Qualità degli embrioni umani nella fecondazione in vitro, coltura in ossigeno differenziato

L'obiettivo di questa sperimentazione clinica è valutare l'importanza della tensione differenziale di O2 per gli embrioni in via di sviluppo. Come obiettivo secondario, indaghiamo i livelli di specie reattive dell'ossigeno (ROS) nei media esauriti dalle blastocisti in via di sviluppo.

Questo è uno studio multicentrico prospettico e interventistico che utilizza embrioni di pari livello.

Possono essere incluse nello studio donne (età 18-41 anni e peso normale) sottoposte a tecnologia di riproduzione assistita (ART), con cicli pianificati di fecondazione in vitro o iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI).

I pazienti inclusi nel progetto seguiranno il protocollo e il trattamento di fecondazione in vitro standard, tra cui iniezioni ormonali, prelievo di ovociti, trasferimento di embrioni e crioconservazione di blastocisti. Non sono necessari ulteriori esami o deviazioni dal trattamento standard per partecipare al progetto.

Prelevando ≥ 8 ovociti dopo il prelievo e previa accettazione da parte della paziente, lei/la coppia può essere inclusa nello studio. Il numero minimo di 8 ovociti è stato determinato per garantire una media di due blastocisti. Gli ovociti, saranno divisi in 2 gruppi. La prima parte degli ovociti raccolti sarà inclusa come controllo, mentre la seconda parte degli ovociti raccolti sarà inclusa come gruppo di studio.

Secondo il trattamento standard, entrambi i gruppi di ovociti saranno posti in un'incubatrice con il 5% di O2. Dai video time-lapse, verranno annotate le osservazioni della fecondazione e della scissione rispettivamente dopo 20 ore ± 1 ora e 44 ore ± 1 ora. Dopo 3 giorni di coltivazione (68h± 1h), le piastre con gli embrioni di studio saranno trasferite in un incubatore time-lapse con bassissima tensione di O2 (2%). Gli embrioni di controllo rimarranno nell'incubatore time-lapse convenzionale al 5% di O2.

Il quinto giorno, gli embrioni saranno valutati da un embriologo esperto e la blastocisti con il potenziale di impianto maggiore previsto verrà trasferita nell'utero del paziente. Gli embrioni in eccesso con potenziale di impianto previsto saranno criopreservati. Dopo il trasferimento o la crioconservazione, i terreni dai pozzetti con le blastocisti utilizzate saranno raccolti e conservati per l'analisi dei ROS.

Il risultato principale:

a) parametri morfocinetici migliorati; diminuzione della differenza di tempo dallo stadio a 5 cellule (t5) allo stadio di blastocisti (tB) negli embrioni coltivati ​​in tensioni differenziali di O2.

Come risultati secondari:

1. Diminuzione dell'attività dei ROS nei terreni esauriti dalle blastocisti in via di sviluppo coltivate in tensioni differenziali di O2.
2. Numero di blastocisti trasferibili/vetrificate in entrambi i gruppi di studio e test
3. Verifica della gravidanza clinica, utilizzando l'ecografia intorno alla settimana 7. Tutte le gravidanze o gli aborti spontanei saranno registrati per tutti i pazienti, se possibile.

Valore per la salute pubblica:

Se la nostra ipotesi sarà confermata come previsto, saremo in grado di ottimizzare le condizioni di sviluppo, ovvero un tasso di sviluppo più rapido da t5 a tB e livelli di ROS ridotti per l'embrione in vitro. Dal punto di vista clinico, ciò potrebbe influenzare il tasso di impianto della blastocisti e quindi il successo delle gravidanze per le coppie infertili, riducendo al contempo il numero di trattamenti per ottenere una gravidanza praticabile.