若年肥満被験者における血清プロテオームの特性評価 (POSING) (POSING)

実験計画 研究には、研究に含まれる被験者の血清プロテオーム解析が行われる発見段階が含まれます。 このフェーズでは、少数の候補マーカーを特定することが可能になり、その後のフェーズでより多くの被験者を対象として検証されます。

忍耐：

発見フェーズでは、思春期の被験者 60 人 (男性 30 人、女性 30 人) が考慮されます。 被験者は次の 2 つのグループに分けられます。

• 標準化された基準[10,11]に従って超音波法によって検証され、APRIスコアが0.3未満である、脂肪症のない被験者を含む対照群。
• 超音波技術を使用して脂肪症の存在が証明され、APRIスコアが0.50を超える被験者を含む研究グループ。

各患者について、ベースライン条件、つまりサンプル収集時に次の変数が考慮されます。

• 人体測定パラメータ (身長、体重、BMI、胴囲);
• インピーダンス測定法 (BIA) を使用した体組成 (除脂肪体重、体脂肪)。
• 標準基準に従って超音波で測定された脂肪症のレベル
• 血液化学パラメータ
• 間接熱量測定を使用した基礎代謝;
• メタボリック シンドロームを決定する生化学的パラメーター (HDL コレステロール、トリグリセリド、血糖);
• サロゲート マーカー (AST、ALT、GGT、血小板、アルカリホスファターゼ、アルブミン) を使用した脂肪肝の予測のための生化学的パラメーター。
• 血圧;
• 併用ホルモン療法（成長ホルモン療法、性ステロイド、および/またはl-サイロキシン）。

血清収集 空腹時血液サンプルは、標準的な静脈穿刺によって BD Vacutainer® 血清分離チューブ (BD - Plymouth PL6 7BP, UK) に収集され、4°C で 1900g で 10 分間、4°C で 16,000g でさらに 10 分間遠心分離されます。分。 上清を新しいチューブに移し、その後長期保存のために-80°Cで凍結します。

プロテオミクス分析 プロテオミクス分析の前に、ヘモグロビンの存在を分光光度計 Beckman Coulter® DU®730 (Beckman Coulter, Brea, CA, USA) により、Harboe の直接分光光度法とアレン補正を使用して評価します: Hb ( g / L) = (167、2 × A415 - 83.6 × A380 - 83.6 × A450) x 1/1000 × 1 / dH2O で希釈。 血清で考慮されるカットオフは 0.020 g/L です。

血清のプロテオミクス特性評価には、SomaLogic SOMAscan プラットフォームに基づく新しいハイスループット オミックス技術が使用されます。 このシステムは、タンパク質標的に対して高い親和性と特異性を備えた DNA のアプタマー形態である SOMAmer (Slow Off-rate Modified Aptamers) の検出に基づいています。 さらに、これらのアプタマーはヌクレオチダーゼ活性に耐性があり、通常の抗体よりも高い親和性を示します。 この研究で使用されるパネルにより、代謝性疾患の発症に関与し、一般的な炎症反応の一部であり、心血管疾患や腫瘍学の研究に関心のある 1500 のタンパク質標的を評価することができます。

一般に、テストの感度と性能は通常の ELISA キットに匹敵し、定量限界は約 100 fM、検出限界は 40 fM で、必要なサンプルはわずか 65 µL です。

検証 グループ間の有意性および差次的発現に基づいて選択された 2 つのマーカーの検証は、ELISA 法によって検証されます。 このフェーズでは、適切な統計的有意性を得るのに役立つサンプルサイズに到達するために、60 人の被験者 (発見フェーズに含まれる) および他の 32 人の補完的な被験者の血清中の濃度を決定することにより、各マーカーが検証されます。

さらに、実験は、ELISA アッセイのセットアップ手順で必要とされるように、プレート間の変動性をチェックするために、正と負のコントロールとコントロールを含むように設定されます。 標準曲線を計算して、血清中の目的のマーカーの絶対定量を決定します。