Età biologica nei bambini con deficit di GH sottoposti a terapia ormonale sostitutiva (ETABIOGHD)

12 bambini di entrambi i sessi affetti da deficit isolato di GH (definito secondo i criteri forniti dalla nota 39 AIFA per questa patologia: bassa statura: ≤ -3 DS o ≤ -2 DS; tasso di crescita/anno ≤ -1,0 DS per età e sesso valutati a distanza di almeno sei mesi; picco di GH a due diversi test di stimolazione farmacologica < 8 ng/ml), reclutati presso il Centro di Referenza Regionale per i Disturbi della Crescita, Istituto Auxologico Italiano, IRCCS, Milano. Il criterio di esclusione dallo studio (e dal trattamento con rhGH) è la presenza di patologie organiche ipotalamo-ipofisarie (diagnosticate tramite RMN encefalica).

In condizioni basali (pretrattamento), vengono raccolti i dati clinici e antropometrici/auxometrici (altezza, peso, BMI), compresa la valutazione della composizione corporea con analisi di impedenza bioelettrica. Le stesse valutazioni vengono ripetute dopo 6 mesi di trattamento con l'ormone della crescita ricombinante (vedi sotto).

Ciascun soggetto viene trattato con terapia sostitutiva con rhGH alla dose di 0,025-0,035 mg/kg di peso corporeo al giorno (o 0,7-1,0 mg/m2 di superficie corporea al giorno).

I campioni di sangue per la determinazione di: glicemia, insulina, HbA1C, trigliceridi, colesterolo totale, LDL, HDL, hsPCR, IGF-1, osteocalcina, ICTP e PIIINP vengono raccolti a T0 (prima dell'inizio della terapia ormonale sostitutiva con rhGH) e a T6 (dopo 6 mesi di rhGH, a circa 10-12 dall'ultima somministrazione).

Dai leucociti isolati dai campioni prelevati a T0 e T6 viene estratto il DNA. La metilazione del DNA viene eseguita con bisolfito di sodio e PCR-pirosequenziamento.

L'età biologica (epigenetica) viene misurata con due algoritmi di Zbiec-Piekarska e di Daunay, basati sul livello di metilazione del DNA in loci specifici. Per avere una stima dell’età epigenetica (biologica) indipendente dall’età cronologica, utilizziamo una misura definita definita accelerazione dell’età, per il cui calcolo applichiamo un modello di regressione lineare con l’età cronologica come variabile indipendente e l’età epigenetica come variabile dipendente; la differenza tra il valore osservato e quello previsto dal modello rappresenta l'accelerazione dell'età dovuta ad un effetto propriamente epigenetico. Nel caso in cui l'età epigenetica sia superiore all'età cronologica, l'accelerazione dell'età ha un valore positivo espresso in anni, altrimenti negativo.