Embriófejlődési potenciál egy újszerű, kétlépcsős IVM rendszerben (CAPA-IVM-Sib)
A petesejtek kétfázisú in vitro petesejt-érése (IVM) után nyert embriók fejlődési potenciáljának vizsgálata, beleértve az előérési tenyésztési lépést ("kapacitációs lépés") a standard IVM-hez képest.
Az in vitro érés érvényes lehetőség a PCO(S) betegek számára a napi ART klinikán, azonban az érés és az embriológiai fejlődés még nem felel meg a standard COS kezeléssel elért hatékonysági szinteknek. Az IVM után az embrió minőségének további javítása érdekében azt feltételezték, hogy a petesejtek és a kumuluszsejtek közötti kapcsolat és kommunikáció érintetlen marad egy hosszan tartó érlelés előtti tenyészetben, mielőtt az IVM-et elindítanák. Ezt egy meiotikus blokkoló C-típusú Natriuretic peptid (CNP) segítségével vizsgálták és állapították meg.
A CNP peptid nagy koncentrációban van jelen a növekvő tüszőben, a fali granulosa sejtkompartment termeli, és kötődik a kumuluszsejtekben jelenlévő Natriuretic peptid receptor 2-hez (NRP2). A CNP kötődése az NRP2-hez intracelluláris cGMP növekedéshez vezet a cumulus sejtekben, ami a transzonális projekciókon keresztül eljut a petesejtekbe. A petesejtekben a cGMP blokkolja a meiózis újraindulását.
A CNP-t a meiózis természetes gátlójaként használva egy új táptalajt terveztek, amely lehetővé teszi a petesejtek és a környező cumulussejtek közötti kommunikációt, és ezáltal a kompetencia megszerzését egy további tenyésztési időszakra: az érlelés előtti fázisra vagy a kapacitációs fázisra (CAPA). Ezt a rendszert egérben fejlesztették ki, emberen tesztelték Brüsszelben UZ-ban kutatási anyagokon (toelating federaal EC: CFE-FCE ADV_073_ZUBrussel, toelating lokaal EC: 2016/411 BUN 143201630723), és klinikai környezetben használták Vietnamban.
A tanulmány áttekintése
Részletes leírás
A klinikán jelenleg használatos IVM rendszer egylépéses megközelítésű, és kevésbé hatékonynak tűnik a kétfázisú CAPA-IVM rendszert használó kutatási és irodalmi eredményekhez képest az érés szempontjából.
A kétfázisú CAPA-IVM rendszer hatékonyságának megállapítására standard IVM-et és CAPA-IVM-et is végeznek testvérpetesejteken: a standard IVM-ben a vizsgáló központjában az érettség átlagosan 47,5%, ahol a CAPA-IVM eléri a 62%-os érést az irodalomban. .
A kutatók célja, hogy bebizonyítsák a CAPA-IVM rendszer felsőbbrendűségét az érés szempontjából. A megtermékenyítést és az embriófejlődést is összehasonlítják.
A vizsgálatba felvett résztvevők a résztvevő oocitáinak egy részére a standard IVM kezelést, míg a résztvevő petesejtek második részére a kétfázisú CAPA IVM rendszert kapják.
Az egyik petefészekben a normál petesejtek felvétele (OPU) történik a standard IVM kezeléshez rendelt petesejtekkel, a másik petefészekben pedig a CAPA IVM rendszert alkalmazzák. Ez azt jelenti, hogy a tüszőkörnyezetből felszabaduló petesejteket azonnal ki kell tenni a gátló CNP peptid hatásának, ezért a szúrt tüszőkből a tüszőfolyadékot összegyűjtő csöveket előre meg kell tölteni CNP-vel kiegészített tápközeggel. Az OPU eljárás mindkét petefészek esetében megegyezik, és a szabványos OPU IVM eljárásunknak megfelelően, azzal az egyetlen különbséggel, hogy a tüszőfolyadék gyűjtésére szolgáló üres vagy előretöltött csövek.
A 2 petefészekből származó petesejteket külön-külön dolgozzák fel a laboratóriumban a hozzárendelt protokoll szerint.
A petesejtek IVM után az érett petesejteket ICSI-nek vetik alá partner spermájával vagy donor spermájával. A partner spermamintáját legkésőbb a petefelvétel napján lefagyasztják, és az intracitoplazmatikus spermiuminjekció (ICSI) napján kiolvasztják: 2 különböző IVM protokoll használatának köszönhetően, 2 különböző idővonallal (30 órás érlelés versus 24 óra+). 30 órás érlelés), az ICSI-re két egymást követő napon kerül sor, minden nap frissen felolvasztott spermiumszalmával.
Az embrió fejlődését az ICSI utáni 3. napig (hasítási szakasz) követjük. Minden megfelelő minőségű embriót üvegesítenek egy hormonpótló terápiás (HRT) ciklusban a késleltetett embriótranszferhez. A morfológiai minőségértékelési paraméterek alapján egy embriót választanak ki az embriótranszferre, a jobb minőségűt pedig elsőként választják át, függetlenül az előző IVM módszertől. A fagyasztott embriótranszfer ciklusokat a terhességig ismételjük.
Tanulmány típusa
Beiratkozás (Tényleges)
Fázis
- Nem alkalmazható
Kapcsolatok és helyek
Tanulmányi helyek
-
-
-
Brussels, Belgium, 1090
- UZ Brussel
-
-
Részvételi kritériumok
Jogosultsági kritériumok
Tanulmányozható életkorok
Egészséges önkénteseket fogad
Leírás
Bevételi kritériumok:
- PCO(S) betegek
- Anti-Muller-hormon ≥ 3,6 ng/ml
- A bazális antralis tüszőszám ≥ 20
- A tárgyalás minden fokozata
Kizárási kritériumok:
- Sebészeti úton vett spermaminta
- 3. vagy 4. fokozatú endometriózis, kisebb-nagyobb méhrendellenességek
- Beültetés előtti genetikai vizsgálat
- Alapozás Letrozollal
Tanulási terv
Hogyan készül a tanulmány?
Tervezési részletek
- Elsődleges cél: Kezelés
- Kiosztás: Véletlenszerűsített
- Beavatkozó modell: Párhuzamos hozzárendelés
- Maszkolás: Egyetlen
Fegyverek és beavatkozások
Résztvevő csoport / kar |
Beavatkozás / kezelés |
|---|---|
|
Kísérleti: CAPA IVM
A CAPA IVM egy 2 lépésből álló in vitro érési rendszer, amelyben egy további tenyésztési lépés, amelyben a petesejteket meiotikus leállásban tartják a C-típusú Natriuretic peptid (CNP) jelenlétében 22-24 órán keresztül, megelőzi az in vitro érést. vitro érési lépés, amelyben az érési tápközeget amfiregulinnel (AREG) egészítik ki.
A Medicult-Origio „IVM rendszerét” használják alapközegként.
|
A CAPA tápközeg 22-24 órán át meiotikus leállásban tartja a petesejteket. Az IVM táptalaj lehetővé teszi a petesejtek meiózisának újrakezdését. CAPA táptalaj: 10% humán szérum albumin (HSA) + 10 nM ösztradiol (E2) + 25 nM CNP + 5 ng/ml inzulin + 1 mIU/ml tüszőstimuláló hormon (FSH) IVM táptalaj: 10% HSA + 10 nM E2 + 5 ng/ml inzulin + 101 mIU/ml FSH + 100 ng/ml AREG CNP: a tüszőkben természetesen előforduló peptid a meiotikus leállás fenntartásához, E2: ösztrogén, fokozza a CNP hatását, Inzulin: sejttenyészetekben használt alapvető növekedési faktor és a standard IVM kereskedelmi forgalomban kapható LAG tápközeg összetevője rendszer, AREG: az LHCG receptor downstream effektora, amely segíti a meiotikus újrakezdést. A HSA, az FSH és a hCG CE-jelölésűek. A CAPA IVM médium jelenleg még nem kapható kereskedelmi forgalomban kapható CE-jelöléssel ellátott médiumként, és házon belül kell elkészíteni. |
|
Nincs beavatkozás: Szabványos IVM
Az IVM-et egylépéses protokollként hajtják végre, amelyben az oocitákat azonnal in vitro érlelő tápközegnek tesszük ki 30 órán keresztül.
Ez a jelenlegi standard eljárás a klinikai gyakorlatban, a Medicult-Origio kereskedelmi forgalomban kapható „IVM rendszerével”.
Standard IVM táptalaj: 10% HSA + 75 mIU/ml FSH + 100 mIU/ml hCG
|
Mit mér a tanulmány?
Elsődleges eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
petesejtek érése
Időkeret: A petesejtek érését a standard IVM protokoll szerint 30 óra elteltével és a CAPA IVM után 54 óra elteltével értékeljük
|
a petesejt azon képessége, hogy kinyomja az első poláris testet
|
A petesejtek érését a standard IVM protokoll szerint 30 óra elteltével és a CAPA IVM után 54 óra elteltével értékeljük
|
Másodlagos eredményintézkedések
Eredménymérő |
Intézkedés leírása |
Időkeret |
|---|---|---|
|
kihasználtság
Időkeret: A felhasználási arány az ICSI után 3 nappal kerül megállapításra
|
megfelelő minőségű embriók ahhoz, hogy üvegesítsék a késleltetett embriótranszferhez
|
A felhasználási arány az ICSI után 3 nappal kerül megállapításra
|
|
Megtermékenyítési arány
Időkeret: 2 pronukleusz jelenlétét az ICSI után 18-20 órával értékeljük
|
az oocita azon képessége, hogy aktiválódjon és pronukleuszokat képezzen
|
2 pronukleusz jelenlétét az ICSI után 18-20 órával értékeljük
|
|
az embrió minőségét leíró morfológiai paraméterek megtermékenyített petesejtenként
Időkeret: Az embriófejlődés értékelését az ICSI után 3 nappal végezzük
|
az embriófejlődési potenciál a morfológiai jellemzők alapján becsülve: a 6 vagy több sejtet tartalmazó, 20%-nál kisebb fragmentációjú, az osztódási mintázat szerinti sejtméret és a többmagvú blasztomerek hiánya jó minőségű embriónak minősül.
Másodlagos paraméterként a vakuolák vagy granulátum jelenléte a blastomerek többségében kizárja az embriót a „jó minőségű” csoportból, függetlenül a korábban említett paraméterektől.
|
Az embriófejlődés értékelését az ICSI után 3 nappal végezzük
|
|
embrió kriotolerancia
Időkeret: Az első felmelegítés az OPU után egy hónapon belül megtörténik egy új HRT ciklusban, és a terhességig megismételhető, legfeljebb 1 évig a petefelvételt követően.
|
a vitrifikációs és felmelegedési folyamat által az embrión belüli sejtek túlélésére és az üvegesített/felmelegített embrió azon képességére, hogy újrakezdje a hasadást
|
Az első felmelegítés az OPU után egy hónapon belül megtörténik egy új HRT ciklusban, és a terhességig megismételhető, legfeljebb 1 évig a petefelvételt követően.
|
Együttműködők és nyomozók
Szponzor
Nyomozók
- Kutatásvezető: Michel De Vos, MD, PhD, VUB- UZ Brussel
Publikációk és hasznos linkek
Általános kiadványok
- Sanchez F, Le AH, Ho VNA, Romero S, Van Ranst H, De Vos M, Gilchrist RB, Ho TM, Vuong LN, Smitz J. Biphasic in vitro maturation (CAPA-IVM) specifically improves the developmental capacity of oocytes from small antral follicles. J Assist Reprod Genet. 2019 Oct;36(10):2135-2144. doi: 10.1007/s10815-019-01551-5. Epub 2019 Aug 9.
- Vuong LN, Le AH, Ho VNA, Pham TD, Sanchez F, Romero S, De Vos M, Ho TM, Gilchrist RB, Smitz J. Live births after oocyte in vitro maturation with a prematuration step in women with polycystic ovary syndrome. J Assist Reprod Genet. 2020 Feb;37(2):347-357. doi: 10.1007/s10815-019-01677-6. Epub 2020 Jan 4.
- Saenz-de-Juano MD, Ivanova E, Romero S, Lolicato F, Sanchez F, Van Ranst H, Krueger F, Segonds-Pichon A, De Vos M, Andrews S, Smitz J, Kelsey G, Anckaert E. DNA methylation and mRNA expression of imprinted genes in blastocysts derived from an improved in vitro maturation method for oocytes from small antral follicles in polycystic ovary syndrome patients. Hum Reprod. 2019 Sep 29;34(9):1640-1649. doi: 10.1093/humrep/dez121.
- Romero S, Sanchez F, Lolicato F, Van Ranst H, Smitz J. Immature Oocytes from Unprimed Juvenile Mice Become a Valuable Source for Embryo Production When Using C-Type Natriuretic Peptide as Essential Component of Culture Medium. Biol Reprod. 2016 Sep;95(3):64. doi: 10.1095/biolreprod.116.139808. Epub 2016 Aug 3.
- Sanchez F, Lolicato F, Romero S, De Vos M, Van Ranst H, Verheyen G, Anckaert E, Smitz JEJ. An improved IVM method for cumulus-oocyte complexes from small follicles in polycystic ovary syndrome patients enhances oocyte competence and embryo yield. Hum Reprod. 2017 Oct 1;32(10):2056-2068. doi: 10.1093/humrep/dex262.
Tanulmányi rekorddátumok
Tanulmány főbb dátumok
Tanulmány kezdete (Tényleges)
Elsődleges befejezés (Tényleges)
A tanulmány befejezése (Tényleges)
Tanulmányi regisztráció dátumai
Először benyújtva
Először nyújtották be, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Első közzététel (Tényleges)
Tanulmányi rekordok frissítései
Utolsó frissítés közzétéve (Becsült)
Az utolsó frissítés elküldve, amely megfelel a minőségbiztosítási kritériumoknak
Utolsó ellenőrzés
Több információ
A tanulmányhoz kapcsolódó kifejezések
Egyéb vizsgálati azonosító számok
- 2020-CAPA-IVM-Sibling
Terv az egyéni résztvevői adatokhoz (IPD)
Tervezi megosztani az egyéni résztvevői adatokat (IPD)?
Gyógyszer- és eszközinformációk, tanulmányi dokumentumok
Egy amerikai FDA által szabályozott gyógyszerkészítményt tanulmányoz
Egy amerikai FDA által szabályozott eszközterméket tanulmányoz
az Egyesült Államokban gyártott és onnan exportált termék
Ezt az információt közvetlenül a clinicaltrials.gov webhelyről szereztük be, változtatás nélkül. Ha bármilyen kérése van vizsgálati adatainak módosítására, eltávolítására vagy frissítésére, kérjük, írjon a következő címre: register@clinicaltrials.gov. Amint a változás bevezetésre kerül a clinicaltrials.gov oldalon, ez a webhelyünkön is automatikusan frissül. .