Tynntarms submucosa stillas kombinert med fettavledede stamceller for å danne en fettocyttholdig hypodermis

Humant fettvev ble hentet fra fem friske voksne kvinner som gjennomgikk abdominal fettsuging. De var i alderen 28 til 45 år (gjennomsnittlig 32,15±4,8 år) og hadde ingen smittsomme eller endokrine sykdommer. Alle protokoller som bruker prøver fra mennesker ble godkjent av Institutional Review Board of Nanfang Hospital (nr. 18502), og prøver ble innhentet med skriftlig informert samtykke. Ti milliliter kassert fettvev fra mennesker ble vasket grundig med like volumer fosfatbufret saltvann (PBS); hakket til et fint, homogent preparat; og fordøyd ved 37°C i 30 minutter med 0,125 % type I kollagenase. Enzymaktivitet ble nøytralisert med Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) inneholdende 10% FBS. Deretter ble prøven filtrert gjennom et 200 mm nylonnett for å fjerne cellulært rusk og ble sentrifugert ved 1500 omdreininger per minutt (rpm) i 5 minutter. Bunnfallet ble resuspendert i 6~10 ml NH4Cl og inkubert ved romtemperatur i 10 minutter for å lysere forurensende røde blodceller. Forbindelsen ble sentrifugert ved 1500 rpm i ytterligere 5 minutter. ASC-ene ble samlet opp via sentrifugering som beskrevet ovenfor, resuspendert i 2 ml kontrollmedium (DMEM inneholdende 10% FBS og 1% antibiotika/antimykotisk løsning) og inkubert ved 37°C i et fuktet kammer inneholdende 5% CO2 i 48 timer. Deretter ble platene vasket grundig med PBS for å fjerne gjenværende ikke-vedhengende røde blodlegemer og rusk. Den resulterende cellepopulasjonen ble kalt ASC-er, og kulturene ble utvidet med medieendringer med 3-dagers intervaller. Celler ved passasje 1 til 6 ble brukt for alle eksperimenter.