Reaktywność hormonu uwalniającego kortykotropinę (CRH) u dzieci z dyspepsją czynnościową

Głównym celem tego badania jest ocena, czy istnieją różnice w odpowiedzi na CRH (hormon uwalniający kortykotropinę) u dzieci i młodzieży z FD (niestrawność czynnościowa) w porównaniu z grupą kontrolną. Ponadto zamierzamy zbadać zależności między reakcją na CRH, cytokinami zapalnymi, lękiem jako stanem i cechą oraz zgłaszanymi przez siebie objawami.

Szczegółowe cele badania to:

1. Aby określić, czy zmiany w profilach cytokin w surowicy, zmienności rytmu serca, parametrach profilu stresu, lęku jako stanu i cechy oraz zgłaszanych przez siebie objawach różnią się między pacjentami z FD a grupą kontrolną po infuzji CRH.
2. Aby określić, czy zmiany w surowicy ACTH (hormonu adrenokortykotropowego) lub kortyzolu po wlewie CRH różnią się między pacjentami z FD a grupą kontrolną lub jako funkcja wielkości lęku stanu lub cechy wśród pacjentów z FD.

Niniejsze badanie jest badaniem pilotażowym w jednym ośrodku.

Biochemiczna odpowiedź na stymulację CRH zostanie zbadana dla każdej cytokiny, mediatorów i hormonów wyszczególnionych w niniejszym dokumencie poprzez obliczenie szybkości ich powstawania, maksymalnego stężenia (Cmax), czasu do maksymalnego stężenia (Tmax), całkowitej ekspozycji ciała (AUC) i tempa regeneracji (w stosownych przypadkach). Analizy farmakokinetyczne zostaną zastosowane do danych, w których występują wyraźne fazy wzrostu i spadku profilu stężenia w czasie. Dane dotyczące stężenia w funkcji czasu zostaną dopasowane do krzywej przy użyciu algorytmu oddzielania w celu wygenerowania wstępnych oszacowań parametrów poliwykładniczych. Ostateczne szacunki pozornego tempa odzyskiwania zostaną określone na podstawie iteracyjnego algorytmu regresji nieliniowej ważonej metodą najmniejszych kwadratów. Ocena dobroci dopasowania dla modelu farmakokinetycznego zostanie przeprowadzona przy użyciu standardowych kryteriów (np. Kryteria informacyjne Akaike i Schwartz, funkcja celu i współczynniki zmienności dla szacowanych parametrów), rozkład ważonych oszacowań resztkowych oraz związek między obserwowanymi i przewidywanymi stężenia. Niezależne od modelu parametry farmakokinetyczne zostaną obliczone przy użyciu standardowych technik (tj. teorii momentu statystycznego). Indywidualne wartości Cmax i Tmax zostaną oszacowane poprzez sprawdzenie zaobserwowanych danych dotyczących stężenia w osoczu w funkcji czasu. Pole powierzchni pod krzywą zależności stężenia w osoczu od czasu zostanie określone przy użyciu mieszanej logarytmiczno-liniowej reguły trapezów (nie będzie przeprowadzana ekstrapolacja AUC do nieskończoności). Analizy te zostaną przeprowadzone w Kinetica v5.0 (ThermoElectron, Filadelfia, PA). Różnice między przypadkami i kontrolami dotyczące zmiennych ciągłej odpowiedzi zostaną porównane przy użyciu dwustronnych niezależnych testów t dla próby. Zależności między zmiennymi odpowiedzi ciągłej zostaną ocenione za pomocą jednowymiarowej analizy wariancji oraz technik regresji liniowej i nieliniowej. Kategoryczne czynniki pacjenta i zmienne odpowiedzi zostaną porównane z dokładnym testem Fishera w tabeli krzyżowej 2 x 2. Wszystkie analizy statystyczne zostaną przeprowadzone przy użyciu pakietu oprogramowania SSPS (wersja 15.0, SPSS Inc., Chicago, IL).

Wielkość próbki

Wybrano wielkość próby 12 dla każdej grupy (kontrola i pacjenci z FD). Dwunastu pacjentów na grupę daje 99% mocy do wykrycia 1,5-krotnie większego wydzielania ACTH u pacjentów z FD w porównaniu z grupą kontrolną, przy czym odchylenie standardowe przyjmuje się za 20% na podstawie 2 wcześniejszych badań z udziałem dorosłych (z których oba wykryły około 2-krotny wzrost ). Moc może być niższa w przypadku analizy wtórnej, jednak uważa się to za dopuszczalne, biorąc pod uwagę pilotażowy charakter tego badania.

Będą dwie grupy składające się z pacjentów, którzy byli widziani w Klinice Bólu Brzucha z powodu bólu brzucha trwającego co najmniej 8 tygodni i spełniają kryteria oparte na objawach dla FD i są zaplanowani na endoskopię i kontrole, którzy nie mieli ostatnio bólu brzucha .

Obie grupy zostaną poddane tym samym testom/procedurom.

Uczestnicy będą pościć przez co najmniej 8 godzin przed oceną, która rozpocznie się między 8 a 10 rano. Kobiety w wieku > 10 lat otrzymają UCG jako standardową praktykę przed otrzymaniem jakiegokolwiek leku lub leku. Rodzic i dziecko ukończą BASC-2 oraz wersje stanu i cechy STICSA-C. Zostanie wykonany profil stresu w ramach biofeedbacku. Następnie zostanie umieszczony cewnik IV, a uczestnik będzie mógł zrelaksować się przez 30 minut przed kolejną częścią badania. Następnie uczestnik zostanie poddany 30-minutowemu podstawowemu monitorowaniu tętna przed testem stymulacji CRH. Po 30-minutowym okresie odniesienia zostanie pobrana próbka krwi na obecność cytokin w surowicy, ACTH, kortyzolu i CBG. Uczestnik oceni odpowiednio nasilenie bólu brzucha, nudności i wzdęć w 10-punktowej skali.

Do testu stymulacji CRH kortykorelina (analog ludzkiej CRH) zostanie podana w dawce 1 mcg na kg masy ciała (maksymalnie 100 mcg) w ciągu 1 minuty. Próbki krwi będą pobierane w odstępach 15-minutowych przez 60 minut w celu oznaczenia stężeń ACTH, kortyzolu i CBG. Następujące dane zostaną uzyskane lub zarejestrowane po 15, 30 i 60 minutach: próbki krwi do oznaczania stężeń cytokin, ocena (w 10-punktowej skali) bólu brzucha, nudności i wzdęć, parametry profilu stresu i zgłaszany przez siebie stan lęku (tj. STICSA-C Twój nastrój w tym momencie). Monitorowanie tętna będzie prowadzone przez okres 60 minut.

Test stymulacji CRH jest rutynowo stosowanym testem diagnostycznym w Endokrynologii. Nie jest to jednak rutynowe dla żadnej z dwóch grup uczestników tego badania.

Środki

1. Zmienność rytmu serca (HRV)

   Elektrokardiogram zostanie zarejestrowany i oceniony HRV przy użyciu fizjografu I-330 C2 (J & J Engineering, Poulsbo, WA) i oprogramowania Window USE Physiolab. Kable elektrodowe MC-5SGW posłużą do podłączenia 2 elektrod nadgarstkowych (+ po lewej) oraz uziemienia EDR, które zostanie umieszczone na palcu.

   Sygnał HRV zostanie wyprowadzony z danych EKG. Do sygnału HRV zostanie zastosowana ogólna analiza spektralna mocy w celu wyodrębnienia parametrów współczulno-wagalnych: mocy w zakresie niskich częstotliwości (LF) i mocy w zakresie wysokich częstotliwości (HF). LF definiuje się jako pole pod krzywą w zakresie częstotliwości 0,04-0,15 Hz i HF definiuje się jako pole pod krzywą w zakresie częstotliwości 0,15-0,50 Hz. Moc w paśmie LF (0,04-0,15 Hz) reprezentuje głównie aktywność współczulną, a moc w paśmie HF (0,15-0,5 Hz) widma mocy HRV reprezentuje czysto przywspółczulną lub błędną aktywność. Stosunek LF do HF zostanie również obliczony jako miara równowagi współczulno-wagalnej.

2. Profil stresu

   Odczyty profilu stresu Biofeedback będą rejestrowane za pomocą pojedynczego fizjografu I-330 C2 (J & J Engineering, Poulsbo, WA), z wykorzystaniem oprogramowania Windows USE 3 Physiolab.

   U wszystkich pacjentów będą monitorowane następujące metody:

   1. Elektromiograf powierzchniowy (sEMG) – odczyty będą mierzone w mikrowoltach (mcv) przy użyciu szerokiego pasma umieszczonego na przedniej części ciała; po standardowym przygotowaniu skóry wstępnie zżelowane srebro/chlorek srebra czujniki Plaster Red Dot umieszcza się na szerokość palca nad każdą brwią i podłącza do kabla MV-1L sEMG za pomocą zacisków krokodylkowych CL 50. Czujniki sEMG zostaną również umieszczone w punktach tętna na obu nadgarstkach, aby monitorować i przekazywać informację zwrotną o rytmie serca.
   2. Temperatura obwodowej skóry (TEMP) – będzie mierzona w stopniach Fahrenheita (F.) za pomocą termistora (czujnik RV-5 TEMP/EDR) przymocowanego do opuszki środkowego palca uczestnika (lub zastępczej trzeciej cyfry) na dominującej dłoni.
   3. Reakcja elektrodermalna (EDR) — aktywność przewodnictwa skóry (SCA) będzie mierzona w mikroomach (µohm) za pomocą (czujnika TEMP/EDR RV-5) przymocowanego do dominującego palca wskazującego za pomocą zatrzaskowego krążka SE 35 EDG 8 mm ze srebra/chlorku srebra osadzony w zapięciu na rzep z żelem na bazie soli fizjologicznej na dysku, aby zapewnić kontakt ze skórą.

3. Białka osocza (cytokiny/ mediatory/ hormony)

   Około 39 ml krwi zostanie pobrane przez cewnik dożylny w celu oznaczenia białka osocza, w tym TNF-α, IL-4, IL-5, IL-8, eotaksyny-3, MCP-1, MMP-9, ECP, MBP, kortyzolu , ACTH i CBG. Białka osocza będą mierzone za pomocą dostępnych w handlu zestawów do testów immunologicznych. Tabela 1 przedstawia zestawienie ilości krwi, która zostanie pobrana w każdym punkcie czasowym. W tabeli 2 przedstawiono przykładowe wymagania i laboratorium badawcze.

4. Wolny kortyzol w osoczu

   Wolny kortyzol w osoczu zostanie obliczony przy użyciu następującego wzoru:

   U = √ Z2 + 0,0122 C - Z(średnia)M Gdzie U = stężenie molowe niezwiązanego kortyzolu, C = stężenie molowe całkowitego kortyzolu, T = stężenie molowe CBG, a Z = 0,0167 + 0,182 (T-C)(średnia) M

   (0,0167 i 0,182 to odpowiednio stałe powinowactwa CBG do kortyzolu w temperaturze 37°C i proporcji kortyzolu związanego z albuminą do niezwiązanego).

5. Profil BASC-2 Wersje rodzica i dziecka Skali Oceny Zachowania Dzieci - wydanie drugie (BASC-2) zostaną wypełnione odpowiednio przez uczestnika i jednego rodzica. BASC-2 to obiektywny system oceny funkcjonowania psychicznego młodzieży, dostarczający wystandaryzowanych opisów problemów i kompetencji. Istnieją różne wersje dla dzieci (w wieku 8-11 lat), nastolatków (w wieku 12-18 lat) i rodziców (inna wersja dla osób z dziećmi w wieku 6-11 lat i 12-18 lat). (36) Wyniki surowe są standaryzowane jako wyniki T (M=50, SD=10) w oparciu o normatywną próbę 3483 dzieci w wieku od 4 do 18 lat uwarstwionych zgodnie z danymi ze spisu ludności USA. Poszczególne podskale charakteryzują się dobrą rzetelnością (spójność wewnętrzna), z wyjątkiem podskali Nietypowość w BASC-PRS oraz podskal Somatyzacja i Samodzielność w BASC-SRS (r< 0,70). BASC wykazał również trafność kryterialną i konstrukcyjną. Wyniki T dla podskal lęku (opis rodziców i samoocena) zostaną użyte jako miara lęku-cechy do analizy.

6. STICSA-C

   Inwentarz stanu i cechy lęku poznawczego i somatycznego, wersja dziecięca (STICSA-C) został zaadaptowany z wersji dla dorosłych, STICSA. (37) STICSA-C składa się z dwóch oddzielnych skal samoopisowych, z których każda zawiera 21 pozycji, służących do pomiaru dwóch różnych koncepcji lęku: lęku jako stanu i lęku jako cechy. Ten ostatni prosi dzieci, aby reagowały na przedmioty, wskazując ogólnie, jak się czują; ta pierwsza prosi dzieci, aby odpowiedziały, jak się teraz czują, w tym momencie. Unikalne dla STICSA-C pozycje na każdej skali wyraźnie i stabilnie oceniają poznawcze i somatyczne objawy lęku. Dzieci proszone są o udzielenie odpowiedzi przy użyciu 4-stopniowej skali (tj. od „Nigdy” do „Prawie zawsze” w formularzu Cecha oraz od „Wcale” do „Bardzo” w formularzu Stan). Somatyczne i poznawcze podskale skali STICSA-C zostaną użyte jako miara lęku-cechy, podczas gdy te podskale skali stanu zostaną użyte jako miara lęku-stanu w analizie statystycznej.

7. Nasilenie objawów żołądkowo-jelitowych

   Nasilenie objawów zostanie określone odpowiednio dla bólu, nudności i wzdęć, na 10-punktowej skali, gdzie 0=brak, a 10=najsilniejsze za pomocą Globalnej Skali Odpowiedzi.

8. Histologia

W przypadku osób poddawanych endoskopii rutynowe biopsje uzyskane w ramach zwykłej opieki będą oceniane w sposób zaślepiony pod kątem gęstości eozynofili. Ocena immunohistochemiczna tkanki zostanie przeprowadzona z użyciem antytryptazy i anty-CD4. Gęstości komórek odpowiednio dla eozynofili, komórek tryptazo-dodatnich i komórek CD4-dodatnich zostaną określone odpowiednio dla próbek z jamy żołądka i opuszki dwunastnicy. Co najmniej pięć pól o dużej mocy zostanie ocenionych z określeniem odpowiednio średniej i szczytowej liczby komórek. Diagnozy patologiczne zostaną określone na podstawie oceny patologa w ramach rutynowej opieki.