Wiek biologiczny dzieci z niedoborem GH poddawanych hormonalnej terapii zastępczej (ETABIOGHD)

12 dzieci obojga płci dotkniętych izolowanym niedoborem GH (zdefiniowanym według kryteriów podanych w nocie 39 AIFA dla tej patologii: niskorosłość: ≤ -3 DS lub ≤ -2 DS; tempo wzrostu/rok ≤ -1,0 DS na wiek i płeć oceniane w odległości co najmniej sześciu miesięcy, szczyt GH w dwóch różnych testach stymulacji farmakologicznej < 8 ng/ml), rekrutowani w Regionalnym Centrum Referencyjnym ds. Zaburzeń Wzrostu, Istituto Auxologico Italiano, IRCCS, Mediolan. Kryteriami wykluczenia z badania (i leczenia rhGH) jest obecność organicznych patologii podwzgórzowo-przysadkowych (rozpoznawanych na podstawie RMN mózgu).

W warunkach podstawowych (przed leczeniem) zbierane są dane kliniczne i antropometryczne/auksometryczne (wzrost, masa ciała, BMI), w tym ocena składu ciała za pomocą analizy impedancji bioelektrycznej. Te same oceny powtarza się po 6 miesiącach leczenia rekombinowanym hormonem wzrostu (patrz poniżej).

Każdy pacjent jest leczony terapią zastępczą rhGH w dawce 0,025-0,035 mg/kg masy ciała na dzień (lub 0,7-1,0 mg/m2 powierzchni ciała na dzień).

Próbki krwi do oznaczania: glikemii, insuliny, HbA1C, triglicerydów, cholesterolu całkowitego, LDL, HDL, hsPCR, IGF-1, osteokalcyny, ICTP i PIIINP pobierane są w T0 (przed rozpoczęciem hormonalnej terapii zastępczej rhGH) i w T6 (po 6 miesiącach rhGH, około 10-12 od ostatniej dawki).

Z leukocytów wyizolowanych z próbek pobranych w T0 i T6 ekstrahuje się DNA. Metylację DNA przeprowadza się za pomocą wodorosiarczynu sodu i pirosekwencjonowania metodą PCR.

Wiek biologiczny (epigenetyczny) mierzony jest dwoma algorytmami Zbiec-Piekarskiej i Daunaya, bazującymi na poziomie metylacji DNA w określonych loci. Aby oszacować wiek epigenetyczny (biologiczny) niezależny od wieku chronologicznego, stosujemy zdefiniowaną miarę zdefiniowaną jako przyspieszenie wieku, do którego obliczeń stosujemy model regresji liniowej z wiekiem chronologicznym jako zmienną niezależną i wiekiem epigenetycznym jako zmienna zależna; różnica między wartością obserwowaną a wartością przewidywaną z modelu reprezentuje przyspieszenie wieku w wyniku odpowiednio efektu epigenetycznego. W przypadku, gdy wiek epigenetyczny jest wyższy od wieku chronologicznego, przyspieszenie wieku ma wartość dodatnią wyrażoną w latach, w przeciwnym wypadku ujemną.