Optimalisatie van de identificatie en behandeling van mastitis (OPTIMIST)

Moeders die borstvoeding geven

In dit onderzoek zullen moeders die borstvoeding geven worden opgenomen. Er worden monsters afgenomen bij moeders die borstvoeding geven en mastitis ervaren. Er worden monsters afgenomen bij moeders die borstvoeding geven nadat de mastitis-episode is verdwenen.

Bepaling van de microbiële samenstelling in moedermelk van moeders zonder mastitis door middel van MALDTI-TOF en Illumina-sequencing

Om te onderzoeken of er een bepaalde microbiële samenstelling van moedermelk is die tot mastitis leidt, wordt de microbiële samenstelling in moedermelk van moeders zonder mastitis beoordeeld. De onderzoekers verzamelen melkmonsters van alle ingeschreven moeders op dag 6-7 na de geboorte. Melkmonsters worden bewaard bij -20 tot verdere verwerking.

Moeders die mastitis ontwikkelen, zullen verder worden bemonsterd zoals beschreven in uitkomst 2. Monsters zullen worden geanalyseerd met behulp van cultuurafhankelijke en cultuuronafhankelijke methoden. Na het kweken van de melkmonsters zullen de kolonies worden geanalyseerd met behulp van Matrix-geassisteerde laserdesorptie/ionisatie-vluchttijd (MALDI-TOF) om bacteriesoorten te identificeren. Uit hetzelfde melkmonster wordt DNA geïsoleerd.16S rRNA amplicon sequencing van DNA uit melkmonsters zal worden uitgevoerd met behulp van de Illumina-technologie, om een ​​overzicht te krijgen van de totale bacteriële samenstelling.

Bepaling van de microbiële samenstelling in moedermelk bij aanvang van mastitis door MALDTI-TOF en Illumina-sequencing

De onderzoekers zullen onderzoeken of de microbiële samenstelling in moedermelk verandert bij het begin van mastitis. Door mogelijke veranderingen in de microbiële samenstelling te analyseren, zullen de onderzoekers beoordelen of de symptomen van mastitis worden veroorzaakt door micro-organismen, of dat de symptomen van mastitis inflammatoir zijn. Melkmonsters worden door de moeder verzameld bij het begin van mastitis, 24 uur na het begin van de symptomen en nadat de symptomen zijn verdwenen. Als de mastitisepisode wordt behandeld met antibiotica, wordt 24 uur na stopzetting van de antibioticabehandeling een nieuw monster genomen. Melkmonsters worden bewaard bij -20 tot verdere verwerking. Monsters zullen worden geanalyseerd met behulp van cultuurafhankelijke en cultuuronafhankelijke methoden. Na het kweken van de monsters zullen kolonies worden geanalyseerd door MALDI-TOF om bacteriesoorten te identificeren. 16S rRNA amplicon sequencing van DNA uit melkmonsters zal worden uitgevoerd met behulp van de Illumina-technologie, om een ​​overzicht te krijgen van de totale bacteriële samenstelling.

Beoordeling van de microbiële samenstelling op tepels van moeders zonder mastitis

Er is geen overeenstemming over of mastitis veroorzakende bacteriën afkomstig zijn uit de borsttepel, of dat ze deel uitmaken van het melkmicrobioom. We nemen monsters van de tepels om te onderzoeken of micro-organismen die de borsthuid koloniseren de borstklieren binnendringen en mogelijk mastitis veroorzaken. Op dag 6-7 na de geboorte wordt een huiduitstrijkje van de tepel (beide borsten) genomen. Na het kweken van het uitstrijkje zullen bacteriekolonies worden geanalyseerd door MALDI-TOF om bacteriesoorten te identificeren. De huiduitstrijkjes worden afgenomen op dezelfde tijdstippen als het verzamelen van melkmonsters.

Beoordeling van de microbiële samenstelling op tepels van moeders met mastitis

Er is geen overeenstemming over of mastitisveroorzakende bacteriën afkomstig zijn uit de tepel, of dat ze deel uitmaken van het melkmicrobioom. We nemen monsters van de tepels om te onderzoeken of micro-organismen die de borsthuid koloniseren de borstklieren binnendringen en mogelijk mastitis veroorzaken.

Wanneer de moeder symptomen van mastitis ervaart, neemt de moeder een huiduitstrijkje af. Na het kweken van het uitstrijkje zullen bacteriekolonies worden geanalyseerd door MALDI-TOF om bacteriesoorten te identificeren. De huiduitstrijkjes worden genomen op dezelfde tijdstippen als het verzamelen van melkmonsters. De microbiële samenstelling op de tepels van moeders met mastitis zal ook worden vergeleken met de tepelmicroflora van moeders zonder mastitis om te zien of er een verband is tussen bepaalde huidkolonisatie bacteriën die mastitis veroorzaken.

De concentratie van immunologische markers in melk van moeders zonder mastitis

Op dag 6-7 na de geboorte wordt een melkmonster genomen en wordt de concentratie van immunologische markers bepaald in de melk van moeders zonder mastitis. De concentratie (pg/ml) van 8 immuunfactoren, waaronder aangeboren immuunfactoren (IL6, IFNγ, TNFα), verworven immuunfactoren (IL2, IL4, IL10), chemokines (IL8) en groeifactor (GMCSF), zal worden bepaald door op magnetische korrels gebaseerde multiplex-immunoassays, met behulp van een Bioplex 200-instrument (Bio-Rad, Hercules, CA, VS).

De concentratie van immunologische markers in melk van moeders met mastitis

Om te bepalen of er een toename is van de immunologische markers die aanwezig zijn in melk van moeders met mastitis, zullen melkmonsters worden verzameld bij aanvang van mastitissymptomen en 24 uur na het stoppen van de symptomen. Als de moeder een behandeling met antibiotica nodig heeft, worden monsters genomen bij aanvang van de behandeling en 24 uur na beëindiging van de behandeling met antibiotica. De concentratie (pg/ml) van 8 immuunfactoren, waaronder aangeboren immuunfactoren (IL6, IFNγ, TNFα), verworven immuunfactoren (IL2, IL4, IL10), chemokines (IL8) en groeifactor (GMCSF), zal worden bepaald door op magnetische korrels gebaseerde multiplex-immunoassays, met behulp van een Bioplex 200-instrument (Bio-Rad, Hercules, CA, VS). De onderzoekers zullen beoordelen of de concentratie van immunologische markers verschilt bij bacteriële mastitis en inflammatoire mastitis.

In kaart brengen van symptomen van mastitis door middel van gedetailleerde vragenlijsten

De moeders wordt gevraagd een gedetailleerde vragenlijst in te vullen over borstvoeding en symptomen van mastitis.

De vragenlijst gaat mee met het verzamelen van melkmonsters zoals beschreven in resultaat 1 en 2.