Test di attivazione dei mastociti nelle malattie allergiche

L'obiettivo di questo studio è valutare se i pazienti con gravi malattie allergiche presentano alti livelli di attivazione dei mastociti come determinato dal test diagnostico di attivazione dei mastociti che i ricercatori hanno sviluppato. Prevedono che i pazienti con anamnesi di gravi reazioni allergiche si presenteranno come soggetti ad alta risposta nel test diagnostico di attivazione dei mastociti basato sul sangue. Inoltre, utilizzando l'analisi dei microarray come approccio per gli studi sull'espressione genica, anticipano ulteriormente che i biomarcatori genomici correlati all'elevata attivazione funzionale dei mastociti in vitro derivati ​​da questi pazienti possono essere facilmente identificati.

Circa 100 ml di sangue venoso periferico di singoli pazienti verranno aspirati in siringhe eparinizzate e raccolti in una sacca/provetta per la raccolta del sangue contenente silice. La sacca/provetta verrà prontamente elaborata per la generazione di colture primarie di mastociti umani utilizzando il protocollo precedentemente sviluppato [Inflammation Research 66: 25 (2017). Dopo 9 settimane di coltura, i mastociti umani risultanti saranno analizzati sia per la loro attività funzionale in termini di rilascio di istamina in risposta all'attivazione dei recettori ad alta affinità per le immunoglobuline E (IgE) in queste cellule che per i loro profili di espressione genica mediante analisi di microarray . I dati funzionali e genomici in vitro saranno correlati con diagnosi specifiche e misurazioni dei livelli di prostaglandina D2 (PGD2), metaboliti PGD2, triptasi e istamina nel sangue. Per i saggi del mediatore, il plasma di ciascun soggetto sarà raccolto dopo la fase di isolamento del cluster di differenziazione 34 positivo (CD34+) ei campioni saranno aliquotati e congelati a -80 gradi centigradi per la successiva analisi.