A méh és a köldökartériák Doppler és a placenta patológiája összefüggése az IUGR-ben

Ha jelezték, az IUGR konzervatív kezelési tervet egy meghatározott protokoll szerint végezték el, beleértve a születés előtti viziteket és az ultrahangos megfigyelést. A magzati megfigyelés gyakoriságát minden egyes látogatás alkalmával az anya és a magzat állapotának megfelelően értékelték.

Doppler vizsgálatokat végeztek a szülés előtti utolsó héten 3,5 MHz-es jelátalakítóval, szín-áramlási leképezéssel és 50 Hz-es felüláteresztő szűrővel; az összes mérést az anyák félig fekvő helyzetben végezték. Color-flow képalkotást használtunk a méh artériák felszálló ágának megjelenítésére. Impulzusos Doppler sebességmérést végeztünk 5 mm-es mintatérfogattal.

Minden vizsgálatról legalább három különálló felvétel készült. A méh artériák hullámkontúrját vizsgáltuk egy diasztolés bevágás jelenlétére, amelyből a szisztolés/végdiasztolés (S/D) arányt számítottuk. A kóros uterus velocimetriát a (bal és jobb) S/D arány átlagaként és a diasztolés bevágás kétoldali jelenléteként határoztuk meg. A köldökartéria hullámformáját a magzati nyugalom alatt a kötél szabadon lebegő hurokból mértük. Kiszámoltuk a pulzitási indexet (PI) (maximális sebesség - minimális sebesség/középsebesség), és három mérés átlagát használtuk. A kóros köldökartéria PI-t a terhességi koron alapuló referencia standardok átlaga feletti szórásként határozták meg (Chitty és Altman, 1999).

A köldökartéria (UA) Doppler-sebességmérési eredményeit normál kategóriába sorolták (végdiasztolés sebesség < a referenciagörbénk 90. ​​százaléka), megnövekedett (végdiasztolés sebesség ≥90. percentilis), hiányzó és fordított (Madazil R et al., 2002) Az anyai vagy magzati állapotok rosszabbodása esetén (pl. hiányzik vagy megfordult az UA véráramlása és súlyos preeclampsia). A preeclampsiát standard kritériumok szerint határozták meg (Arduini D et al, 2002).

Szövetminták A méhlepények általános alakját értékeltük. Az összegyűjtött placentákat a membránok és a köldökzsinór levágásával lemértük. Ezután feljegyeztük a méhlepény átmérőjét és vastagságát. Megfigyelték a köldökzsinór behelyezésének helyzetét a placenta magzati felszínén. Az anya felszínén 1-2 cm-es távolságban keresztirányú metszeteket végeztünk, cipószerűen, és megvizsgáltuk a sápadt területeket. Minden méhlepényt 10%-os formalinba merítettünk egy éjszakára, és másnap megvizsgáltuk. Minden méhlepényhez zsinórt, membránt és teljes vastagságú bolyhos szövetet tartalmazó blokkokat készítettünk. Teljes vastagságú boholyos szövetblokkokat kaptunk három zónából, i) központi zónából ii) perifériás zónából és iii) az első két zóna közötti közbenső zónából, hogy a placenta összes területét magába foglalja.

A méhlepény-biopsziát császármetszéssel vettük a placenta helyének közvetlen vizualizálásával. Legalább 1 cm-es biopsziát vettünk. A mintákat pufferolt formalinban rögzítettük. A szöveteket feldolgoztuk és haematoxlyinnel és eozinnal festettük. A méhlepény mikroszkópos vizsgálatát a boholyos és interbolusos elváltozások standard kritériumainak felhasználásával végezték (Kotigwar S et al 2011). E kritériumok tanulmányozásához 8 véletlenszerű mikroszkópos mezőt választottunk, és minden mezőben megszámoltunk 100 bolyhot, és megvizsgáltuk a következő kritériumok jelenlétét:

1. Szincitiális csomók >30% egy mezőben
2. Fibrinoid nekrózis >5% egy mezőben
3. Placenta infarktus >5% egy mezőben Villásközi tér

a) Chorangiosis b) Perivillus fibrinoid lerakódás >5% egy mezőben c) Infarctusok d) Meszesedés jelenléte. e) Megvastagodott hylinizált erek Statisztikai célból az ilyen változásokat "kóros placenta"-ként jelölik.

Immunhisztokémia A VEGF és CD34 expresszióját 75 (50 IUGR placenta és 25 kontroll) placentabolyhos szövetben elemeztük. Az egyes méhlepények anyai felületéről vett minták (1,5 × 1,5 × 1 cm átmérőjű); infarktusos területeket kizártak a vizsgálatból. Minden szövetet formalinban fixáltunk, paraffinba ágyaztunk, és 5 μm vastag metszetekre vágtuk, amelyeket poli-L-lizinnel bevont tárgylemezekre gyűjtöttünk. A paraffin eltávolítása után a metszeteket rehidratáltuk.

Az immunfestést streptavidin-biotin-peroxidáz módszerrel végeztük. Az endogén peroxidáz aktivitást 3%-os hidrogén-peroxiddal blokkoltuk. Az antigén-kinyerést mikrohullámú sütőben 15 percig végeztük 10 nM citrát pufferben (pH 6,0) a VEGF-hez. A metszeteket szobahőmérsékleten egy órán át inkubáltuk EP1176Y nyúl poliklonális antitestekkel, amelyek VEGF-fel reaktívak (1:100; Genova, Spanyolország), CD34 egér monoklonális antitestekkel, Ventana. EGYESÜLT ÁLLAMOK). Foszfáttal pufferolt sóoldatban Tween-20-zal történő mosás után a szöveteket biotinnal konjugált másodlagos antitesttel, majd biotin-sztreptavidin komplexszel inkubáltuk 30 percig szobahőmérsékleten. A reakciókat 3,3-diaminobenzidin-tetrahidrokloriddal (DAB) tettük láthatóvá. A metszeteket hematoxilinnal ellenfestettük, leöblítettük és felhelyeztük.

Az immunhisztokémiai festődés értékelése

A CD34 immunhisztokémiai festődésének értékelése:

Mikroerek sűrűségének meghatározása

A szövetekben az angiogén aktivitás vizsgálatának legnépszerűbb módszere a mikroerek számának megszámlálása a szövetmetszet egységnyi területére vonatkoztatva, amelyet mikroérsűrűségnek (MVD) neveznek. (Hasan J et al, 2002) Az MVD, a festett placenta érrendszer meghatározása. A szövetmetszeteket kezdetben mikroszkóposan, kis teljesítményen (100×) szűrtük, hogy azonosítsuk a legmagasabb érrendszerű területeket ("forró pontok"). Ezután véletlenszerűen öt nagy teljesítményű (400×) mezőt választottunk ki, és szemrács segítségével minden egyes nagy teljesítményű mezőben (0,09 mm2) megszámoltuk a mikroerek számát. Az egyes minták MVD-jét a kapott öt érték átlagának vettük. (Mustafa G et al, 2012)

A VEGF immunhisztokémiai festődésének értékelése:

A festődési reakció intenzitását és lokalizációját chorionbolyhos stromasejtekben, vaszkuláris simaizomsejtekben, bolyhos vaszkuláris endotélsejtekben, citotrofoblasztokban, syncytiotrophoblastokban és extravillous trofoblasztokban értékelték. Az antitestekkel szembeni immunreaktivitást a festődés intenzitásának szemikvantitatív skálájával értékeltük: 0 negatív, nincs festődés; 1+ gyenge pozitív; 2+ közepesen pozitív; 3+ erősen pozitív. (Barut F et al, 2010)