Ohutsuolen limakalvon tukirakenne yhdistettynä rasvasta peräisin oleviin kantasoluihin rasvasoluja sisältävän hypodermiksen muodostamiseksi

Ihmisen rasvakudokset saatiin viideltä terveeltä aikuiselta naiselta, joille tehtiin vatsan rasvaimu. He olivat iältään 28-45 vuotta (keskiarvo 32,15±4,8 vuotta) eikä heillä ollut tartunta- tai hormonaalisia sairauksia. Kaikki ihmisnäytteitä käyttävät protokollat ​​hyväksyttiin Nanfang Hospitalin (nro 18502) Institutional Review Boardin toimesta, ja näytteet hankittiin kirjallisella tietoisella suostumuksella. Kymmenen millilitraa ihmisistä poistettua rasvakudosta pestiin perusteellisesti yhtä suurella tilavuudella fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS); jauhetaan hienoksi, homogeeniseksi valmisteeksi; ja pilkottiin 37 °C:ssa 30 minuuttia 0,125 % tyypin I kollagenaasilla. Entsyymiaktiivisuus neutraloitiin Dulbeccon modifioidulla Eaglen alustalla (DMEM), joka sisälsi 10 % FBS:ää. Sitten näyte suodatettiin 200 mm:n nailonverkon läpi solujätteen poistamiseksi ja sentrifugoitiin 1500 kierrosta minuutissa (rpm) 5 minuuttia. Sakka suspendoitiin uudelleen 6-10 ml:aan NH4CI:a ja inkuboitiin huoneenlämpötilassa 10 minuuttia kontaminoivien punasolujen hajottamiseksi. Yhdistettä sentrifugoitiin nopeudella 1500 rpm vielä 5 minuuttia. ASC:t kerättiin sentrifugoimalla edellä kuvatulla tavalla, suspendoitiin uudelleen 2 ml:aan kontrollielatusainetta (DMEM, joka sisälsi 10 % FBS:ää ja 1 % antibiootti/antimykoottiliuosta) ja inkuboitiin 37 °C:ssa kostutetussa kammiossa, joka sisälsi 5 % C02:ta 48 tuntia. Seuraavaksi levyt pestiin perusteellisesti PBS:llä jäljellä olevien ei-tarttuneiden punasolujen ja roskien poistamiseksi. Tuloksena olevaa solupopulaatiota kutsuttiin ASC:iksi, ja viljelmiä laajennettiin vaihtamalla väliainetta 3 päivän välein. Soluja siirrostuksessa 1 - 6 käytettiin kaikissa kokeissa.