschnitt 32,15 ± 4,8). Jahre) und hatte keine infektiösen oder endokrinen Erkrankungen. Alle Protokolle mit menschlichen Proben wurden vom Institutional Review Board des Nanfang Hospital (Nr. 18502) genehmigt und die Proben wurden mit schriftlicher Einverständniserklärung entnommen. Zehn Milliliter entsorgtes Fettgewebe von Menschen wurden ausgiebig mit gleichen Volumina phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen; zu einer feinen, homogenen Zubereitung zerkleinert; und 30 Minuten lang bei 37 °C mit 0,125 % Typ-I-Kollagenase verdaut. Die Enzymaktivität wurde mit Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM), das 10 % FBS enthielt, neutralisiert. Anschließend wurde die Probe durch ein 200-mm-Nylonnetz filtriert, um Zelltrümmer zu entfernen, und 5 Minuten lang bei 1500 Umdrehungen pro Minute (U/min) zentrifugiert. Der Niederschlag wurde in 6–10 ml NH4Cl resuspendiert und 10 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert, um kontaminierende rote Blutkörperchen zu lysieren. Die Verbindung wurde weitere 5 Minuten lang bei 1500 U/min zentrifugiert. Die ASCs wurden durch Zentrifugation wie oben beschrieben gesammelt, in 2 ml Kontrollmedium (DMEM mit 10 % FBS und 1 % Antibiotika-/Antimykotika-Lösung) resuspendiert und 48 Stunden lang bei 37 °C in einer befeuchteten Kammer mit 5 % CO2 inkubiert. Anschließend wurden die Platten gründlich mit PBS gewaschen, um restliche, nicht anhaftende rote Blutkörperchen und Ablagerungen zu entfernen. Die resultierende Zellpopulation wurde als ASCs bezeichnet und die Kulturen wurden durch Medienwechsel in Abständen von 3 Tagen vermehrt. Für alle Experimente wurden Zellen in den Passagen 1 bis 6 verwendet.