COVAG – Covid-19 antigénvizsgálat – a SARS-CoV-2 gyorsdetektáló tesztek diagnosztikai hatékonysága (COVAG)

1. Háttér:

   A 2019-es koronavírus-betegség (COVID-19) 2019 decembere óta gyorsan világszerte elterjedt Vuhanból (Kína). A megbízható diagnosztikai technológiák kulcsfontosságúak a COVID-19 elleni küzdelemben. Míg a valós idejű reverz transzkriptáz-polimeráz láncreakció (rRT-PCR) alapú légúti minták tesztelése továbbra is a COVID-19 diagnosztika aranystandardja, az elmúlt hónapokban számos kereskedelmi teszt jelent meg a (SARS-CoV-2) elleni antitestek kimutatására. Stocking et al., 2020).

   A vírusfehérjék (antigének) jelenlétének vagy hiányának mérése, az antigéntesztek sokkal gyorsabban adhatnak eredményt az aktív SARS-CoV-2 fertőzés diagnosztizálására, mint az RT-PCR vagy azzal egyenértékű tesztek. Azzal érveltek, hogy az antigéntesztek alacsonyabb érzékenységűek lehetnek, mint az RT-PCR vagy azzal egyenértékű RNS-alapú tesztek, és ennek eredményeként sokkal nagyobb valószínűséggel adnak hamis negatív eredményeket azoknál az egyéneknél, akiknél alacsonyabb a vírus mennyisége. Ez esetleg megbízhatatlanná teheti azokat a betegség tünetmentes lefolyású egyéneknél, a fertőzés első napjaiban, illetve a tünetek megjelenését követő 5-7 napon belül (SYNLAB sajtóközlemény, 2020.09.22).

2. Célkitűzés:

   Ennek a nem intervenciós vizsgálatnak a célja annak bizonyítása, hogy a SARS-CoV-2 gyors antigéntesztjei (Abbott és Roche) gyors eredményeket adnak, és ugyanolyan jól teljesítenek, mint az RT-PCR, legalábbis magas vírusterhelésű, tüneti betegeknél.

3. Dizájnt tanulni:

   A vizsgálatot a stuttgarti Cannstatter Wasen Corona Test Centerben végzik, amelyet Dr. med. Hans-Jörg Wertenauer, Stuttgart, szoros együttműködésben a SYNLAB MVZ Leinfelden-Echterdingen GmbH-val. Körülbelül 2000 beteg kerül felvételre az informed Consent Form (ICF) aláírása után. A tervezett nyolc hetes vizsgálati időtartam után a vizsgálók képesek lesznek a szükséges 2000 minta összegyűjtésére (50 beteg naponta).

   Egy tanulmányi látogatást terveznek adat- és vérvétel (15,5 ml), antigéntesztek, RT-PCR, szerológiai vizsgálatok, a résztvevőkkel közölt alapvető laboratóriumi vizsgálatok és kiegészítő vérvizsgálatok (amelyek a COVID-19-hez köthetőek, pl. gyulladásjelző markerek, valamint mikrotápanyagok és vitaminok). Ezeket a SYNLAB MVZ Leinfelden GmbH-ban adják elő. Az összegyűjtött anyagok alikvot részeit -20 fokos hőmérsékleten tárolják kontrollmérésekhez és kiegészítő vizsgálatokhoz, legfeljebb egy évig, miután az utolsó beteget bevonták a vizsgálatba.

4. Indoklás:

   Az elmúlt hetekben sok vita folyt a SARS-CoV-2 antigén gyorstesztjeiről. Ezeknek a teszteknek a legújabb generációja, amely számos különböző beszállítótól elérhető, várhatóan jól teljesít a magas vírusterhelésű betegeknél. Ez általában körülbelül 3-10 nappal a vírusfertőzés után következik be, amikor a személy fertőző, és tünetmentes lehet, vagy a tünetek első napjaiban.

   Ezért azt reméljük, hogy a gyors antigéntesztek támogathatják a COVID-19 diagnosztizálását azoknál az embereknél, akiknél az első tünetek jelentkeznek. Az USA-ban egyes vizsgálatok engedélyt kaptak diagnosztikai vizsgálatok elvégzésére tüneti egyéneken, a tünetek megjelenésétől számított 5-7 napon belül (3).

5. Kockázatok és előnyök:

   Minden résztvevőtől három nasopharyngeális tampont és egy vérmintát vesznek. Ebben a vizsgálatban antigénteszteket, RT-PCR-t, valamint szerológiai és kiegészítő laboratóriumi vizsgálatokat végeznek.

   A nasopharyngealis tamponok kockázatai: A legnagyobb kockázat a kellemetlen érzés. Ritkán – ezrekből 1 – a tampont kapó személy elájul a rendkívül érzékenységtől, vagy enyhe orrvérzést kap.

   A vérvétel kockázatai: A vénapunkció kockázatai közé tartozik, hogy a leggyakoribb reakció. Jelentős szövődmények (cellulitisz, phlebitis, diaphoresis, hypotonia, ájulás közeli állapot, ájulás) figyelhetők meg kisebb zúzódások a vérvétel helyén és hematóma (körülbelül 12%), a betegek körülbelül 3,5%-ánál kisebb zúzódások. A leggyakoribb szignifikáns szövődmény a hipotenzió, amely körülbelül 2,6%-os gyakorisággal fordult elő. Syncope a betegek kevesebb mint 1%-ánál észlelhető. Más súlyos helyi reakciók, például cellulitisz vagy flebitis nagyon ritkák (Galena HJ, J. Fam. Gyakorlat. 1992 május;34(5):582-4). Ezért a vérmintavétel minden vizsgálati helyen egy testületi engedéllyel rendelkező orvos felügyelete mellett történik.

   Közegészségügyi előnyök: A gondozási ponton végzett antigénteszt a jelenlegi nemzeti tesztelési stratégia szerves része, amely a COVID 19 terjedésének megelőzését szolgálja https://www.bundesgesundheitsministerium.de/fileadmin/Dateien/3_Downloads/C/C oronavirus/Nationale_Teststrategie_kurz_041220.pdf Jelentős bizonytalanság övezi azonban az antigénteszt megbízhatóságát a tesztelés arany standardjához, az rt-PCR-hez képest. A szerzők tudomása szerint a gyakorlati körülmények között végzett antigéntesztek prospektív, kellő méretű és megkérdőjelezhető értékelése ez idáig nem készült el. A jelenlegi tanulmány ezt a szakadékot hivatott megszüntetni. Eredményei sürgősen szükségesek, és azonnali hatással lesznek az antigéntesztek alkalmazására vonatkozó jelenlegi ajánlásokra. Különösen bemutatja az antigénvizsgálat gyengeségeit és erősségeit, és lehetővé teszi, hogy felülmúlja az antigéntesztelés lehetséges technikai korlátait az rt-PCR-hez képest a teszteredmények rövid távú elérhetőségének előnyével szemben.

   Ezenkívül a klinikai egészségi állapot alapos rögzítése és a jelen tanulmányban elvégzett alapvető laboratóriumi elemzések további betekintést nyerhetnek a COVID 19-re való fogékonyság klinikai előrejelzőibe.

   Előnyök az egyén számára. A résztvevők kétféleképpen profitálhatnak. Az rt-PCR kivételével azonnal és a helyszínen megkapják az antigénteszt eredményeit. Ezen túlmenően, ha egyidejűleg két antigéntesztet kínálunk, a helyszíni vizsgálat eredménye még megbízhatóbb lesz, mint egyetlen teszt eredménye. Továbbá a résztvevők ingyenes alapszintű laboratóriumi állapotfelmérést kapnak, amely a következő használható egészségügyi markereket tartalmazza: alapvető vérsejtszám, C-reaktív fehérje, HbA1c, koleszterin, trigliceridek, LDL-koleszterin, HDL-koleszterin, gamma-glutamil-transzferáz, kreatinin képletből származó kreatininnel, D-vitaminnal együtt.

   A kutatók arra a következtetésre jutottak, hogy ennek a tanulmánynak az életveszélyesekkel szembesülő egészségügyi rendszer és az egyes vizsgálati résztvevők számára nyújtott előnyei egyértelműen meghaladják a kisebb és kezelhető kockázatokat.

6. Népesség:

A vizsgálók között körülbelül 2000, a stuttgarti Cannstadter Wasen Corona Test Centerben részt vevő, 18 év feletti férfi és női beteg vesz részt, akiknél a SARS-CoV-2 RT-PCR vizsgálata orvosilag indokolt vagy kért.

6.1 Felvételi feltételek:

A vizsgálatba bevonható alanyoknak meg kell felelniük a következő kritériumoknak:

1. A vizsgálatban való részvétel előtt aláírt, tájékozott beleegyezést kell szerezni. A páciensnek képesnek kell lennie arra, hogy megértse a vizsgálat természetét, jelentőségét és következményeit.
2. 18 éves vagy idősebb

6.2 Kizárási kritériumok:

1. A tájékozott beleegyezés hiánya
2. Képtelenség megérteni a tárgyalás természetét, jelentőségét és következményeit.
3. Súlyos klinikai állapotok, amelyek sürgős kórházi kezelést igényelnek
4. Gyermekek és 18 év alatti serdülők

7. Tájékozott beleegyezési eljárások A jogosult alanyok csak az IRB/IEC által jóváhagyott tájékozott beleegyezés megadása után vonhatók be a vizsgálatba. Bármilyen vizsgálatspecifikus eljárás végrehajtása előtt tájékozott beleegyezést kell szerezni (2. függelék).

8. Értékelés ütemezése és értékelések:

Tájékozott beleegyező nyilatkozat, demográfiai adatok gyűjtése és X vonatkozó kórtörténet SARS-CoV-2 gyors antigénteszt (Roche), PANBIO Covid-19 Ag gyorsteszt (Abbott), RT-PCR szerológiai teszt (vérminta, 15,5 ml) Kiegészítő vizsgálatok 8.1 Demográfiai adatok, kórelőzmény, mintavétel: A betegek demográfiai adatai és egyéb jellemző adatok, amelyeket minden betegről össze kell gyűjteni, beleértve a nemet, életkort, testsúlyt, magasságot, releváns kórelőzményt, a COVID-19-re jellemző életjeleket és tüneteket, beleértve a pontos idő specifikációit is. a tünetek megjelenése.

A gyógyszeres kezelésről nem gyűjtenek információkat. Három független nasopharyngeális tampont kell venni a szokásos eljárások szerint. A nasopharyngeális tamponok felvételének sorrendje miatti torzítás elkerülése érdekében a vizsgálók véletlenszerűen beosztják a betegeket három mintavételi csoportba. 1. csoport: RT-PCR - Antigén teszt Roche - Antigén teszt Abbott Group 2: Roche antigénteszt – Abbott antigénteszt – RT-PCR 3. csoport: Abbott antigénteszt – RT-PCR – Roche antigénteszt

A betegek e csoportokba való besorolása egyértelműen meghatározásra kerül az esetnyilvántartási űrlapokon. Minden betegnek két formája lesz:

1. formanyomtatvány: a gyűjtőpont által a páciens azonosítására használt rutinelemzés kérelmező lap, amely vonalkóddal lesz felcímkézve, amely tartalmazza a páciens vizsgálati számát 2. űrlap: Vizsgálatspecifikus űrlap, amely tartalmazza a vonalkód másolatát a vizsgálat számával, kezdőbetűkkel a betegről és a születési évről.

8.2 SARS-CoV-2 Rapid Antigen Test (Roche): A SARS-CoV-2 Rapid Antigen Test egy gyors kromatográfiás immunvizsgálat, amely az emberi orrgaratban jelen lévő SARS-CoV-2 specifikus antigének kvalitatív kimutatására szolgál.

8.3 PANBIO Covid-19 Ag Rapid Test (Abbott): A Panbio COVID-19 Ag Rapid Test Device egy in vitro diagnosztikai gyorsteszt a SARS-CoV-2 antigén (Ag) kvalitatív kimutatására humán orrgarat-tamponmintákban.

8.4 RT-PCR: Az RT-PCR értékeli a SARS-CoV-2 genom jelenlétét vagy hiányát a nasopharyngealis és oropharyngealis tamponok mintáiban, és a SYNLAB MVZ Leinfelden GmbH által megállapított protokollok szerint hajtják végre.

8.5 Szerológiai és kiegészítő vizsgálatok: Vérmintákat vesznek (10 ml heparin plazma és 5,5 ml EDTA plazma) a SARS-CoV-2 antigén fehérjékkel (pl. Roche, Abbott). Konkrétan, minden résztvevőnek felajánljuk, hogy megkapja a következő analitok eredményeit a vizsgálatban való részvétel elismeréseként: vérsejtszám, C-reaktív fehérje, HbA1c, koleszterin, trigliceridek, LDL-koleszterin, HDL-koleszterin, gamma-glutamil-transzferáz , kreatinin, valamint képletből származó kreatinin, D-vitamin. Tartalék mintákat gyűjtünk, hogy meghatározzuk a kiegészítő paramétereket, például a gyulladásos markereket, valamint a mikrotápanyagokat és vitaminokat.

9. Megfigyelési időszak:

NIS menetrend:

Betegfelvétel kezdete: 2021. február 1. Megfigyelési időszak vége: 2021. március 31. Zárójelentés: 2021. május 31.

10. Adatelemzés és statisztikai módszerek: Az álnevesített adatokból és eredményekből adatbázis készül. A kutatók azt feltételezik, hogy az egyes antigéntesztek érzékenysége és specificitása 1,0 az RT-PCR-hez viszonyítva, amelyet referenciatesztnek kell tekinteni. A 0,05-nél kisebb p érték szükséges ahhoz, hogy mind a két gyorstesztet egyenértékűnek tekintsünk az RT-PCR-rel.

A khi-négyzet próbák teljesítményszámításaival két szabadságfok esetén a szükséges I. típusú hiba valószínűsége 0,05, a szükséges (1 II típusú hiba valószínűsége) 0,8 és a szükséges hatásméret 0,1 (kis hatásméret a (4)) értelmében a vizsgálók legalább N=964 megfigyelést kapnak a beérkező betegek egymás utáni teszteléséhez, hogy teljesítsék az első kutatási kérdés megválaszolásához szükséges szignifikancia és erő követelményeit. Mivel az 1000 esetből 10% körüli pozitívum várható, a khi-négyzet eloszlás feltételezése megengedett.

A kutatók foglalkoznak azzal a kérdéssel is, hogy a különböző előzetes vizsgálati valószínűségek befolyásolják-e az antigéntesztek érzékenységét. A kutatók két fő indikációs csoportra számítanak, amelyek az rt-PCR pozitív minták körülbelül 90 százalékát teszik ki, eltérő pre-teszt valószínűséggel: a) az orvos által rt-PCR vizsgálatra felvett résztvevők b) az egészségem ajánlása alapján rt-PCR vizsgálatot kérő résztvevők. ellátó hatóságok/kapcsolattartók. Összesen körülbelül 200 rt-PCR mintára lesz szükség a statisztikailag szignifikáns különbség kimutatásához a két csoport között 0,05-ös 1-es típusú hiba és 0,80-as statisztikai erő mellett. A második kérdés megválaszolásához a kutatók kiterjesztik a vizsgálatot 2000 résztvevőre.

11. Etika: A vizsgálati jegyzőkönyvet a Heidelbergi Egyetem Mannheimi Orvostudományi Karának Etikai Bizottságához kell benyújtani, és a vizsgálat csak írásos engedély megszerzése után kezdődik meg. A vizsgálatot a német joggal, az EU klinikai vizsgálati előírásaival és a klinikai kutatás etikai elveiről szóló Helsinki Nyilatkozattal összhangban végzik.

11.1 Betegtájékoztatás és tájékoztatáson alapuló beleegyezés: A dokumentum célját, jellegét és terjedelmét minden betegnek írásban el kell ismertetni, mielőtt bevonják a vizsgálatba (1. melléklet). A beteget csak akkor lehet bevonni, ha írásos beleegyezését adta (2. melléklet). A betegeknek jogukban áll megtagadni a vizsgálatban való részvételt vagy kilépni a vizsgálatból bármilyen okból és bármely szakaszban anélkül, hogy az egészségügyi ellátásuk minőségét vagy elérhetőségét befolyásolná.

11.2 Adatvédelem: A vizsgálathoz gyűjtött betegadatokat álnéven (4. sz. melléklet) rögzítjük, a beteg személyazonosságához nem köthető betegszámmal. A vizsgálati eredmények közzététele esetén a személyes adatok csak akkor használhatók fel, ha a beteg anonimitását fenntartják. A páciens adatai garantáltan mindig abszolút védelem alatt állnak.